本發(fā)明屬于油橄欖育種，具體涉及一種油橄欖四倍體的誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)：

1、油橄欖(olea?europaea?l.)是木犀科木犀欖屬的常綠喬木，是重要的油料作物。由新鮮油橄欖果實(shí)冷榨而成的橄欖油是天然優(yōu)質(zhì)食用植物油，富含營(yíng)養(yǎng)和功能活性成分，是藥食兩用佳品，被譽(yù)為“液體黃金”，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而，在橄欖油的生產(chǎn)加工過程中會(huì)產(chǎn)生大量的果渣。根據(jù)統(tǒng)計(jì)，每100kg的鮮果會(huì)產(chǎn)生35～40kg的果渣，其成分主要是油橄欖果皮、果核和殘余的果肉。目前，油橄欖果實(shí)的加工工藝主要有兩相分離工藝和三相分離工藝，但無論哪種工藝都無法做到100％提油率，果渣的含油量仍在5％～8％。雖然能使用化學(xué)試劑提取殘留果渣油，但受到成本和技術(shù)的限制，提取出的果渣油不能食用，只能用于工業(yè)領(lǐng)域，造成了極大的浪費(fèi)。

2、多倍體現(xiàn)象在高等植物中廣泛存在，被認(rèn)為是植物適應(yīng)環(huán)境及物種形成的重要機(jī)制之一。除了可以直接快速產(chǎn)生新品種外，亦是重要的種質(zhì)資源。研究表明，多倍化使得植物的蛋白質(zhì)合成能力和效率提高，使其形態(tài)、生長(zhǎng)發(fā)育、抗逆能力、育性等形態(tài)學(xué)與生理學(xué)特征發(fā)生變化，為選育新的植物品種和種質(zhì)資源的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。人工誘導(dǎo)的多倍體一般具有生長(zhǎng)旺盛、果實(shí)大、少籽或無籽、產(chǎn)量高、適應(yīng)性和抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)，且可以通過無性繁殖固定優(yōu)良性狀，在生產(chǎn)上長(zhǎng)期利用。通過多倍體油橄欖的培育，獲得果大、小核甚至無核的油橄欖勢(shì)必將為油橄欖產(chǎn)業(yè)帶來革命式的突破。同時(shí)，多倍化導(dǎo)致作物代謝與生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)度的改變，亦會(huì)影響多倍體作物果實(shí)內(nèi)含物的組分和含量，提高果實(shí)和橄欖油的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。然而，雖然果樹多倍體的人工誘導(dǎo)技術(shù)已經(jīng)成熟，但油橄欖多倍體誘導(dǎo)的研究仍然滯后。如何將多倍體誘導(dǎo)技術(shù)應(yīng)用于油橄欖上、獲得高產(chǎn)高效的植株，是目前亟待解決的的技術(shù)問題。

3、背景技術(shù)部分的內(nèi)容僅僅是發(fā)明人所知曉的技術(shù)，并不當(dāng)然代表本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的一個(gè)或多個(gè)問題，本發(fā)明一方面提供一種油橄欖四倍體的誘導(dǎo)方法，其包括使用誘導(dǎo)液對(duì)油橄欖無菌組培苗的子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理，其中所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.1％～0.5％的秋水仙素和0.02％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

2、在一些實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.3％～0.5％的秋水仙素和0.03％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

3、在一些實(shí)施方式中，所述使用誘導(dǎo)液對(duì)油橄欖無菌組培苗的子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理為采用滴液法對(duì)子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理，其中所述滴液法的操作方式為：用無菌注射器將誘導(dǎo)液的液滴滴在兩片子葉間，液滴干涸后，需及時(shí)補(bǔ)滴；處理結(jié)束后，用蒸餾水洗凈處理部位。

4、在一些實(shí)施方式中，所述處理的時(shí)間為22-26h。

5、在一些實(shí)施方式中，所述油橄欖無菌組培苗的獲得方式為將油橄欖種子的種胚移植入培養(yǎng)基中培養(yǎng)12-16天，其中所述培養(yǎng)基的配方為：murashige&skoog?basal?medium(ms)+0.04-0.06mg/l?ga+20-30g甘露醇+3-4g植物凝膠，ph＝6.0。

6、在一些實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)方法的四倍體得率為16％以上。

7、在一些實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)方法的四倍體得率為24％以上。

8、本發(fā)明另一方面提供一種油橄欖四倍體的培育方法，其在包括上述的誘導(dǎo)方法的基礎(chǔ)上，還包括對(duì)四倍體誘導(dǎo)后的組培苗進(jìn)行煉苗處理，并在煉苗后移栽入土壤中。

9、本發(fā)明再一方面還提供一種適用于油橄欖四倍體誘導(dǎo)的誘導(dǎo)液，其為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.1％～0.5％的秋水仙素和0.02％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

10、在一些實(shí)施方式中，所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.3％～0.5％的秋水仙素和0.03％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

11、本發(fā)明具有以下有益效果：

12、(1)本發(fā)明提供的四倍體誘導(dǎo)方法中，使用秋水仙素+安磺靈作為誘導(dǎo)劑，能夠有效誘導(dǎo)四倍體發(fā)生，同時(shí)還能最大程度的保證誘導(dǎo)四倍體的成活率。

13、(2)本發(fā)明的提供的四倍體誘導(dǎo)方法中，采用滴液法，其相比于浸泡法，具有四倍體植株死亡率低、效率高的優(yōu)勢(shì)。

14、(3)本發(fā)明提供的四倍體培育方法中，直接種植種胚相比于傳統(tǒng)萌發(fā)的好處：成活率高，環(huán)境穩(wěn)定、液滴不易蒸發(fā)。

技術(shù)特征：

1.一種油橄欖四倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)方法包括使用誘導(dǎo)液對(duì)油橄欖無菌組培苗的子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理，其中所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.1％～0.5％的秋水仙素和0.02％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.3％～0.5％的秋水仙素和0.03％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述使用誘導(dǎo)液對(duì)油橄欖無菌組培苗的子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理為采用滴液法對(duì)子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理，其中所述滴液法的操作方式為：用無菌注射器將誘導(dǎo)液的液滴滴在兩片子葉間，液滴干涸后，需及時(shí)補(bǔ)滴；處理結(jié)束后，用蒸餾水洗凈處理部位。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述處理的時(shí)間為22-26h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述油橄欖無菌組培苗的獲得方式為將油橄欖種子的種胚移植入培養(yǎng)基中培養(yǎng)12-16天，其中所述培養(yǎng)基的配方為：murashige&skoog?basal?medium(ms)+0.04-0.06mg/l?ga+20-30g甘露醇+3-4g植物凝膠，ph＝6.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)方法的四倍體得率為16％以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)方法的四倍體得率為24％以上。

8.一種油橄欖四倍體的培育方法，其特征在于，所述培育方法在包括權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的誘導(dǎo)方法的基礎(chǔ)上，還包括對(duì)四倍體誘導(dǎo)后的組培苗進(jìn)行煉苗處理，并在煉苗后移栽入土壤中。

9.一種適用于油橄欖四倍體誘導(dǎo)的誘導(dǎo)液，其特征在于，所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.1％～0.5％的秋水仙素和0.02％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的誘導(dǎo)液，其特征在于，所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜水溶液作為溶劑配制的含有0.3％～0.5％的秋水仙素和0.03％～0.04％的安磺靈的混合溶液。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種油橄欖四倍體的誘導(dǎo)方法，屬于油橄欖育種領(lǐng)域。本發(fā)明提供的誘導(dǎo)方法包括使用誘導(dǎo)液對(duì)油橄欖無菌組培苗的子葉間的生長(zhǎng)點(diǎn)處進(jìn)行處理，其中所述誘導(dǎo)液為使用0.2％二甲基亞砜(DMSO)水溶液作為溶劑配制的含有0.1％～0.5％的秋水仙素和0.02％～0.04％的安磺靈的混合溶液。本發(fā)明的方法可有效誘導(dǎo)油橄欖四倍體的產(chǎn)生，并且兼具有相對(duì)較低的材料死亡率和較高的材料倍性變異率。

技術(shù)研發(fā)人員：饒國(guó)棟,李雨霏,王晨合,崔祺禛,樊育彤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2