本發(fā)明屬于蘋果組培繁育，尤其涉及一種乙女蘋果實生苗的組培方法。

背景技術：

1、蘋果品種資源十分豐富，在鮮食加工果用和砧木用有許多優(yōu)良品種。蘋果的育種周期長，基因編輯育種能夠針對特定基因進行改造，在蘋果育種中有很好的應用前景。但是蘋果的遺傳轉(zhuǎn)化非常困難，導致基因編輯技術在蘋果遺傳改良中的應用存在很大難度，其中主要制約因素之一是蘋果組培苗不易分化、繁殖系數(shù)低。目前，大多數(shù)科研院所采用蘋果遺傳轉(zhuǎn)化品種是‘嘎啦3’，‘嘎啦3’是從‘嘎啦’蘋果中選出的繁殖系數(shù)高、適宜于遺傳轉(zhuǎn)化的優(yōu)良實生苗。為進一步擴大基因編輯在蘋果品種改良的應用范圍，提供更多品種的繁育系數(shù)高，適于遺傳轉(zhuǎn)化的實生苗是非常必要的。

2、隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，觀光果業(yè)興起，乙女蘋果因果個較小，作為一個觀賞蘋果資源的小果品種，逐漸引起人們的廣泛關注。又因其果實可全面著色，故常在果實著色試驗中作試驗材料來使用。但是蘋果組培苗繁殖系數(shù)的高低受不同因素影響，如品種、外植體類型、植物激素種類及濃度等，對于乙女蘋果尚沒有一種繁殖系數(shù)高、適宜于遺傳轉(zhuǎn)化的實生組培苗的培育方法。

技術實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種以種胚為外植體，選育高繁殖系數(shù)乙女蘋果實生苗的組培方法，本發(fā)明對基因工程遺傳改良具有積極意義，也對后續(xù)進行工廠化大量選育高繁殖系數(shù)優(yōu)質(zhì)種苗和脫毒苗起到至關重要的作用。

2、本發(fā)明提供了一種乙女蘋果實生苗的組培方法，包括以下步驟：

3、1)乙女蘋果種子消毒、去除種皮，將切除子葉后的種胚接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中進行萌發(fā)，獲得組培苗；

4、2)從所述組培苗上切取不定芽，接種到增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)獲得實生苗；

5、所述增殖培養(yǎng)基為：ms+6-ba?0.5～0.80mg/l+naa?0～0.15mg/l+iaa?0～0.15mg/l+蔗糖25～35g/l+瓊脂粉5～9g/l，其中naa和iaa不同時為0。

6、優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基為：ms+6-ba?0.7～0.75mg/l+naa?0.08～0.12mg/l+蔗糖28～32g/l+瓊脂粉6～7g/l。

7、優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)的時間為25～35d。

8、優(yōu)選的，步驟2)選擇苗高1.5～2.0cm，生長健壯、長勢相近的組培苗切取不定芽。

9、優(yōu)選的，所述萌發(fā)培養(yǎng)基為ms+6-ba?1.2～1.7mg/l+naa?0.1～0.3mg/l+蔗糖45～55g/l+瓊脂粉5～8g/l。

10、優(yōu)選的，所述萌發(fā)包括依次進行的暗培養(yǎng)和正常光照培養(yǎng)，所述暗培養(yǎng)的溫度為3～5℃，所述暗培養(yǎng)的時間為6～8d。

11、優(yōu)選的，所述正常光照培養(yǎng)的溫度為25±2℃，光照周期為16h/8h，光照強度為1500～2500lx，空氣濕度為70％～80％，所述正常光照培養(yǎng)的時間為28～32d。

12、優(yōu)選的，步驟1)所述的消毒包括依次進行的洗潔精清洗、酒精浸泡和次氯酸鈉溶液浸泡，所述酒精浸泡的時間為0.5～1.5min，所述次氯酸鈉溶液浸泡的時間為8～12min，所述次氯酸鈉溶液的體積濃度為1.5～2.5％。

13、優(yōu)選的，其特征在于，步驟1)所述的乙女蘋果種子為發(fā)育成熟且健康飽滿的種子

14、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明還提供的乙女蘋果實生苗的組培方法是以種胚為外植體，與傳統(tǒng)組織培養(yǎng)外植體，如莖段、不定芽等相比，種胚為外植體具有更好的分化繁殖能力，獲得的組培苗的再生能力比以其他材料為外植體獲得的組培苗再生能力強，繁殖系數(shù)高。本發(fā)明通過對萌發(fā)、增殖培養(yǎng)階段的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件的限定，進一步的提高了繁殖系數(shù)；在本發(fā)明的培育方式下，乙女組培苗有較高的繁殖系數(shù)，培育出的乙女組培苗生長健壯，葉片堅挺。

技術特征：

1.一種乙女蘋果實生苗的組培方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的組培方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)基為：ms+6-ba?0.7～0.75mg/l+naa?0.08～0.12mg/l+蔗糖28～32g/l+瓊脂粉6～7g/l。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的組培方法，其特征在于，所述增殖培養(yǎng)的時間為25～35d。

4.根據(jù)權利要求3所述的組培方法，其特征在于，步驟2)選擇苗高1.5～2.0cm，生長健壯、長勢相近的組培苗切取不定芽。

5.根據(jù)權利要求1所述的組培方法，其特征在于，所述萌發(fā)培養(yǎng)基為ms+6-ba?1.2～1.7mg/l+naa?0.1～0.3mg/l+蔗糖45～55g/l+瓊脂粉5～8g/l。

6.根據(jù)權利要求5所述的組培方法，其特征在于，所述萌發(fā)包括依次進行的暗培養(yǎng)和正常光照培養(yǎng)，所述暗培養(yǎng)的溫度為3～5℃，所述暗培養(yǎng)的時間為6～8d。

7.根據(jù)權利要求6所述的組培方法，其特征在于，所述正常光照培養(yǎng)的溫度為25±2℃，光照周期為16h/8h，光照強度為1500～2500lx，空氣濕度為70％～80％，所述正常光照培養(yǎng)的時間為28～32d。

8.根據(jù)權利要求1所述的組培方法，其特征在于，步驟1)所述的消毒包括依次進行的洗潔精清洗、酒精浸泡和次氯酸鈉溶液浸泡，所述酒精浸泡的時間為0.5～1.5min，所述次氯酸鈉溶液浸泡的時間為8～12min，所述次氯酸鈉溶液的體積濃度為1.5～2.5％。

9.根據(jù)權利要求1所述的組培方法，其特征在于，步驟1)所述的乙女蘋果種子為發(fā)育成熟且健康飽滿的種子。

技術總結
本發(fā)明提供了一種乙女蘋果實生苗的組培方法，屬于蘋果組培繁育技術領域，所述組培方法，包括以下步驟：1)乙女蘋果種子消毒、去除種皮，將切除子葉后的種胚接種于萌發(fā)培養(yǎng)基中進行萌發(fā)，獲得組培苗；2)從所述組培苗上切取不定芽，接種到增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)獲得實生苗。本發(fā)明的組培方法是以種胚為外植體，種胚具有更好的分化繁殖能力，獲得的組培苗的再生能力比以其他材料為外植體獲得的組培苗再生能力強，繁殖系數(shù)高。

技術研發(fā)人員：馮守千,唐子玉
受保護的技術使用者：山東農(nóng)業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/9