本發(fā)明屬于生物技術(shù)育種領(lǐng)域，具體涉及一種基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法。

背景技術(shù)：

1、羊草（ leymus?chinensis）具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，它抗寒、抗旱、耐堿，耐瘠薄，耐風(fēng)沙，而且葉量多，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，適口性好，各類家禽一年四季均喜食，其根莖穿透侵占能力較強(qiáng)，能夠防風(fēng)固沙，是極重要的禾本科牧草和生態(tài)草。羊草分布范圍廣泛，種質(zhì)資源較多。

2、目前，在培育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)的羊草新品種上具有一定技術(shù)瓶頸，比如針對(duì)羊草的?“三低”問(wèn)題，即抽穗率低、結(jié)實(shí)率低、發(fā)芽率低，較難有更好的突破，而利用轉(zhuǎn)基因或基因編輯技術(shù)來(lái)獲得優(yōu)異羊草新種質(zhì)是一種較好的選擇。羊草的組培再生體系是開(kāi)展轉(zhuǎn)基因或基因編輯研究的基礎(chǔ)，羊草幼穗是誘導(dǎo)羊草植株再生的最佳外植體選擇。但目前已公布的利用幼穗構(gòu)建羊草再生體系的相關(guān)報(bào)道中，誘導(dǎo)愈傷、分化及生根成苗步驟分別在不同的培養(yǎng)基中進(jìn)行，整體操作較為繁瑣，耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，而且誘導(dǎo)出愈率和分化率也不夠好。

3、因此，現(xiàn)有技術(shù)中亟需一種操作更加簡(jiǎn)單、用時(shí)更短、誘導(dǎo)出愈率和分化率更高的利用羊草幼穗獲得再生植株的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種操作更加簡(jiǎn)單、用時(shí)更短、誘導(dǎo)出愈率和分化率更高的基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法。

2、本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法，包括如下步驟：

3、1）取穗；

4、2）剝穗消毒；

5、3）直接成苗法：將幼穗接種于培養(yǎng)基中，置于黑暗的25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20d后，轉(zhuǎn)移至新?lián)Q的所述培養(yǎng)基中，置于光照16?h、黑暗8?h的25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20d，后轉(zhuǎn)移至新?lián)Q的所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，之后轉(zhuǎn)移至盛裝有新?lián)Q的所述培養(yǎng)基的錐形瓶中再培養(yǎng)15天，植株練苗后移栽至滅菌的營(yíng)養(yǎng)土中；所述培養(yǎng)基包括4.4?g/l?ms、30g/l蔗糖、8g/l瓊脂及2mg/l2,4-d，所述培養(yǎng)基的ph值為5.8。

6、所述取穗為取羊草旗葉下方露出莖部長(zhǎng)度2-3cm時(shí)期的、葉鞘包裹的幼穗于冰盒中，存放于4℃冰箱。

7、所述剝穗消毒為用75%?v/v酒精溶液噴灑幼穗外表面后，將幼穗放至超凈工作臺(tái)上，再用75%酒精浸泡的無(wú)菌棉球擦拭幼穗的葉鞘處，然后將被葉鞘包裹的幼穗剝出，用無(wú)菌紗布包裹后放入錐形瓶中，用75%?v/v酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗3次，再用10%?v/v次氯酸鈉溶液浸泡8min，無(wú)菌水沖洗3次，最后用30%?v/v過(guò)氧化氫溶液浸泡3min，無(wú)菌水沖洗5次；消毒過(guò)程中始終搖晃錐形瓶，使幼穗與溶液充分接觸。

8、本發(fā)明的有益效果是：在本發(fā)明中，誘導(dǎo)愈傷、分化、生根過(guò)程均采用同一培養(yǎng)基配方，只需要配置同一培養(yǎng)基即可滿足整個(gè)操作過(guò)程使用，無(wú)需對(duì)應(yīng)于誘導(dǎo)愈傷、分化、生根過(guò)程分別配置不同配方的培養(yǎng)基，本發(fā)明操作更加簡(jiǎn)單。本發(fā)明整體用時(shí)更短，成本更低。本發(fā)明誘導(dǎo)出愈率和分化率更高。

技術(shù)特征：

1.一種基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法，其特征在于包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法，其特征在于：所述取穗為取羊草旗葉下方露出莖部長(zhǎng)度2-3cm時(shí)期的、葉鞘包裹的幼穗于冰盒中，存放于4℃冰箱。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法，其特征在于：所述剝穗消毒為用75%?v/v酒精溶液噴灑幼穗外表面后，將幼穗放至超凈工作臺(tái)上，再用75%酒精浸泡的無(wú)菌棉球擦拭幼穗的葉鞘處，然后將被葉鞘包裹的幼穗剝出，用無(wú)菌紗布包裹后放入錐形瓶中，用75%?v/v酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗3次，再用10%?v/v次氯酸鈉溶液浸泡8min，無(wú)菌水沖洗3次，最后用30%?v/v過(guò)氧化氫溶液浸泡3min，無(wú)菌水沖洗5次；消毒過(guò)程中始終搖晃錐形瓶，使幼穗與溶液充分接觸。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種基于同一培養(yǎng)基的羊草幼穗組培獲得再生植株的方法，包括如下步驟：1）取穗；2）剝穗消毒；3）直接成苗法：將幼穗接種于培養(yǎng)基中，置于黑暗的25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20d后，轉(zhuǎn)移至新?lián)Q的所述培養(yǎng)基中，置于光照16?h、黑暗8?h的25℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)20d，后轉(zhuǎn)移至新?lián)Q的所述培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天，之后轉(zhuǎn)移至盛裝有新?lián)Q的所述培養(yǎng)基的錐形瓶中再培養(yǎng)15天，植株練苗后移栽至滅菌的營(yíng)養(yǎng)土中；所述培養(yǎng)基包括MS、蔗糖、瓊脂及2,4?D，pH值為5.8。在本發(fā)明中，整個(gè)過(guò)程均采用同一培養(yǎng)基配方，只需要配置同一培養(yǎng)基即可滿足整個(gè)操作過(guò)程使用，操作更加簡(jiǎn)單。本發(fā)明整體用時(shí)更短，成本更低，誘導(dǎo)出愈率和分化率更高。

技術(shù)研發(fā)人員：田春育,萬(wàn)文雅,武自念,楊艷婷,宮文龍,馮玉梅,劉樂(lè)萌
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6