本發(fā)明涉及微生物，特別涉及一種生防海洋源青霉菌及其應用。

背景技術：

1、世界熱帶作物產業(yè)主要集中分布于東南亞及南亞，南美洲的亞馬遜河流域，非洲的剛果河流域及幾內亞灣沿岸等地。其中，東南亞地區(qū)是全球熱帶經濟作物最大產出地，如泰國是世界最大的天然橡膠生產國和出口國，其產量最高時曾占到世界橡膠生產總量的40%；印度尼西亞是世界最大的油棕和椰子生產國；菲律賓是世界最大的椰子出口國。近年來，世界熱帶農業(yè)迅猛發(fā)展，熱帶農業(yè)已經成為世界主要熱帶國家的重要經濟來源和支柱產業(yè)。世界95%的熱帶作物生產在發(fā)展中國家，80%的消費主要集中在發(fā)達國家。可以說，世界對熱帶作物產品需求巨大，這將有力地推動世界熱帶作物產業(yè)發(fā)展迅猛。世界主要熱帶作物包括天然橡膠、木薯、甘蔗和油棕等經濟作物，香蕉、菠蘿、芒果和椰子等熱帶水果，咖啡和可可等飲料作物，以及以檳榔為代表的熱帶藥用植物。

2、以芒果為例，芒果在全球70多個國家廣泛種植。由膠孢炭疽病菌（ colletotrichum? gloeosporioides）引起的芒果炭疽病是導致果實品質逐漸下降的真菌性疾病之一。該病原體可以在生長和發(fā)育過程中感染植物，也可以攻擊收獲的芒果。目前，一些化學品如苯菌靈、多菌靈、代森錳鋅和咪鮮胺可用于控制炭疽病。然而，長期使用會導致環(huán)境污染和水果中的化學殘留，此外，膠孢炭疽病菌可能對許多殺真菌成分產生耐藥性。因此，有必要探索有效和安全的殺菌劑作為傳統(tǒng)殺菌劑的替代策略。

3、生物農藥作為一種新型的綠色農藥，除了可以殺蟲殺菌之外，還能夠對植物的生長進行調理和誘導植物對一些病原菌的抗性，而且容易被降解，對人畜安全和環(huán)境影響小。與其它生物農藥相比，微生物源生物農藥具有發(fā)酵工藝簡單及生產成本低，生產周期短，開發(fā)利用途徑多、不易產生抗性、容易進行遺傳改良等多重優(yōu)點，成為生物農藥領域里的研究熱點。

技術實現思路

1、針對現有技術的上述缺陷，本發(fā)明提出一種生防海洋源青霉菌及其應用，以解決上述背景技術提出的問題。

2、為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

3、一種生防海洋源青霉菌在防治熱帶作物病原菌上的應用，所述熱帶作物病原菌為橡膠枯萎病病原菌、椰子灰斑病病原菌、小麥赤霉病病原菌、黃瓜疫霉根腐病病原菌、油梨疫霉根腐病病原菌、橡膠炭疽病病原菌、芒果炭疽病病原菌、劍麻斑馬紋病病原菌、橡膠紅根病病原菌、橡膠褐根病病原菌、咖啡炭疽病病原菌、柱花草炭疽病病原菌、香蕉炭疽病病原菌；

4、所述生防海洋源青霉菌命名為penicillium?sp.?dsf059，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（cctcc），保藏日期：2023年11月23日；保藏編號：cctcc?no：m?20232310。

5、優(yōu)選地，所述橡膠枯萎病病原菌為尖孢鐮刀菌（ fusarium?oxysporum），椰子灰斑病病原菌為擬盤多毛胞菌（ pestalotiopsis?palmarum），小麥赤霉病病原菌為禾谷鐮刀菌（ fusarium?graminearum），黃瓜疫霉根腐病病原菌為黃瓜疫霉菌（ phytophthora? melonis），油梨疫霉根腐病病原菌為樟疫霉（ phytophthoracinnamomi），橡膠炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌（ colletotrichum?gloeosporioides?strainrc178），芒果炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌（ colletotrichum?gloeosporioides?strain?171-1），劍麻斑馬紋病病原菌為煙草疫霉菌（ phytophthora?nicothianae），橡膠紅根病病原菌為橡膠靈芝菌（ ganoderma? pseudoferreum），橡膠褐根病病原菌為有害木層孔菌（ phellinus?noxius），咖啡炭疽病病原菌為咖啡刺盤孢菌（ colletotrichum?coffeanum），柱花草炭疽病病原菌為膠孢炭疽菌（ colletotrichum?gloeosporioides?strainch008），香蕉炭疽病病原菌為香蕉炭疽菌（ colletotrichum?musae）。

6、優(yōu)選地，所述生防海洋源青霉菌能通過產生嗜鐵素、葡聚糖酶、酪蛋白酶、纖維素酶、殼聚糖酶和幾丁質酶來抑制病原菌孢子的萌發(fā)，并水解病原菌細胞壁，以促進熱帶作物生長。

7、優(yōu)選地，所述熱帶作物為橡膠、椰子、小麥、黃瓜、油梨、芒果、劍麻、咖啡、柱花草、香蕉中的一種。

8、優(yōu)選地，對芒果炭疽病病原菌的防治方法為：用生防海洋源青霉菌培養(yǎng)液處理離體葉片或采收后的芒果。

9、優(yōu)選地，所述生防海洋源青霉菌培養(yǎng)液的制備方法包括以下步驟：

10、（1）孢子懸浮液制備：將生防海洋源青霉菌菌株接種到pda固體培養(yǎng)基中，放置在溫度28℃培養(yǎng)5d，使菌株活化，加入無菌的體積分數為0.05%吐溫80溶液洗脫孢子，制備孢子懸浮液；

11、（2）發(fā)酵處理：取孢子懸浮液按3%體積比例的接種量接種于pdb培養(yǎng)基中，在28℃和180r/min條件下發(fā)酵培養(yǎng)7d，得到發(fā)酵液；

12、（3）過濾：將步驟（2）所得到的發(fā)酵液進行過濾除菌，收集濾液，即為生防海洋源青霉菌培養(yǎng)液。

13、優(yōu)選地，步驟（1）所述pda固體培養(yǎng)基每升由以下成分組成：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15-30g，陳海水400ml，去離子水余量。

14、優(yōu)選地，步驟（1）所述孢子懸浮液的濃度為1.0×108cfu/ml。

15、優(yōu)選地，步驟（2）所述pdb培養(yǎng)基每升由以下成分組成：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，陳海水400ml，去離子水余量。

16、優(yōu)選地，步驟（1）所述pda固體培養(yǎng)基也可用以下培養(yǎng)基替代用于青霉菌的培養(yǎng)，涉及的試劑組分和培養(yǎng)基信息如下：

17、查氏母液：硝酸150g，氯化鉀25g，七水硫酸鎂25g，七水硫酸亞鐵0.5g，去離子水定容至500ml。

18、微量元素母液：無水硫酸銅0.25g，七水硫酸鋅：0.5g，去離子水定容至500ml。

19、馬丁培養(yǎng)基：葡萄糖10g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀1g，七水硫酸鎂0.5g，0.1%孟加拉紅溶液3.3ml，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

20、pda培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

21、mea培養(yǎng)基：麥芽提取物20g，蛋白胨1g，葡萄糖20g，微量元素母液10ml，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

22、cya培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀1g，酵母提取物5g，蔗糖30g，查氏母液10ml，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

23、oa培養(yǎng)基：燕麥30g，微量元素母液10ml，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

24、yes培養(yǎng)基：酵母提取物20g，蔗糖150g，七水硫酸鎂0.5g，微量元素母液10ml，瓊脂15-20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

25、v8培養(yǎng)基：v8果汁濾液100ml，碳酸鈣1g，瓊脂15-20g，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

26、pdb培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

27、cyb培養(yǎng)基：磷酸氫二鉀1g，酵母提取物5g，蔗糖30g，查氏母液10ml，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

28、g25nb培養(yǎng)基：查氏母液10ml，磷酸氫二鉀1g，酵母提取物5g，蔗糖30g，甘油250g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

29、meb培養(yǎng)基：麥芽提取物20g，蛋白胨1g，葡萄糖20g，微量元素母液10ml，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

30、ob培養(yǎng)基：燕麥30g，微量元素母液10ml，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

31、馬丁液體培養(yǎng)基：葡萄糖10g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀1g，七水硫酸鎂0.5g，0.1%孟加拉紅溶液3.3ml，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

32、cb培養(yǎng)基：蔗糖30g，硝酸鈉3g，磷酸氫二鉀1g，氯化鉀0.5g，七水硫酸鎂05g，七水硫酸亞鐵0.01g，陳海水400ml，蒸餾水定容至1l，ph自然。121℃，滅菌20min。待涼至65℃以下，在超凈工作臺中，加入經0.22um濾膜超濾滅菌的100mg/ml的硫酸鏈霉素、100mg/ml的氯霉素、100mg/ml的氨芐青霉素各1ml。

33、纖維素酶檢測培養(yǎng)基：(nh4)2so42.0g，mgso4·7h2o?0.5g，k2hpo41.0g，nacl?0.5g，羧甲基纖維素鈉2.0g，瓊脂22.0g，ddh2o?600ml，海水400ml，121℃滅菌20min，自然ph。

34、淀粉酶檢測培養(yǎng)基：淀粉20.0g，kcl?0.5g，nano32.0g，k3po41.0g，mgso4·7h2o0.5g，瓊脂18.0g，ddh2o?600ml，海水400ml，121℃滅菌20min，自然ph。

35、殼聚糖檢測培養(yǎng)基：殼聚糖10.0g，(nh4)2so42.5g，mgso4·7h2o?0.25g，k2hpo40.02g，nacl?4.0g，caco36.0g，瓊脂20.0g，ph6.0，ddh2o?600ml，海水400ml，121℃滅菌20min，自然ph。

36、幾丁質酶檢測培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g，2%的膠體幾丁質100g，k2hpo41g，kno31g，mgso40.5g，nacl?0.5g，feso40.01g，瓊脂20g，ddh2o?600ml，海水400ml，121℃滅菌20min，自然ph。

37、蛋白酶檢測：北京酷來搏科技有限公司的酪蛋白酶檢測培養(yǎng)(mm6051)。

38、葡聚糖酶檢測：北京酷來搏科技有限公司的β-1,3-葡聚糖培養(yǎng)(mm6220)。

39、嗜鐵素檢測：北京酷來搏科技有限公司的改良cas固體培養(yǎng)基(pm0821)。

40、與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

41、（1）海洋環(huán)境不同于陸地環(huán)境，作為世界上最大的生態(tài)系統(tǒng)，海洋環(huán)境中蘊含著多樣的微生物和活性物質。由于其不同的生活環(huán)境因素使其中的生物資源在生長代謝方面與陸生生物有很大不同，而成為巨大的有待于開發(fā)的資源庫，特別是近些年隨著海洋生物技術的發(fā)展，加上現代生物技術的應用，都促進了海洋微生物資源的開發(fā)利用，這為新型生物農藥前體的開發(fā)提供了豐富的候選資源。本發(fā)明公開了利用深海真菌來防治防治熱帶作物病原菌，不僅可以抑制病原菌的生長，還能夠對植物的生長進行調理和誘導植物對一些病原菌的抗性，而且容易被降解，對人畜安全和環(huán)境影響??；

42、（2）本發(fā)明公開了生防海洋源青霉菌對橡膠枯萎病病原菌、椰子灰斑病病原菌、小麥赤霉病病原菌、黃瓜疫霉根腐病病原菌、油梨疫霉根腐病病原菌、橡膠炭疽病病原菌、芒果炭疽病病原菌、劍麻斑馬紋病病原菌、橡膠紅根病病原菌、橡膠褐根病病原菌、咖啡炭疽病病原菌、柱花草炭疽病病原菌、香蕉炭疽病病原菌等熱帶作物病原菌均有防治作用，本發(fā)明為熱帶作物病原菌的防治提供新的方向，具有很好的開發(fā)應用前景。