專利名稱:動物基因分型方法
動物基因分型方法
本發(fā)明涉及通過對決定物理性狀變化的基因區(qū)域中基因分型并通過參考基因區(qū) 域中DNA確定是否該動物具有該基因的特定變化，而不是通過對基因自身的基因分型鑒定 來動物物理性狀的方法。具體地，本發(fā)明涉及確定牛是否具有酪蛋白A1蛋白基因或者 β -酪蛋白A2蛋白基因和因此奶牛在它們的奶中產生β _酪蛋白A1或β -酪蛋白A2的能 力。
背景
消費者在購買物品如牛奶和肉類產品時要求物美價廉。然而，許多消費者還希望 確保產品和生產系統(tǒng)被管理以最小化對人類健康的危險和最大化對人類健康的益處，同時 這些產品和生產系統(tǒng)對于環(huán)境和動物的健康是無害的。
熟知動物的遺傳對產量和產品質量、健康、環(huán)境和動物的健康問題具有重大影響。 通過使用遺傳試驗確定動物的表型對于實現(xiàn)具有有益特征的動物和動物產品的快速鑒定 和對于形成一組具有提高的產量和/或產品質量是一種有價值的工具。動物可以基于涉及 具有經濟利益的動物或動物產品性狀的遺傳學差異進行分組。對于奶制品工業(yè)，重要性狀 的實例為奶產量、奶蛋白含量、脂肪產量和與健康相關的奶的特定組分，例如酪蛋白A1 蛋白的缺乏或飽和脂肪的百分比。
在典型的遺傳試驗中，編碼涉及目標物理性狀的一種蛋白或一組蛋白的基因的 DNA序列將是公知的。從動物得到DNA樣品并組合使用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增、DNA片 段分析和數(shù)據處理以鑒定動物基因組中該基因的已知位置處存在的DNA。高度自動化的試 驗使得可以相對快速且有效地為許多動物確定基因或基因變體的存在，并因此顯示出物理 性狀的能力。
可通過單核苷酸多態(tài)性(SNP)鑒定負責動物的特定物理性狀的基因。SNP是一個 動物基因組中某處的DNA序列，其和另一動物的基因組相同位置處的DNA序列相差僅僅一 個核苷酸。即使如此小的差異也可能意味著動物顯示出特定物理性狀而另一動物不顯示該 性狀。
SNP的重要性的一個實例是奶牛的遺傳學組成，該遺傳學組成使得在其奶中產生 β-酪蛋白。通常，奶牛將在其奶中產生β-酪蛋白。然而，公知幾種β-酪蛋白變體，它 們包括A1、A2、Α3、B、C、D、E和F。A2、A3、D、E和F變體這一組和A1、B和C變體這一組之間 的一個差異是前一組在β _酪蛋白的67位具有脯氨酸殘基而后一組在67位具有組氨酸殘 基。該差異由編碼酪蛋白基因的編碼區(qū)的200位處用胞嘧啶核苷酸取代腺嘌呤核苷酸 確定。因此，通過鑒定并檢驗編碼動物的β-酪蛋白的SNP可能區(qū)分兩組β-酪蛋白變體。
許多報導指出人膳食中酪蛋白A1的存在和某些疾病的發(fā)生相關，特別是 糖尿病(Elliott, R. B.，Harris, D. P.，Hill, J. P.，Bibby，N. J.，Wasmuth, H. E.，I 型 (依賴胰島素的)糖尿病和牛奶酪蛋白變體消費，Diabetologia 1999 ；42 292~6 ； Wasmuth, H. E. , Rosenbauer, J. , Elliot, R. B. , McLachlan, C. , Erhardt, G. , Giani, G.,
Kolb, H.，德國β -酪蛋白A1消費和I型糖尿病的發(fā)生.Kongress der Europaischen Diabetesgesellschaftvom 28. -30. 09. 1999 布魯塞爾 / 比利時.Diabetologia 中出版的會議錄 42(Suppl. 1) :A88 ； 1999)和冠心病(McLach Ian, C. N. (2001) β-酪蛋白 Α1，局部缺血 性心臟病死亡和其他疾病Med. Hypotheses 56(2) :262_72)。
除了通過鑒定奶牛的奶中產生的一種或幾種特定β-酪蛋白變體對奶牛進行基 因分型，還熟知通過鑒定其具有的SNP確定奶?；蛐鸵垣@知是否該奶牛具有生產某種 β-酪蛋白變體的能力。PCT/NZ96/00039(公開號為WO 96/36239)中描述了基于這些基因 分型選擇奶牛的方法，該方法用于形成生產無這些酪蛋白A1變體，優(yōu)選地僅僅β _酪蛋白 A2變體的奶牛群。
研究已經表明SNPs，或者其他DNA變體(串連重復、插入-缺失)在預測疾病、動 物產品的質量，或者生產益處中是有價值的。然而，對于遺傳選擇用于分類、精選或配對動 物的情況下，基于使用單個SNP或性狀的選擇策略不是最理想的。這是因為SNPjn β-酪 蛋白基因中的SNP不隨機地和周圍DNA相關。圍繞基因分型的SNP的DNA區(qū)域可編碼一種 或多種功能，其也影響物理性狀。因此，基于單個SNP的選擇可無意中選擇到除了目標性狀 之外的性狀。
本發(fā)明人已經發(fā)現(xiàn)可能確定牛是否具有β-酪蛋白A1蛋白基因或者β-酪蛋白 A2蛋白基因，不是通過鑒定該基因的DNA，而是通過鑒定β -酪蛋白基因所處動物基因組區(qū) 域中的SNPs或單體型(haplotypes) (SNPs的組合)。
因此本發(fā)明的一個目的是提供對動物關于其酪蛋白基因進行基因分型的新 方法，或者至少提供公知方法的有用的備選方法。
發(fā)明概述
在本發(fā)明的一個方面中，提供了確定牛是否具有編碼酪蛋白A1蛋白的基因或編碼 酪蛋白A2蛋白的基因的方法，該方法通過檢測動物DNA這兩種基因任一基因中至少一種 DNA標記的存在，而不是檢測這兩種基因任一基因中一種DNA標記的存在。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，至少一種DNA標記的每一個代表一個單核苷酸 多態(tài)性(SNP)、串連重復或插入-缺失。優(yōu)選地，至少一種DNA標記代表SNP。
盡管該方法可用于確定公牛和奶牛的酪蛋白基因型，但是本發(fā)明的牛優(yōu)選為 奶牛。
動物的物理性狀可以是影響該動物生產的產品的質量和體積的任何性狀，或者可 以涉及該動物的疾病或失調，或者涉及疾病或失調的避免，優(yōu)選地，該性狀涉及奶牛的奶產 量，包括奶蛋白或奶脂肪的量或組成。一種或多種物理性狀包括，但不限于，或κ-酪 蛋白變體含量、乳清含量、蛋白質含量、脂肪含量、脂肪酸特征、共軛亞油酸含量、乳球蛋白 含量、乳鐵蛋白含量、體細胞數(shù)、日奶產率、脂肪產率、蛋白質產率和奶、脂肪和蛋白質的完 全泌乳產率。
在本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方案中，物理性狀為奶牛的奶中β-酪蛋白A2的存 在或缺乏。在一個備選實施方案中，物理性狀為奶牛的奶中β-酪蛋白A1的存在或缺乏。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，至少一個DNA標記是編碼β _酪蛋白A1的基因 的標記。在本發(fā)明的一個備選實施方案中，至少一個DNA標記是編碼酪蛋白A2的基因 的標記。
受試動物的DNA可從含有有核細胞的任何組織得到，該組織優(yōu)選為該動物的血 液、精液、毛或奶。[0021]優(yōu)選地，SNPs來自特羅斯牛(Bos taurus)的6號染色體。在一個優(yōu)選的實施方 案中，至少一種DNA標記為牛的β -酪蛋白基因區(qū)域中的一組8個SNP。
本發(fā)明的另一方面提供了生產基本無酪蛋白A1的牛奶的方法，包括步驟
a)根據本發(fā)明的第一方面確定是否一頭或多頭奶牛具有編碼蛋白質酪蛋白 A1的基因或編碼蛋白質β _酪蛋白A2的基因；
b)選擇不具有編碼蛋白質β _酪蛋白A1的基因的奶牛；和
c)從所選奶牛擠奶。
優(yōu)選地，通過該方法產生的奶為含有基本上都是β-酪蛋白A2的β-酪蛋白的奶。
在本發(fā)明的另一方面提供了通過按照本發(fā)明的第一方面的方法檢測每頭奶牛的 DNA形成奶牛群并選擇具有編碼β _酪蛋白A2并且不具有編碼β -酪蛋白A1的基因的那 些奶牛的方法。
另一方面提供了從按照本發(fā)明的第一方面的方法檢測的奶牛得到的牛奶。
本發(fā)明的另一方面提供了含有本發(fā)明牛奶或者從本發(fā)明牛奶加工而來的食物或食品。
本發(fā)明的再一方面提供了已經按照本發(fā)明的方法檢測的來自動物的精液或胚胎。 優(yōu)選地，該精液或胚胎用于使用人工繁殖技術生產后代。
發(fā)明詳述
本發(fā)明使得用戶可以基于遺傳學差異對一群家畜、或者來自動物的組織(如血 液、精液、毛發(fā)或奶)進行分組。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，這些遺傳學差異為SNP 或SNP的組合。這些SNP的使用，以及使得用戶能夠對一群動物分類，還能夠用于預測動物 表型。
涉及奶生產的性狀的實例包括奶產率、奶蛋白質組成、奶脂肪量和更特定的性狀 如β _酪蛋白變體的存在，飽和和不飽和脂肪的比例，和奶中存在的體細胞數(shù)。
變體酪蛋白通過這些蛋白總序列中少數(shù)氨基酸改變來區(qū)分。在牛中，β-酪蛋白 的A2和A1變體之間的差異為該蛋白67位從脯氨酸到組氨酸的單個氨基酸改變。相關SNP 在特羅斯牛的6號染色體上發(fā)生。
盡管其他β -酪蛋白變體在67位具有與脯氨酸相對的組氨酸，但是它們通常是少 數(shù)變體并且為了本發(fā)明描述的目的將通常被考慮為酪蛋白Α1。類似地，在67位具有脯 氨酸的那些酪蛋白變體(除了 酪蛋白A2)通常是少數(shù)變體并且將通常被考慮為酪 蛋白Α2。
可以確定是否?；騺碜耘５慕M織具有只編碼β-酪蛋白的A1變體(A1純合的)、 只編碼A2變體(A2純合的)或A1與A2變體的混合物(Α7Α2雜合的)。這使得可以鑒定產 生只含有β-酪蛋白Α1、只含有β-酪蛋白Α2，或者這兩種酪蛋白變體的混合物的家畜。其 還允許鑒定這樣的牛，所述牛能夠產生只含有β _酪蛋白Α1、只含有β _酪蛋白Α2、或者這 兩種酪蛋白變體的混合物的奶的后代。
這樣，可以形成擠奶奶牛群，它們生產具有特定性狀的奶，例如，缺少β-酪蛋白A1 蛋白或者僅存在β-酪蛋白變體的日-酪蛋白八2。
本發(fā)明的額外特征是一旦已經選擇了具有特定基因型或單體型的動物并從它們 產生奶，奶的起源或者其他產品如奶粉合加工的奶制品可以被證實從所選動物生產。其益處是使消費者相信該奶確實來自期望的表型或單體型動物。
特別地，本發(fā)明人已經表明可以在β-酪蛋白基因外的區(qū)域中容易地鑒定SNP，這 些SNP可預測β-酪蛋白類型。因此，這些SNP還可以預測，或者潛在地導致或部分導致與 β-酪蛋白等位基因相關的健康危險。已經鑒定并分析了具有8個SNP的一群家畜。這些 SNPA來自家畜的酪蛋白基因簇，其包括編碼β-酪蛋白的基因。估計該DNA區(qū)域由DNA的 約200-300kb組成。在不同個體中隨機相關的這8種SNP中，將預計具有2的8次方(28) 種可能組合(或單體型)的理論數(shù)。令人驚奇地，用這些SNP和這些SNP子集所觀察到的 單體型的數(shù)目比隨機預期的數(shù)目小得多。因此，使用SNPs之間的特定相關性的發(fā)現(xiàn)，僅使 用少數(shù)SNP可能正確地將家畜群分類成單體型組。更重要地，這些單體型可用于預測個體 或群體中特定表型，如α-SU a-S2、β-和κ -酪蛋白奶蛋白變體的身份。
檢查了一種或幾種SNP單體型和產量與產品質量性狀之間的關系。這些牛奶特定 的性狀包括與β-或κ-酪蛋白變體、乳清％、蛋白質％、脂肪％、脂肪酸特征(C4到C22)、 共軛亞油酸含量(CLA)、熔點、乳球蛋白含量、乳鐵蛋白含量、體細胞數(shù)、日奶產率、脂肪 產率、蛋白質產率、牛奶、脂肪和蛋白質的完全泌乳產率相關的特征。
發(fā)現(xiàn)在酪蛋白區(qū)單體型和產量和產品質量性狀，如體細胞數(shù)、脂肪％、蛋白質％、 β“酪蛋白產率和脂肪酸特征之間存在重要的相關性。
關于群體中相鄰DNA標記和這些標記的組合(即單體型)之間的非-隨機相關性， 和這些標記與單體型和物理性狀之間的關系的信息具有下面的潛在益處
1.可以修改基于單個標記選擇動物的選擇方法以避免或最小化不想要的物理性 狀的無意中擴增，該無意中擴增可來自將遺傳信息與對表型的已知或未知影響相連鎖的共 選擇。
2.基因組區(qū)域中SNP等位基因的特定組合(單體型)的鑒定，其提供了與該區(qū)域 中單個SNP相同或更好的產品質量的預測。
3. SNP等位基因子集的鑒定，其有效預測更大組中已知或未知SNP的變化。
4.以可用程度的準確性預測由于任何原因自身不能被基因分型的SNP的身份。
5.鑒定基因組區(qū)域內存在的主要相關組，在該區(qū)中新的、至今還未發(fā)現(xiàn)的DNA變 化將通常落入這些組。
本發(fā)明使得能夠鑒定SNP，并使用SNP和SNP單體型以
1.提供使用最少的SNP檢驗有效選擇、篩選或分組產生特定α-酪蛋白和/或 β-酪蛋白和/或κ-酪蛋白變體的方法。具體地，通過對少數(shù)相關SNP進行基因分型可以 推斷與酪蛋白變體相關的基因型和表型。與多個基因型或表型或者不能被檢驗的基因型連 鎖的相關標記的使用可以提供經濟和技術上的優(yōu)點。
2.預測奶牛的性能從而產品質量和來自該奶?；蚱浜蟠哪痰慕】涤绊?，和來自 酪蛋白區(qū)的單個SNP —樣好或者比其更好。
3.用最小數(shù)目的標記對牛群體中酪蛋白基因中的很多變化分類，從而提供根據預 測的性能或產品質量對牛分類或分組的有效方法。
4.提供選擇特定酪蛋白類型(例如，β-酪蛋白A2)而最小化相關酪蛋白中變體 頻率的改變的有效方法。
5.提供選擇其他酪蛋白基因或相關性狀，而同時增加特定群體中動物的酪蛋
6白A2的比例的方法。
通過參考下面的實施例更詳細地描述本發(fā)明，這些實施例闡明了發(fā)現(xiàn)SNP的步驟 和這些SNP可以怎樣使用。應該理解這些實施例不限制本發(fā)明的范圍。本技術領域：
中技術 人員將認識到這些步驟一般可用于發(fā)現(xiàn)動物基因組中有用的SNP。
實施例
實施例1 群體中SNP的鑒定
確定并分析了來自許多個體牛的asl、as2和β-酪蛋白基因的DNA序列以鑒定 SNP。這些序列的比較使得可以鑒定多態(tài)性序列。
設計并合成SEQ ID NO=I到SEQ ID. NO 14的寡核苷酸引物。這些序列基于特羅 斯牛α si (ACCESSION X59856)、α s2 (ACCESSI0匪94327)序列的公開序列。還設計了每個 引物對從而任何所得PCR產物將在其側翼端具有Xhol和EcoRl限制性內切酶位點。為合 適的引物對優(yōu)化PCR擴增的條件
SEQ ID NO :1，SEQ ID NO 2
SEQ ID NO :3，SEQ ID NO 4
SEQ ID NO :5，SEQ ID NO 6
SEQ ID NO -J, SEQ ID NO 8
SEQ ID NO :9，SEQ ID NO 10
SEQ ID NO :11，SEQ ID NO 12
SEQID NO :13，SEQ ID NO 14
從這些結果確定了相應于α si基因的外顯子1-2和外顯子3_6和α s2基因的外 顯子1-2和17-18的DNA區(qū)域給出預期大小的PCR產物。
從牛純化精液基因組DNA，這些牛以前已經被基因分型并且顯示為β-酪蛋白蛋 白的A1或A2變體的攜帶者。使用來自5個A1純合(A1DNA)和5個A2 (A2DNA)純合動物的 等摩爾濃度混合的基因組DNA擴增DNA。從A1和A2DNA擴增的PCR產物用高純PCR產物純 化試劑盒純化，用EcoRl和Xhol限制性內切酶消化，然后通過在70°C加熱20分鐘失活酶。 將這些樣品每一種的一部分連接到事先用Xhol和EcoRl限制酶消化的質粒pBluescript KS(Stratagene)中，用蝦堿性磷酸酶(Amersham PharmaciaBiotech Inc.)處理并最后在 70°C加熱失活20分鐘。
連接的質粒被用于化學轉化感受態(tài)大腸桿菌菌株XLl-Blue。含有來自A1或A2DNA 的插入子的各個菌落用克隆PCR分析。對于asl基因區(qū)，將來自外顯子3_6(來自A1和 A2DNA各3個)和外顯子1-2 (5個來自A1DNA, 5個來自A2DNA)的DNA進行質粒測序。在α s2 基因區(qū)，將來自外顯子1_2(來自A1和A2DNA各5個)和外顯子17_18(來自A1和A2DNA各 5個)的DNA進行質粒測序。這些序列的比較使得可以鑒定多態(tài)性序列和核苷酸。這些多 態(tài)性序列的實例在SEQ. ID. Nos 15-28中給出。
實施例2 =SNPs用作預測工具的用途
使用Wisconsin 軟件包 10. 2 版本(Genetics Computer Group (GCG)，Madison, Wise.)的程序通過比對分析序列。令人驚奇地，分析揭示許多SNP可以容易地用于區(qū)分A1 動物和A2動物。來自A1純合和A2純合的動物的α s2基因的序列比對揭示這些序列中許 多SNP直接與A1或A2動物連鎖相關。因此，如在
圖1中所示，對含有來自A1動物的5種合并DNA和來自5個A2動物的α S2基因的插入物的共10種質粒雙向從pbluescript質粒 的t7和t3引物位點測序。
使用程序 Gelstart、Gelenter> Gelmerge 禾口 Gelassemble 比對所有序列。 Gelassemble的結果在圖1中給出，其中來自Pl到P5_82_t3或t7的序列來自A1純合牛， 序列P6到P10-82_t3或t7的序列來自A2純合牛。在這些比對中給出共有序列。多個差異 或者多態(tài)性存在于來自不同個體的序列之間。許多這些差異為個體間存在的單個缺失或單 個核苷酸堿基差異(SNPs)。在這些序列中，664、926和1377位的三個SNP (從共有序列的第 一個堿基連續(xù)讀取)僅僅在A1動物序列中分別具有鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和T。相反， 在A2動物序列中，腺嘌呤(A)、G和胞嘧啶(C)分別在該序列的這些位置存在。664、926和 1377位的三個SNP以粗體、下劃線顯示。EcoRl (GAATTC)和Xho 1 (CTCGAG)限制性內切酶識 別位點也以粗體顯示。
這些核苷酸的身份也可以通過與測序不同的方法，特別是與基因組序列特異擴 增技術如聚合酶鏈式反應結合的方法來確定(Mullis，K.等，ColdSpring Harbor Symp. Quant. Biol. 51 :263-273 (1986) ；Erlich H.等，EP50，424 ;EP 84,796，EP 258,017， EP 237,362 ；Mullis, K. , EP 201,184 ；Mullis K.等，US 4, 683, 202 ；Erlich, H. , US 4，582，788 ；和Saiki, R.等，US4，683，194))。這些方法的實例包括外切核酸酶抗性方法(US 4，656，127)、用于分析DNA中多態(tài)位點的引物引導的核苷酸摻入方法(Komher，J. S.編輯， Nucl. Acids. Res. 17 :7779_7784 (1989) ；Sokolov, B. P.，Nucl. Acids Res. 18 3671(1990)； Syvanen, Α. -C.，等，Genomics 8 :684_692 (1990) ；Kuppuswamy, Μ. N.等，Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. Α. )88 1143-1147(1991) ；Prezant, Τ. R.等，Hum. Mutat. 1 159-164 (1992)； Ugozzoli, L.等(GATA 9 107-112 (1992) ；Nyren, P. Anal. Biochem. 208 171-175(1993))，“寡核苷酸連接測定法”(〃 OLA" ) (Landegren，U.等，Science 241 1077-1080(1988))，焦磷酸測序(Kitties 等 Cancer Epidemiol BiomarkersPrev 2001 Sep ； 10 (9) :943-7)，禾口 MassARRAY (Sequenom Corp.)。
實施例3 利用備選基因分型方法使用SNP預測基因型或表型
該實施例表明SNP(比實施例2中使用的更大的群體中)的身份可以用不同于DNA 測序的方法確定并且這些SNP可用于預測基因型或表型。特別地，使用基于PCR擴增、引物 延伸和最后用Sequenom質譜儀分析引物延伸產物的方法預測動物和來自動物的組織是否 含有編碼奶酪蛋白基因的A1 (或相反地A2)變體的基因的一份或兩份拷貝。
來自已知的雜合A1A2動物的精液用于奶牛的人工受精。從父獸和這些交配的后 代分離DNA樣品(來自奶)。獨立地確定關于表型上或基因型上A1或A2的后代的身份。 用 Sequenom Inc 的標準方法對共 71 個后代分析與 AC00069、AC00070、AC00055、AC00057、 AC00058、AC00059、AC00060、AC00061、AC00063 和 AC00064 相關的 SNP (見序列表)。除了 這些SNP，還確定了標記AC000069和AC000070的基因型，它們確定奶蛋白變體β -酪蛋白 A或B的身份。
分析來自具有完整基因型的個體的基因型以得到它們的單體型(即標記的組合 和組織，就像它們在其染色體上物理存在的)。最初，用Crimap包檢查SNP的異常，其中用 程序Simwalk得到母本和兩個父本單體型。來自分析這些SNP (包括確定β-酪蛋白奶表 型的SNP)的單體型在表1中給出。
8[0077]表1 來自牛個體的單體型
共得到38種單體型，它們由2種父本和36種母本單體型組成。然而，進一步觀察 發(fā)現(xiàn)僅有18種與這些動物相關的獨特單體型。更重要地，這些SNP或更具體地這些SNP的 一小部分可用于分辨具有A1或A2表型的動物。該研究表明在36頭動物和父獸中，將需要 僅僅基因分型一種SNP(AC00061)以成功地推斷幾乎所有這些動物的身份(即97%的準確 率)。對另外兩種SNP(AC00059和AC00063)的基因分型使得該群體中所有動物被按照A1 或A2基因型和表型成功地鑒定(見表2)。
表2 具有在β -酪蛋白基因外的標記單體型的β -酪蛋白基因型的預測[0081]
盡管本發(fā)明通過實施例描述，但是應該理解可以進行改變和修飾而不背離本發(fā)明 的范圍。此外，對特定特征存在已知的等價特征，這些等價特征并并入該說明書就像被特別 提到一樣。
權利要求
通過檢測動物DNA中是否存在β-酪蛋白A1或β-酪蛋白A2基因的至少一種DNA標記確定牛是否具有編碼蛋白質β-酪蛋白A1的基因或編碼蛋白質β-酪蛋白A2的基因的方法，其中至少一種DNA標記是SEQ IDNo21AC000061的SNP，位于編碼蛋白質αs2-酪蛋白的基因中。
2.權利要求
1所述的方法，其還包括檢測SEQID No :19AC000059的SNP和SEQ ID No 23AC000063 的 SNP 的存在。
3.權利要求
1所述的方法，其中牛為奶牛。
4.權利要求
3所述的方法，其中至少一種DNA標記的存在與奶牛產生的奶中β-酪蛋 白A1的存在或不存在相關。
5.權利要求
3所述的方法，其中至少一種DNA標記的存在與奶牛產生的奶中β-酪蛋 白A2的存在或不存在相關。
6.權利要求
1到5任一項所述的方法，其中至少一種DNA標記為用于編碼β-酪蛋白 A1的基因的標記。
7.權利要求
1到5任一項所述的方法，其中至少一種DNA標記為用于編碼β-酪蛋白 A2的基因的標記。
8.權利要求
1到5任一項所述的方法，其中牛的DNA從含有有核細胞的牛任一組織得到。
9.權利要求
8所述的方法，其中動物的DNA從該動物的血液、精液、毛發(fā)或奶得到。
10.產生基本無β-酪蛋白A1的奶的方法，該方法包括步驟a)根據權利要求
1確定是否一頭或多頭奶牛具有編碼蛋白質酪蛋白A1的基因或 編碼蛋白質酪蛋白A2的基因；a)選擇不具有編碼蛋白質β-酪蛋白A1的基因的奶牛；和b)從所選奶牛擠奶。
11.權利要求
10所述的方法，其中奶含有的β-酪蛋白基本上都是日-酪蛋白八2。
12.通過根據權利要求
1的方法檢測每頭奶牛的DNA并選擇具有編碼β_酪蛋白A2的 基因但不具有編碼β _酪蛋白A1基因的這些奶牛從而形成奶牛群的方法。
專利摘要
本發(fā)明涉及通過檢測牛DNA中至少一種DNA標記的存在(排除基因本身序列中存在的那些DNA標記)確定牛是否具有編碼蛋白質β-酪蛋白A2的基因或編碼蛋白質β-酪蛋白A1的基因的方法。具體地，該方法使用SNP作為β-酪蛋白A2和β-酪蛋白A1基因的DNA標記。
文檔編號C12N5/06GKCN1925741 B發(fā)布類型授權 專利申請?zhí)朇N 03817455
公開日2010年11月10日 申請日期2003年5月23日
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