專利名稱:利用傳統(tǒng)大豆育種技術(shù)培育高油酸大豆的方法
利用傳統(tǒng)大豆育種技術(shù)培育高油酸大豆的方法[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用[0002]本申請(qǐng)要求于2009年7月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列第61/223，942號(hào)的權(quán) .、Mo[0003]序列表[0004]本申請(qǐng)附有紙版和計(jì)算機(jī)可讀形式的序列表，其精確復(fù)制了本文所述的序列。背景[0006]植物油在多種應(yīng)用中使用。需要新的植物油組合物以及改進(jìn)的從生物合成或天然植物來(lái)源獲得油組合物的方法。根據(jù)油的預(yù)期用途，需要多種不同的脂肪酸組合物。植物， 尤其是種子中合成大量油的物種，是食用和工業(yè)用油的重要來(lái)源。[0007]油酸是在多種動(dòng)植物來(lái)源中發(fā)現(xiàn)的單不飽和ω-9脂肪酸。油酸被認(rèn)為是飲食中較為健康的脂肪來(lái)源之一，并且通?？捎糜谔娲柡椭竞枯^高的脂肪來(lái)源。[0008]脂肪消耗中油酸含量較高的飲食被證實(shí)降低膽固醇、動(dòng)脈硬化和心血管疾病的總水平。特別地，油酸已被證實(shí)能提高被稱為“好膽固醇”的高密度脂蛋白(HDL)的水平，同時(shí)降低還被稱為“壞”膽固醇的低密度脂蛋白(LDL)。因此，需要開發(fā)包含更為健康的脂肪酸形式的新且廉價(jià)的食物來(lái)源。[0009]植物通過(guò)稱為脂肪酸合成酶(FAS)途徑的共有代謝途徑合成脂肪酸。β_酮脂酰-ACP (?；d體蛋白部分)合酶是植物細(xì)胞FAS中重要的限速酶，并且以數(shù)種形式存在。β -酮脂酰-ACP合酶I催化鏈延長(zhǎng)至棕櫚酰-ACP(C16:0)，而β -酮脂酰-ACP合酶 II催化鏈延長(zhǎng)至硬脂酰-ACP (C18:0)。β -酮脂酰-ACP合酶IV是β -酮脂酰-ACP合酶II的變體，且也能催化鏈延長(zhǎng)至18:0-ACP。在大豆中，F(xiàn)AS的主要產(chǎn)物是16:0_ACP個(gè) 18:0-ACP。18:0-ACP去飽和形成18:1-ACP由定位于質(zhì)體的可溶的Λ-9去飽和酶(也稱為 “硬脂酰-ACP去飽和酶”)催化。[0010]質(zhì)體FAS和Λ -9去飽和酶的產(chǎn)物16:0-ACP, 18:0-ACP和18:1-ACP由特定的硫酯酶(FAT)水解。基于序列同源性和底物偏愛性可以將植物硫酯酶分成兩個(gè)基因家族。第一家族FATA包括主要活性在18:1-ACP上的長(zhǎng)鏈酰基-ACP硫酯酶。第二家族的酶FATB通常利用 16:0-ACP (棕櫚酰-ACP)、18:0-ACP (硬脂酰-ACP)和 18:1-ACP (油酰-ACP)。在植物從頭生物合成脂肪酸的過(guò)程中，這類硫酯酶在決定碳鏈長(zhǎng)度上具有重要作用，并且因而這些酶可用于提供脂酰基組合物的各種修飾，尤其關(guān)于種子貯存油中所存在的各種脂?；南鄬?duì)比例。[0011]FATA和FATB反應(yīng)的產(chǎn)物，游離脂肪酸，離開質(zhì)體并被轉(zhuǎn)化成其各自的酰基輔酶A 酯。?；o酶A是定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)的脂質(zhì)生物合成途徑(Kennedy途徑)的底物。該途徑負(fù)責(zé)膜脂形成以及三酰甘油的生物合成，三酰甘油構(gòu)成種子油。在ER中，有其它的膜結(jié)合去飽和酶，它們還能使18:1去飽和為多不飽和脂肪酸。[0012]大豆基因組具有Λ-12去飽和酶FAD2的兩種種子特異的同種型，稱為FAD2-1A和 FAD2-1B,它們僅在24個(gè)氨基酸殘基上不同。大豆基因組序列上編碼FAD2-1A和FAD2-1B 的基因分別稱為 Linkage Group O 上的 Glymal0g42470 和 Linkage Group I 上的 Glyma20g24530 (Glymal. 0，大豆基因組計(jì)劃，DoE Joint Genome Institute) OFAD2-1A和FAD2-1B 見于ER中，在那里它們能使油酸進(jìn)一步去飽和為多不飽和的脂肪酸。Λ-12去飽和酶催化向油酸(18:1)中插入雙鍵，形成亞油酸(18:2)，這導(dǎo)致由此引起的油酸水平的降低。Λ-15 去飽和酶(FAD3)催化向亞油酸(18:2)中插入雙鍵，形成亞麻酸(18:3).[0013]表1.主要脂肪酸的特征[0014]碳雙鍵名稱飽和度16:0棕櫚酸飽和的18:0硬脂酸飽和的 18:1油酸單不飽和的18:2亞油酸ω-6多不飽和的18:3α -亞麻酸ω-3多不飽和的[0015]名稱(18:2)，(18:1)，(18:3)等是指脂肪酸鏈中的碳原子數(shù)以及其中的雙鍵數(shù)， 表I。本文所用的，該名稱有時(shí)代替相應(yīng)的脂肪酸俗名。例如，油酸(18:1)含有18個(gè)碳原子和I個(gè)雙鍵，并且有時(shí)就簡(jiǎn)單地稱為“18:1 ”。[0016]盡管之前的研究已經(jīng)證實(shí)FAD2-1A基因用于提高油酸的重要作用，但是還沒有報(bào)道證實(shí)FAD2-1B基因?qū)τ退崂鄯e的直接影響。大豆是經(jīng)濟(jì)作物，其提供了美國(guó)飲食中脂肪和油的主要部分。大豆被認(rèn)為是含油種子，其通常含有約20%的油酸，為種子油中脂肪酸特征的一部分。[0017]大豆油被食品工業(yè)用于各種食品中，包括食用油、色拉醬、三明治醬、人造黃油、面包、蛋黃醬、無(wú)乳咖啡伴侶和點(diǎn)心。大豆油還用于工業(yè)市場(chǎng)如生物柴油和生物潤(rùn)滑油市場(chǎng)。[0018]對(duì)于很多油的應(yīng)用，需要具有低飽和脂肪酸水平。飽和脂肪酸具有高熔點(diǎn)，這在很多應(yīng)用中是不想要的。當(dāng)用作原料或燃料時(shí)，飽和脂肪酸在低溫導(dǎo)致混濁，并且為燃料賦予較差的冷流特性如傾點(diǎn)和冷濾點(diǎn)。含有低飽和脂肪酸水平的油產(chǎn)品可能是消費(fèi)者和食品工業(yè)所優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈儽徽J(rèn)為更加健康和/或根據(jù)FDA指導(dǎo)方針被標(biāo)為“飽和脂肪較低”。 此外，低飽和油降低或消除了使如色拉油的用于食品應(yīng)用的油防凍的需要。在生物柴油和潤(rùn)滑油應(yīng)用中，具有低飽和脂肪酸水平的油賦予改善的冷流特性，并且在低溫時(shí)不混濁。[0019]用于在大豆植物中產(chǎn)生中至高油酸水平的各種技術(shù)是已知的。例如，美國(guó)專利公開號(hào)2007/0214516公開了用于獲得具有中等提高水平的油酸的大豆植物的方法。然而，該項(xiàng)技術(shù)需要通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)引入轉(zhuǎn)基因而對(duì)大豆植物進(jìn)行基因修飾。[0020]盡管已產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因大豆品系能產(chǎn)生中至高水平油酸的大豆油，但是仍需要能產(chǎn)生中至高油酸含量種子的非基因修飾的(非-GM0)大豆植物品系。[0021]發(fā)明概述[0022]本公開方法通過(guò)提供產(chǎn)生和選擇在大豆種子油中含有大于約20%且高達(dá)約85% 油酸(高達(dá)商品大豆所產(chǎn)生水平的4倍以上)的傳統(tǒng)非-GMO大豆品系的方法而克服上文概括的問(wèn)題并使得現(xiàn)有技術(shù)得到發(fā)展。本文所述的方法證實(shí)了，在無(wú)需傳統(tǒng)大豆育種中所用的昂貴測(cè)試和評(píng)價(jià)的情況下，將提高的油質(zhì)量性狀有效并入大豆植物優(yōu)良品種中的能力。[0023]本公開方法證實(shí)了，單獨(dú)的AD2-1B基因突變導(dǎo)致油酸水平有很小的提高。然而， FAD2-1A和FAD2-1B基因突變的組合導(dǎo)致種子油的油酸水平顯著提高。[0024]在一實(shí)施方案中，大豆植物在FAD2-1A和FAD2-1B基因中具有一個(gè)或多個(gè)突變，其中來(lái)自所述植物的種子具有約75%至約85%的油酸含量。[0025]在一實(shí)施方案中，表達(dá)突變FAD2-1B基因并表達(dá)突變FAD2-1A基因的大豆植物具有脂肪酸組成得到改善(即具有約75%至約85%油酸)的種子，所述突變FAD2-1B基因由與 SEQ ID NO :1 或 SEQ ID NO :2 序列具有至少 70%、80%、90%、95%、98%或 99% 同一性的多核苷酸所編碼，所述突變FAD2-1A基因由與SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4序列具有至少70 %、80 %、90 %、95 %、98 %或99 %同一性的多核苷酸所編碼。[0026]在一實(shí)施方案中，描述了選擇種子具有約65%至約85%油酸含量的大豆植物的方法，所述方法包括將在編碼FAD2-1A基因SEQ ID NO :5的第一多核苷酸序列中具有一個(gè)或多個(gè)突變的第一大豆植物與在編碼FAD2-1B基因SEQ ID NO :6的第二多核苷酸序列中具有一個(gè)或多個(gè)突變的第二大豆植物雜交。[0027]在一實(shí)施方案中，描述了編碼突變形式的FAD2-1B表達(dá)的核酸，其包含編碼SEQ ID NO 6表達(dá)的至少72個(gè)核苷酸(24個(gè)氨基酸)的序列長(zhǎng)度，其中所述序列包括至少一個(gè)選自以下的突變a.在第137位氨基酸處的非保守型氨基酸取代，b.在第143位氨基酸處的非保守型氨基酸取代。[0028]在一實(shí)施方案中，表達(dá)突變EAD2-1B基因的大豆植物具有脂肪酸組成得到改善 (即具有約22%至約41%油酸)的種子，所述突變EAD2-1B基因由與SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%或99%同一性的多核苷酸所編碼。[0029]在一實(shí)施方案中，表達(dá)導(dǎo)致FAD2-1B活性降低的突變FAD2-1B基因的大豆植物具有油酸水平大于約20%的脂肪酸組成得到改善的種子。[0030]在一實(shí)施方案中，表達(dá)FAD2-1B顯性失活形式的轉(zhuǎn)基因大豆植物具有油酸水平大于20%的脂肪酸組成得到·改善的種子，所述油酸水平優(yōu)選約20%至60%，且最優(yōu)選約60% 至 85%。


[0031]圖1A和IB是展示了脂肪酸去飽和酶的氨基酸保守性的weblogo輸出。[0032]圖2是說(shuō)明相對(duì)脂肪酸水平作為來(lái)自M23x PI 283327重組自交系的子代的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0033]圖3是說(shuō)明油酸含量作為親本和來(lái)自M23x PI 283327重組自交系的親本和子代的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0034]圖4是說(shuō)明油酸含量作為來(lái)自17D X PI 283327F2種子的子代的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0035]圖5是說(shuō)明油酸水平作為來(lái)自M23x PI 567189A重組自交系的子代的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0036]圖6是說(shuō)明油酸水平作為來(lái)自Jake x PI 283327重組自交系的子代的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0037]圖7是用于確定多種FAD2等位基因基因型的熔解曲線分析的圖形表示。[0038]圖8是說(shuō)明油酸水平作為群I的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0039]圖9是說(shuō)明油酸水平作為群2的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0040]圖10是說(shuō)明油酸水平作為群3的總脂肪酸函數(shù)的直方圖。[0041]發(fā)明的詳細(xì)描述[0042]本文所用的“等位基因”是指基因座的一個(gè)或多個(gè)可選形式中的任一個(gè)，所有的等位基因均涉及性狀或特征。在二倍體細(xì)胞或有機(jī)體中，給定基因的兩個(gè)等位基因占據(jù)一對(duì)同源染色體的對(duì)應(yīng)基因座。[0043]本文所用的“FAD2”是指能催化向羧基末端數(shù)第12位的脂?；糠植迦腚p鍵的基因或所編碼的蛋白。FAD2蛋白也被稱為“Λ-12去飽和酶”或“ω-6去飽和酶”。術(shù)語(yǔ)“FAD2-1A” 用于指 Glymal. O 全基因組序列(http://www. phytozome. net/soybean)中 Glymal0g42470.1所限定的FAD2基因或蛋白，其以特定的方式在種子組織中天然表達(dá)，術(shù)語(yǔ)“FAD2-1B” 用來(lái)指 Glymal. O 全基因組序列(http://www. phytozome. net/soybean)中 Glyma20g24530.1所限定的FAD2基因或蛋白，其是(a)不同于FAD2-1A基因或蛋白的基因， 并且其(b)在多種組織中天然表達(dá)，包括種子。[0044]本文所用的“基因”是指包含與基因產(chǎn)物表達(dá)相關(guān)的5'啟動(dòng)子區(qū)、任何內(nèi)含子和外顯子區(qū)以及與基因產(chǎn)物表達(dá)相關(guān)的3'或5'非翻譯區(qū)的核酸序列。[0045]本文所用的“基因型”指細(xì)胞或有機(jī)體的基因組成。[0046]本文所用的“表現(xiàn)型”指細(xì)胞或有機(jī)體的可檢測(cè)的特征，該特征是基因表達(dá)的表現(xiàn)。[0047]本文所用的非基因修飾的(非-GM0)表示能在自然界中合理存在的。如果有機(jī)體沒有通過(guò)添加如轉(zhuǎn)基因的外源或重組核酸進(jìn)行基因工程改造，從而改變?cè)撚袡C(jī)體的基因組成，則該有機(jī)體被認(rèn)為是非-GMO的。[0048]本文所用的“雜交”指兩種親本植物的交配。[0049]本文所用的‘‘F1 ”指兩種植物雜交的第一代子代。[0050]本文所用的‘‘F2”指兩種植物雜交的第二代子代。本文所用的‘‘F3”指兩種植物雜交的第三代子代。[0052]本文所用的‘‘F4”指兩種植物雜交的第四代子代。[0053]本文所用的‘‘F5”指兩種植物雜交的第五代子代。[0054]本文所用的‘‘F6”指兩種植物雜交的第六代子代。[0055]本文所用的‘‘F7”指兩種植物雜交的第七代子代。[0056]本文所用的‘‘F8”指兩種植物雜交的第八代子代。[0057]如本文所用的，所產(chǎn)生的重組自交系(RIL)形成永久且穩(wěn)定的數(shù)量性狀基因座(QTL)圖譜資源。在RIL開發(fā)的第一步中，使兩個(gè)親本自交系雜交(交配)，以形成統(tǒng)一的雜合Fl代。Fl自交(或自體受精)形成F2代；F2中的大多數(shù)個(gè)體將含有由每個(gè)Fl植物中所存在的兩個(gè)純親本染色體間交換而產(chǎn)生的重組染色體。認(rèn)為親本等位基因在F2代中分離，因?yàn)樵诮o定的F2植物中有機(jī)會(huì)正好產(chǎn)生親本等位基因的三種組合。然后，來(lái)自分離的F2代的許多個(gè)體作為相應(yīng)RIL的創(chuàng)立者。給定RIL的每個(gè)后代由上一代自體受精和利用單粒傳法來(lái)形成。以這種方式，幾代后每個(gè)RIL將含有每一染色體的兩個(gè)相同拷貝，而兩個(gè)拷貝中的大多數(shù)都是重組的。每個(gè)個(gè)體RIL將含有重組和親本染色體的不同組合，具有一組獨(dú)特的跨越基因組的重組斷點(diǎn)單元。作為一個(gè)整體，RIL組形成隔離的QTL譜群，其可以通過(guò)單粒傳法年復(fù)一年地穩(wěn)定再生。[0058]本文所用的基因型名稱如下[0059]AABB-純合野生型EAD2-1A和純合野生型FAD2-1B ；[0060]aaBB-純合突變體 FAD2-1A (mFAD2_lA)和純合野生型 FAD2-1B ；[0061 ] AAbb-純合野生型 FAD2-1A 和純合突變體 FAD2-1B (mFAD2_lB)；[0062]aabb-純合 mFAD2_lA 和純合 mFAD2_lB[0063]如本文所用的，稱為“Jake”和“Williams 82”(W82)的大豆植物品系是具有野生型油酸水平和FAD2-1A和FAD2-1B的野生型等位基因的常規(guī)大豆品種。[0064]本文所用的植物引種(PI)或植物引種品系是假定自交多代的大豆品系，使得其子代穩(wěn)定遺傳了其所含有的所有基因。植物引種品系可以是本地的地方品種、栽培品種、變種、本地適應(yīng)品系的田地收集物、從任何這些品系的選擇物或已經(jīng)自交并具有穩(wěn)定基因組的高級(jí)育種系。國(guó)家植物種質(zhì)資源系統(tǒng)(National Plant Germplasm System)維持稱為植物引種的大豆品系的收集。[0065]本文所用的成熟組是基于其所適應(yīng)的地區(qū)(主要根據(jù)日長(zhǎng)和緯度)而達(dá)成的品種組產(chǎn)業(yè)分支。它們由非常長(zhǎng)的日長(zhǎng)品種(組000，00，0)和擴(kuò)展至非常短的日長(zhǎng)品種(組 VII，VIII，IX，X)組成。[0066]“脂肪酸”是通常具有長(zhǎng)的無(wú)分支的脂肪族碳鏈的羧酸。名稱(18:2)，(18:1)， (18:3)等是指脂肪酸鏈中的碳原子數(shù)和其中的雙鍵數(shù)。例如，油酸(18:1)含有18個(gè)碳原子和I個(gè)雙鍵。示例性的脂肪酸包括[0067]ω-3脂肪酸如[0068]α -亞麻酸(CH3 (CH2CH = CH) 3 (CH2) 7C00H)ω-6脂肪酸如[0070]亞油酸(CH3(CH2) 4CH = CHCH2CH = CH (CH2) 7C00H)[0071]ω-9脂肪酸如[0072]油酸(CH3(CH2) 7CH = CH (CH2) 7C00H)[0073]以及飽和脂肪酸如[0074]棕櫚酸(CH3(CH2) 14C00H)[0075]硬脂酸(CH3(CH2) 8C00H)。[0076]本文所用的分離的核酸表示不含與自然環(huán)境中所存在的核酸或多肽相關(guān)的污染物中的至少一些并且具有可編碼基因的序列的核酸。[0077]此外，分離的核酸還可以被定義為核酸的片段或一部分，例如來(lái)自核酸的至少所要求長(zhǎng)度的短堿基序列，或者由核酸所編碼的蛋白或多肽的截短形式、修飾形式或同種型的編碼核酸等。分離的核酸可以包括去除內(nèi)含子的DNA。分離的核酸可以受外源啟動(dòng)子的調(diào)控。[0078]本文所用的突變可以是多核苷酸序列中一個(gè)或多個(gè)核苷酸的缺失、取代或插入。 突變可以是錯(cuò)義、無(wú)義、移碼、插入或缺失中的一種或多種。[0079]本文所用的錯(cuò)義突變是其中基因序列中的單個(gè)核苷酸發(fā)生改變，導(dǎo)致對(duì)應(yīng)氨基酸中的氨基酸發(fā)生改變的點(diǎn)突變。錯(cuò)義突變可能導(dǎo)致基因所編碼的蛋白的活性降低，或者可能導(dǎo)致非功能性的蛋白。[0080]本文所用的無(wú)義突變是DNA序列中導(dǎo)致所轉(zhuǎn)錄的mRNA中產(chǎn)生提前的終止密碼子或無(wú)義密碼子，并且可能會(huì)導(dǎo)致截短的蛋白產(chǎn)物的突變。無(wú)義突變可能導(dǎo)致基因所編碼的蛋白的活性降低，或者可能導(dǎo)致非功能性的蛋白。[0081]本文所用的移碼突變是多核苷酸序列中由不能被3整除的多個(gè)核苷酸的插入或缺失所導(dǎo)致的基因突變。由于基因表達(dá)利用密碼子的三聯(lián)體性質(zhì)，插入或缺失能破壞讀碼框或密碼子組，導(dǎo)致產(chǎn)生與原來(lái)的非突變基因不同的翻譯蛋白產(chǎn)物。移碼突變可能導(dǎo)致基因所編碼的蛋白的活性降低，或者可能導(dǎo)致非功能性的蛋白。[0082]本文所用的缺失導(dǎo)致喪失任何數(shù)量的核苷酸，例如從單個(gè)堿基至整個(gè)基因以及周圍的多核苷酸序列。缺失突變可能導(dǎo)致基因所編碼的蛋白的活性降低，或者可能導(dǎo)致非功能性的蛋白。[0083]本文所用的插入導(dǎo)致添加任何數(shù)量的核苷酸。例如從單個(gè)堿基至數(shù)千個(gè)堿基。插入突變可能導(dǎo)致基因所編碼的蛋白的活性降低，或者可能導(dǎo)致非功能性的蛋白。[0084]本文所用的喪失功能突變是致使蛋白不能實(shí)施其生物功能的突變。[0085]可以通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)在分離的核酸中進(jìn)行突變，例如但不限于定點(diǎn)誘變。[0086]突變可以由X-射線、Y射線或快中子輻射誘導(dǎo)，以及用化學(xué)誘變劑如烷化劑乙基-甲磺酸酯(EMS)或N-亞硝基-N-甲脲(NMU)處理。此外，天然基因變異可以來(lái)自植物基因組DNA復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的隨機(jī)DNA聚合酶錯(cuò)誤所產(chǎn)生的突變。植物中的天然基因變異也可以由暴露于天然來(lái)源的電離或非電離輻射后DNA修復(fù)機(jī)制的激活所致?！0087]可以通過(guò)自然或機(jī)械技術(shù)使大豆植物雜交。大豆中通過(guò)自花授粉或天然的異花授粉(其通常由授粉有機(jī)體輔助)發(fā)生自然授粉。在天然或人工雜交中，開花和花期是重要因素。大豆是短日植物，但是對(duì)光周期的敏感度存在大量的基因變異。對(duì)開花起決定性作用的日長(zhǎng)的范圍為從對(duì)于適應(yīng)于熱帶緯度的基因型為大約13小時(shí)至對(duì)于生長(zhǎng)在更高緯度的光周期不敏感的基因型為24小時(shí)。大豆在出土以后9天似乎對(duì)日長(zhǎng)不敏感。需要7-26 天的短于決定性日長(zhǎng)的光周期來(lái)完成花誘導(dǎo)。[0088]直至花冠開放時(shí)，大豆花通常是自花授粉的。柱頭在開花前大約I天可接受花粉， 并且如果花瓣沒有脫落的話，在開花后2天仍是可授的。9根雄蕊的花絲融合，最接近基座的一根花絲是單獨(dú)的。雄蕊在柱頭以下形成環(huán)，直到開花前大約I天，然后它們的花絲開始快速伸長(zhǎng)，并將花藥升高至柱頭周圍?；ㄋ幵陂_花時(shí)裂開，花粉粒落在柱頭上，并且在10小時(shí)內(nèi)，花粉管到達(dá)子房并完成受精。大豆中自花授粉自然發(fā)生，不受花的控制。對(duì)于兩株大豆植物的雜交，盡管不是必須，但是通常優(yōu)選利用人工雜交。在人工雜交中，在花的花粉成熟之前，通過(guò)手動(dòng)使在雜交中用作雌性的花異花授粉，從而防止自花受精，或者可選地，利用本領(lǐng)域內(nèi)已知的技術(shù)去除花的雄性部分。去除大豆花雄性部分的技術(shù)包括例如,物理去除雄性部分、使用賦予雄性不育的遺傳因子以及對(duì)雄性部分施加化學(xué)殺配子劑。[0089]在去除或不去除雌花的情況下，可以通過(guò)用手術(shù)鉗從雄性親本的花移出雄蕊和雌蕊，并將花藥輕觸雌花的柱頭來(lái)實(shí)現(xiàn)手工授粉。通過(guò)去除前面的萼片和龍骨瓣，或通過(guò)用閉合的手術(shù)鉗刺穿龍骨瓣并允許它們打開以推開花瓣來(lái)實(shí)現(xiàn)雄蕊進(jìn)入。用花藥輕觸柱頭使得花藥破裂，當(dāng)花粉在柱頭上清晰可見時(shí)，獲得最高百分比的成功雜交。在輕觸柱頭之前，可以通過(guò)打開花藥來(lái)檢驗(yàn)花粉脫落。當(dāng)條件不適宜時(shí)，可能必須使用數(shù)個(gè)雄花以獲得合適的花粉脫落，或者具有良好花粉脫落的同一雄性可用于為數(shù)朵花傳粉。[0090]可以使用本發(fā)明植物的整體或一部分。優(yōu)選的植物部分包括生殖部分或儲(chǔ)存部分。本文所用的術(shù)語(yǔ)“植物部分”包括但不限于，種子、胚乳、胚珠、花粉、根、塊莖、莖、葉、葉柄、果實(shí)、漿果、果仁、樹皮、豆莢、種子和花。在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，所述植物部分是種子。[0091]一方面，分離的多核苷酸可以包含PI 283327 mEAD2_lB(SEQ ID NO 1)的核苷酸序列或其片段?？蛇x地，多核苷酸可以與SEQ ID NO :1具有基本的序列相似性，例如，與SEQ ID NO :1序列具有至少80%、90%、95%、98%或99%的序列同一性。另一方面，多核苷酸可以與PI 567189A mFAD2_lB的核苷酸序列(SEQ ID NO :2)具有基本的序列相似性，例如， 與SEQ ID NO :2序列具有至少70%、80%、90%、95%、98%或99%的序列同一性。[0092]蛋白的表達(dá)通常由稱為啟動(dòng)子的基因非編碼區(qū)調(diào)控。當(dāng)啟動(dòng)子調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄時(shí)， 還可以說(shuō)成是該基因(或所編碼的蛋白)的表達(dá)受啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。當(dāng)啟動(dòng)子置于編碼序列附近時(shí)，使得編碼序列的轉(zhuǎn)錄受啟動(dòng)子的調(diào)控，可以說(shuō)成是編碼序列序列與啟動(dòng)子可操作地連接。正常與基因不相關(guān)的啟動(dòng)子稱為異源啟動(dòng)子。[0093]在一實(shí)施方案中，由SEQ ID NO USEQ ID NO :2 和 / 或 SEQ ID NO :3 和 / 或 SEQ ID NO :4單獨(dú)或聯(lián)合編碼的Λ-12去飽和酶蛋白的表達(dá)可以作為“顯性失活”蛋白突變。當(dāng)基因產(chǎn)物對(duì)同一細(xì)胞內(nèi)的正常的野生型基因產(chǎn)物產(chǎn)生不利影響時(shí)，顯性失活或反效等位基因突變發(fā)生。如果產(chǎn)物仍能與野生型產(chǎn)物相同的元件相互作用，但是會(huì)阻斷其功能的某些方面，則通常就發(fā)生了這種情況。這類蛋白可以是正常蛋白功能的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。[0094]由本公開的SEQ ID NO USEQ ID NO :2、SEQ ID NO 3 和 SEQ ID NO 4 所編碼的肽可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的化學(xué)合成制備。還可以利用具有編碼所選肽的核苷酸序列的表達(dá)載體產(chǎn)生肽。核苷酸序列可以與合適的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、終止子或能調(diào)控編碼肽表達(dá)的其它序列可操作地連接。核苷酸序列還可以與其它功能序列可操作地連接。一方面， 這類功能序列可以是能編碼純化標(biāo)簽，以促進(jìn)肽的表達(dá)和純化的序列。另一方面，這類功能序列可以編碼賦予核心肽各種對(duì)其治療功能有利特性的輔助肽，例如，通過(guò)提高核心肽的穩(wěn)定性或通過(guò)促進(jìn)核心肽向其體內(nèi)治療靶組織或器官的遞送。[0095]術(shù)語(yǔ)“蛋白”、“多肽”、“肽”和“酶”在本公開中可以互換使用，所有的都指氨基酸的聚合物。除了本文明確公開的肽之外，可以在這些肽上進(jìn)行某些“保守”取代，而基本不會(huì)改變肽的功能。[0096]如同本領(lǐng)域內(nèi)通常所理解的，直系同源蛋白中保守的氨基酸殘基是維持生物學(xué)功能和/或折疊蛋白的進(jìn)化壓力的結(jié)果。一組直系同源基因中保守的氨基酸位置可以參與結(jié)構(gòu)和功能的許多方面。不變的位置或展現(xiàn)出某些殘基特性(例如，電荷、疏水性等)保守的那些位置可能比蛋白家族允許突變成更多種類氨基酸的那些位置耐受較少的突變。基于數(shù)據(jù)庫(kù)序列存儲(chǔ)的位置氨基酸序列保守，例如可用于確定對(duì)蛋白折疊和/或生物學(xué)功能具有不利影響的氨基酸取代。[0097]計(jì)算機(jī)算法的序列比對(duì)程序可用于基于序列同源性和氨基酸的物理性質(zhì)預(yù)測(cè)氨基酸取代是否影響蛋白功能。例如但不限于SIFT、PolyPhen、SNPs3D、PANTHER PSEC、PMUT 和TopoSNP的氨基酸取代預(yù)測(cè)方法可用于預(yù)測(cè)氨基酸取代對(duì)蛋白功能的影響。這類預(yù)測(cè)方法可用于確定可能會(huì)導(dǎo)致FAD2-1A和/或FAD2-1B基因功能喪失或活性降低的氨基酸取代。[0098]通常將保守型氨基酸取代定義為用能維持蛋白結(jié)構(gòu)和功能特性的不同的氨基酸替代一個(gè)或多 個(gè)氨基酸。[0099]一個(gè)氨基酸對(duì)另一個(gè)氨基酸的“非保守型”取代是取代具有不同結(jié)構(gòu)和/或化學(xué)特性的氨基酸，并且通?；谒婕暗臍埢臉O性、電荷、疏水性、親水性和/或兩性性質(zhì)上的差異。所取代的氨基酸可以包括天然存在的氨基酸以及天然蛋白中通常不存在的那些氨基酸。[0100]以下實(shí)施例闡明了本發(fā)明。所提供的這些實(shí)施例僅為說(shuō)明的目的，并非意圖限制。 作為典型組分或反應(yīng)物而提供的化學(xué)制劑和其它成分以及各種修改都可以鑒于本發(fā)明范圍內(nèi)的上述公開而得到。[0101]實(shí)施例1[0102]高油酸含量大豆植物品系的分離和表征[0103]選擇了約40種具有提高油酸含量的大豆品系。三個(gè)育種系，包括專利登錄品系M23(美國(guó)專利號(hào)7，326，547)被指定為具有不同的影響油酸濃度的基因。M23的油酸含量為其總脂肪酸譜的約40% -50%。如上文所述的，脂肪酸譜表示為總種子脂肪酸含量的百分比。M23具有一個(gè)隱性基因，指定為用于較高油酸含量的ol(Takagi，Y. & Rahman, S.M.1nheritance of high oleic acid content in the seed oil of soybean mutant M23.(大豆突變體M23的種子油中高油酸含量的遺傳特征)Theoretical Applied Genetics 92，179-182 (1996))。近期研究揭示，M23中的ol是FAD2-1A基因座缺失的結(jié)果(Sandhu et al.,2007)。另兩個(gè)育種系是基于 Germplasm Resources Information Network(GRIN)的脂肪酸數(shù)據(jù)的具有提高的油酸含量的植物引種(PI)。GRIN表明，植株P(guān)I 283327和PI 567189A每種分別含有約41 %和38%的油酸含量。然而，在密蘇里大學(xué)德塔中心2005-2007間跨越6個(gè)環(huán)境的Portageville MO實(shí)地試驗(yàn)中，植株P(guān)I 283327和PI 567189A平均具有約30%的油酸，在那里作為農(nóng)民常種植的核對(duì)栽培品種平均具有約22% 的油酸含量。這兩種PI后來(lái)被發(fā)現(xiàn)在FAD2-1B基因座具有突變，這導(dǎo)致較高的種子油酸含量。選擇和雜交[0105]從(RIL)群I (Jake x PI 283327 的F6RIL)、2 (M23x PI283327 的F2:6和F2:7RIL) 和3(M23x PI 567189A的F2:5和F2:7RIL)同時(shí)產(chǎn)生重組自交系。2005年夏季，在德塔研究中心密蘇里州波蒂奇維爾進(jìn)行三次雜交，包括Jake X PI 283327、M23x PI 283327 和M23x PI 567189A。PI 283327和PI 567189A分別是成熟期組V和IV的兩種提高油酸的品系(GRIN USDA)，而Jake是含有典型油酸含量的組V的傳統(tǒng)高產(chǎn)大豆(Shannon， J.G. et al. Registration of ' Jake ' Soybean. Journal of Plant Registration 129-30(2007))。在對(duì)栽培品種Bay誘變之后，選擇具有提高油酸的M23 (Takagi，Y. & Rahman, S. M.1nheritance of high oleic acid content in the seed oil of soybean mutant M23.(大豆突變體M23的種子油中高油酸含量的遺傳特征)Theoretical Applied Genetics 92，179-182 (1996))。在2005年和2006年早期，在哥斯達(dá)黎加使Fl種子產(chǎn)生F2 代。從2006至2007年，追蹤除了群I之外的單個(gè)F2植物的每個(gè)RIL，也在哥斯達(dá)黎加產(chǎn)生 F5種子。在2007年，分析一批來(lái)自每群中每個(gè)RIL的5顆種子，以獲得哥斯達(dá)黎加的脂肪酸譜。將群I種植于密蘇里州波蒂奇維爾，以產(chǎn)生F7種子。將群2種植于密蘇里州波蒂奇維爾，以產(chǎn)生F6種子，然后大于60%油酸的大豆RIL產(chǎn)生F7代。在群3中，選擇僅產(chǎn)生大于60%油酸的F5RIL，以在密蘇里州波蒂奇維爾產(chǎn)生下一代的F7種子。[0106]在上段中，系統(tǒng)名F2:6表不來(lái)源于F2的F6，這意味著該品系的最后共冋祖先在 Fl。F2植物開始單粒傳法至F6代。群2的由至少2500個(gè)種子組成的代表性樣品已經(jīng)根據(jù)布達(dá)佩斯條約的條款于2010年6月16日置于保藏單位美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC )， 其位于美國(guó)維吉尼亞州馬納薩斯，用于在授予專利權(quán)時(shí)有條件地發(fā)行種子。該保藏單位指定為 PTA 11061。[0107]在2008年，將群I和2種植于密蘇里州波蒂奇維爾，以產(chǎn)生圖8和9中用于分析脂肪酸的種子。圖10的數(shù)據(jù)來(lái)自哥斯達(dá)黎加所產(chǎn)生的群3的F5種子。此外，在2009年， 將來(lái)自群2和3的具有最高油酸含量的5個(gè)品系種植于密蘇里州哥倫比亞。在2009年，將群4(17D X(PI 283327x Jake)]種植于密蘇里州哥倫比亞，以產(chǎn)生圖5中用于進(jìn)行脂肪酸分析的種子。同樣，將來(lái)自群4的純合FAD2-1A和FAD2-1B基因的四種組合中每一種的4 至11個(gè)品系種植于密蘇里州哥倫比亞，并在2009年將從群4選擇的品系種植于密蘇里州波蒂奇維爾。[0108]在2008年夏季，在密蘇里州波蒂奇維爾開始群5。大豆品系KB07_1#123與來(lái)自群 2的大豆品系#93雜交。對(duì)大豆品系#93( > 80%油酸)進(jìn)行基因型分析以含有來(lái)自M23 的FAD2-1AA等位基因和來(lái)自PI 283327的FAD2-1B P137R等位基因。KB07_1#123是譜系為[W82x (M23x 10-73)]的大豆品系。該大豆品系經(jīng)選擇以含有三個(gè)影響脂肪酸譜的突變等位基因，包括來(lái)自M23的FAD2-1AA等位基因、以及來(lái)自大豆品系10-73的突變FAD3A 和 FAD3C 等位基因(Dierking, E. & Bilyeu, K. New sources of soybean seed meal and oil composition traits identified through TILLING(通過(guò) TILLING 鑒定的大豆種子粗粉和油組成性狀的新來(lái)源)· BMC Plant Biology 9,89 (2009) ；Bilyeu, Κ. , Palavalli, L. , Sleper,D.& Beuselinck, P. Mutations in soybean microsomal omega-3 fatty acid desaturase genes reduce linolenic acid concentration in soybean seeds (大丑微粒體ω-3脂肪酸去飽和酶基因的突變降低大豆種子中的亞麻酸含量).Crop Science 45， 1830-1836 (2005)。Fl種子經(jīng)基因型分析以證實(shí)雜合性，然后在2009年夏季，在密蘇里州哥倫比亞的 Bradford Research and Extension Center 繼續(xù)獲得 F2 種子。[0109]所需性狀的選擇可以發(fā)生在任何分離世代(F2及以上)。通過(guò)將群種植于所需性狀最大化表達(dá)且可以鑒定具有所述性狀的個(gè)體或品系的環(huán)境中對(duì)該群施加選擇壓力。例如，當(dāng)將植物或品系種植于天然的或人工誘導(dǎo)的疾病環(huán)境中時(shí)，可以進(jìn)行疾病抗性的選擇， 并且育種員僅選擇很少有疾病或沒有疾病的那些個(gè)體，因而它們呈現(xiàn)為抗性的。[0110]雙突變的(即H1FAD2-1A和mFAD2_lB)大豆植物品系取決于環(huán)境可以在油酸含量上發(fā)生改變，然而，油酸含量(通常高達(dá)約80%-85%的油酸含量)總是高于野生型或單個(gè) mFADIA或mFAD2_lB突變的大豆植物品系。[0111]M23與PI 283327或PI 567189A的雜交導(dǎo)致子代具有顯著高于任一親本(約 20% -50% )的油酸水平(分別為約85%和約65% )。這很可能是來(lái)源于M23的FAD2-1A 和來(lái)源于PI 283327或PI 567189A的FAD2-1B的突變等位基因組合的結(jié)果。[0112]當(dāng)不同的FAD2-1A基因組合時(shí)，還鑒定出來(lái)自品系17D(17D具有突變的FAD2-1AS 117N等位基因和35%的油酸，由WiIIiams 82種子誘變發(fā)育而來(lái))x PI 283327的80%油酸的品系。不管兩個(gè)基因的來(lái)源，兩個(gè)突變的FAD2-1A和FAD2-1B基因遺傳入單個(gè)基因型導(dǎo)致油酸含量為任一親本的至少兩倍。[0113]FAD2-1A和FAD2-1B突變的基因表征[0114]對(duì)于來(lái)自多個(gè)種質(zhì)系的FAD2-1A和FAD2-1B等位基因的最初表征，通過(guò)PCR擴(kuò)增 FAD2-1A 和 FAD2-1B 基因，并進(jìn)行測(cè)序。利用 DNeasy Plant Mini 試劑盒(Qiagen, Inc., Valencia, CA)從大約30mg研碎的種子分離基因組DNA。每次PCR反應(yīng)使用5_50ng的基因組DNA0利用Ex Taq按照生產(chǎn)商的推薦(Takara, Otsu, Shiga, Japan)在PTC-200熱循環(huán)儀(MJ Research/Bio-Rad, Hercules, CA)中進(jìn)行 PCR。FAD2-1A 的正向引物是 5’ -ACTGCA TCGAATAATACAAGCC-3’ (SEQ ID NO:7);反向引物是 5’-TGATATTGTCCCGTGCAGC-3’ (SEQ ID NO 8) ο FAD2-1B 的正向引物是 5’ -CCCGCTGTCCCTTTTAAACT-3’ (SEQ ID NO 9);反向引物是 5’-TTACATTATAGCCATGGATCGCTAC-3’ (SEQ ID NO: 10)。PCR 條件是95°C 5 分鐘，隨后為95°C 30秒、60°C 30秒、72°C I分30秒，34個(gè)循環(huán)。通過(guò)在Flashgel上運(yùn)行5分鐘來(lái)檢驗(yàn)PCR產(chǎn)物的大小。然后用Qiaprep Spin Miniprep試劑盒(Qiagen, Inc.)分離PCR產(chǎn)物，并利FAD2-1A和FAD2-1B的正向引物和反向引物在密蘇里大學(xué)的DNA中心設(shè)備上進(jìn)行測(cè)序。將序列數(shù)據(jù)與參照“野生型’^Williams 82序列(W82)進(jìn)行FAD2-1A和FAD2-1B基因的比較。所有受試品系的比較性序列分析如表2所示。[0115]如表2所示，“S > F”代表絲氨酸至苯丙氨酸的氨基酸取代?！癕 > V”代表蛋氨酸至纈氨酸的氨基酸取代。“P > R”代表脯氨酸至精氨酸的氨基酸取代。“I > T”代表異亮氨酸至蘇氨酸的氨基酸取代。[0116]表2. FAD2-1B突變體的DNA序列中的變體[0117]
權(quán)利要求
1.選擇種子具有約65%至約85%油酸含量的大豆植物的方法，所述方法包括將在編碼FAD2-1A基因SEQ ID NO :5的第一多核苷酸序列中具有一個(gè)或多個(gè)突變的第一大豆植物與在編碼FAD2-1B基因SEQ ID NO :6的第二多核苷酸序列中具有一個(gè)或多個(gè)突變的第二大豆植物雜交。
2.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述第一多核苷酸序列還包括與選自SEQID N03和SEQ ID NO :4的多核苷酸序列具有通過(guò)序列同源性所評(píng)價(jià)的至少95%同一性。
3.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述第二多核苷酸序列還包括與選自SEQID N01和SEQ ID NO 2的多核苷酸序列具有通過(guò)序列同源性所評(píng)價(jià)的至少95%同一性。
4.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變干擾由所述編碼FAD2-1A的第一多核苷酸序列所編碼的蛋白以及由所述編碼FAD2-1B的第二多核苷酸序列所編碼的蛋白的功能。
5.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變導(dǎo)致由所述第一多核苷酸序列所編碼的蛋白以及由所述第二多核苷酸序列所編碼的蛋白功能喪失和/或活性降低。
6.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述編碼FAD2-1B多肽的第二多核苷酸序列中的突變包括至少一個(gè)選自以下的突變 a.在第137位氨基酸處的非保守型氨基酸取代， b.在第143位氨基酸處的非保守型氨基酸取代。
7.如權(quán)利要求
6所述的方法，其中所述多肽中的至少一個(gè)突變包含極性氨基酸。
8.如權(quán)利要求
7所述的方法，其中所述極性氨基酸選自精氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸和組氨酸。
9.如權(quán)利要求
1所述的方法，其中所述編碼FAD2-1A多肽的第一多核苷酸序列中的突變包括至少一個(gè)這樣的突變，該突變?cè)诘?17位氨基酸處包含至少一個(gè)非保守型氨基酸取代。
10.如權(quán)利要求
9所述的方法，其中所述大豆植物含有至少一個(gè)非保守型氨基酸取代如天冬酰胺。
11.如權(quán)利要求
1所述的方法，還包括，在將第一和第二大豆植物雜交之前，預(yù)測(cè)導(dǎo)致由所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列所編碼的蛋白功能喪失或活性降低的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。
12.按照權(quán)利要求
1的方法所產(chǎn)生的大豆植物的穩(wěn)定繁殖品系，其中子代的穩(wěn)定性通過(guò)包含至少2500個(gè)種子的子代群進(jìn)行評(píng)價(jià)，所述2500個(gè)種子呈現(xiàn)以總脂肪酸含量的百分比來(lái)表示的約65%至約85%的油酸含量。
13.原文丟失。
14.如權(quán)利要求
1所述的方法，還包括將所述子代進(jìn)行雜交以產(chǎn)生重組自交系。
15.按照權(quán)利要求
14的方法所產(chǎn)生的重組自交大豆品系。
16.在第一和第二多核苷酸序列中具有一個(gè)或多個(gè)突變的大豆種子穩(wěn)定繁殖群，其中所述第一多核苷酸序列編碼FAD2-1A SEQ ID NO :5的表達(dá)，且所述第二多核苷酸序列編碼FAD2-1B SEQ ID NO :6的表達(dá)，其中來(lái)自所述植物的種子具有約65%至約85%的油酸含量。
17.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子,其中所述第一多核苷酸序列與選自SEQID NO 3和SEQ ID NO :4的多核苷酸序列具有通過(guò)序列同源性所確定的至少95%的同一性。
18.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中所述第二多核苷酸序列與選自SEQID NO 1和SEQ ID NO :2的多核苷酸序列具有通過(guò)序列同源性所確定的至少95%的同一性。
19.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變干擾由所述編碼FAD2-1A的第一多核苷酸序列和所述編碼FAD2-1B的第二多核苷酸序列所編碼的蛋白的功倉(cāng)泛。
20.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中所述一個(gè)或多個(gè)突變導(dǎo)致由所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列所編碼的蛋白功能喪失和/或活性降低。
21.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中所述編碼FAD2-1B多肽的第二多核苷酸序列中的突變包括至少一個(gè)選自以下的突變 a.在第137位氨基酸處的非保守型氨基酸取代， b.在第143位氨基酸處的非保守型氨基酸取代。
22.如權(quán)利要求
21所述的大豆種子，其中所述多肽中的至少一個(gè)突變包含極性氨基酸。
23.如權(quán)利要求
22所述的大豆種子，其中所述極性氨基酸選自精氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸和組氨酸。
24.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中所述編碼FAD2-1A多肽的第一多核苷酸序列中的突變包括至少一個(gè)這樣的突變，該突變?cè)诘?17位氨基酸處包含至少一個(gè)非保守型氨基酸取代。
25.如權(quán)利要求
24所述的大豆種子，其中所述至少一個(gè)非保守型氨基酸取代是天冬酰胺。
26.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，預(yù)測(cè)導(dǎo)致由所述第一多核苷酸序列和所述第二多核苷酸序列所編碼的蛋白功能喪失或活性降低的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。
27.如權(quán)利要求
16所述的大豆種子，其中來(lái)源于所述大豆植物與第二大豆植物雜交的子代穩(wěn)定遺傳了性狀，所述性狀包括種子具有約65%至約85%的油酸含量。
28.如權(quán)利要求
27所述的大豆植物，還包括將所述子代進(jìn)行雜交以產(chǎn)生重組自交系。
專利摘要
本申請(qǐng)公開了在FAD2-1A和FAD2-1B中具有突變的大豆植物。此外，本公開涉及來(lái)自所述植物的單飽和脂肪與多不飽和脂肪的比發(fā)生改變的種子。具體而言，本公開涉及表現(xiàn)出升高的油酸水平的植物。
文檔編號(hào)A01H1/00GKCN103002727SQ201080039338
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2010年7月8日
發(fā)明者克里斯汀·比爾耶, 格魯沃·香農(nóng), 李正東, 潘東安 申請(qǐng)人:密蘇里大學(xué)管委會(huì), 美國(guó)農(nóng)業(yè)部導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan