專利名稱：雙孢蘑菇雜交新菌株及其選育方法
技術領域：
本發(fā)明屬于食用菌菇類新菌株的選育技術，具體說是涉及一種雙孢蘑菇雜交新菌株CGMCC NO.0214及其選育方法。
雙孢蘑菇[Agaricus bisporus(Lange)Inbach]味道鮮美，外表美觀，營養(yǎng)價值高，是世界上廣為栽培的蘑菇品種。然而由于雙孢蘑菇性特征為次級同宗配合，要眾多的異核可育孢子中選擇出同核孢子用于雜交育種，除要做大量的孢子分離工作外，尋找易于推定同核單孢，證實雜交的標記是育種技術關鍵。1972年Raper等人曾提出利用營養(yǎng)缺陷型標記雜交育種程序；1972年Elliott提出利用抗性標記雜交育種的策略；Fritsche于1981年應用不育單孢分離株配對雜交培養(yǎng)雜種；1982年May和Rogse提出利用同工酶分析驗證雜交。食用菌栽培是以生產子實體為目的，當用誘變方法去獲取營養(yǎng)缺陷型或抗性作為雜交育種標記時，常常會使出發(fā)菌株產生子實體的優(yōu)良性受到破壞，所以實用性不大，同工酶的變異自然產生并存在于不同類型的菌株中，早先的研究，僅僅應用它作為遺傳標記，無法解決早期鑒別新菌株特性的問題，育種仍然擺脫不了單一純依靠機率和栽培篩選。由于雙孢蘑菇雜交育種難度大，影響了優(yōu)良新菌株產生和發(fā)展，從目前我國雙孢蘑菇生產用種現(xiàn)狀來看，嚴重的存在著高產不優(yōu)質，優(yōu)質不高產的弊端。例如，國外的優(yōu)良品種如02、176、111等菌株引進后，常因栽培條件等差異，多表現(xiàn)高產不優(yōu)質；國內的一些老品種如8213、8211等當家菌種，品質好符合制罐要求，然而產量偏低，老化嚴重，也不理想。如何尋找一條較為先進的育種方法，以保證不斷地為生產提供產質兼優(yōu)的菌株，這是全世界蘑菇育種工作者首要任務。
本發(fā)明目的在于提供一種雙孢蘑菇雜交新菌株CGMCC NO.0214及其選育方法，該雜交新菌株CGMCNO.0214具有高產優(yōu)質、耐高溫的優(yōu)良品質，而且易于栽培，有很大的推廣價值。
本發(fā)明所述的雙孢蘑菇雜交新菌株(其樣品已送中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保存，保存號為CGMCCNO.0214)，是以高產菌株02(H型，荷蘭種)與優(yōu)質菌株8213(G型，福建保留種)的同核不育單孢株配對雜交，選育的雜交子二代。它是具有高產優(yōu)質特性的雜交新菌株。其具體的選育方法如下一、菌株搜集搜集遺傳相似性最小、且特性又不同的栽培或野生的菌株作為雜交的親本菌株；二、菌株篩選應用9％濃度的聚丙烯 胺凝膠檢測搜集到的雙孢蘑菇菌株的酯酶、多酚氧化酶、細胞色素氧化酶、過氧化物酶、乙醇脫氧酶同工酶及水可溶性蛋的電泳類型。用標記區(qū)帶方法確定以酯酶同工酶譜為主作為鑒別或預測種性特征的標志。用H型、HG型、G型、S型分別代表高產型、中間型、優(yōu)質型和不育型雙孢蘑菇菌株的酯酶同工酶譜的區(qū)別指標，并用HG4型代表定向選育高產優(yōu)質型雜交菌株的同工酶指標。對上述搜集種進行鑒別，獲得高產型菌株(H型，荷蘭引進種02菌株)和優(yōu)質型菌株(G型，中國福建保留種8213菌株)作為雜交的親本；三、單孢分離、培養(yǎng)采用顯微操作器或平皿稀釋隨機分離02菌株和8213菌株的單孢子并培養(yǎng)成單菌落。
四、菌株類別鑒定用S型酯酶同工酶譜鑒定培養(yǎng)的單菌落，獲得同核不育單核菌株，Hs型(高產不育型)同核不育株和Gs型(優(yōu)質不育型)同核不育株。
五、配對培養(yǎng)將上述的Hs型同核不育株和Gs型同核不育株接種于麩皮培養(yǎng)基上進行配對培養(yǎng)，讓不同菌落發(fā)生接觸，獲得有可能表現(xiàn)出生長優(yōu)勢的雜交菌落；麩皮培養(yǎng)基是以麩皮65g，葡萄糖20g，瓊酯20g，水1000ml重量比配制而成；六、尖端菌絲分離在Hs型和Gs型兩菌落交接處分離出菌絲塊移到新鮮的麩皮培養(yǎng)基上培養(yǎng)成菌落，在顯微鏡下切割菌絲尖端，獲得純培養(yǎng)物。
七、雜交種鑒定(鑒別)采用酯酶同工酶譜對上述獲得的純培養(yǎng)進行鑒定，獲得具有HG4或HG5型雜交種子一代(F1)；八、雜交種栽培通過栽培獲得擔孢子，即雜交種子二代(F2)；九、單孢分離、培養(yǎng)與鑒定采用顯微操作器或平皿稀釋法隨機分離并培養(yǎng)成菌落，再經電泳鑒別出具有HG4的酯酶同工酶譜的雜交種子二代菌株；十、實驗室選育將上述獲得的具有HG4型的雜交種子二代(F2)菌株于實驗室里進行不同溫度、不同濕度培養(yǎng)。溫度范圍是16—32℃，濕度范圍為培養(yǎng)料含水量在50—75％，經比較菌絲生長速率和活力，篩選得活力強的新菌株。
十一、栽培選育將上述選育得的新菌株放在生產栽培條件下進行初篩、復篩、中型生產試驗、試推廣(擴大生產試驗)篩選出適合于廣泛栽培的，高產、優(yōu)質耐高溫的雜交菌株CGMCCNO.0214號推廣種。
本發(fā)明所述的雜交新菌株CGMCC NO.0214號選育方法是在比較國際上現(xiàn)有的雙孢蘑菇育種技術發(fā)展的最新動態(tài)的基礎上，發(fā)明的一種比較先進的雙孢蘑菇雜交育種方法，本發(fā)明選擇同核不育單孢株配對雜交育種的技術路線，以同工酶為遺傳標記，采用凝膠電泳檢測技術分析雜交出發(fā)菌株的親緣關系，鑒定菌株的基因型，推定同核不育單孢株，跟蹤雜交過程，預測新菌株特性等等。大大提高了育種工作的主動性和篩選效率，使菌株對比篩選數(shù)量減少了75％，采用菌絲刺激孢子萌發(fā)、同工酶鑒定和菌絲尖端分離技術，把同核不同株分離率從常規(guī)的3.0％，提高到6.1％。本發(fā)明選擇麩皮培養(yǎng)基作為配對雜交的專用培養(yǎng)基提高了配對親和率，改常規(guī)的組織分離純種方法為尖端菌絲分離純種方法，縮短了獲得純化雜種(F1)的時間。本發(fā)明將雜交子二代(F2)放在實驗室進行不同溫度、不同濕度培養(yǎng)作初步篩選并進一步棄劣選優(yōu)，大大減輕了栽培篩選的壓力，本發(fā)明建立的雙孢蘑菇雜交育種方法是一種既有理論意義又有實際應用價值的定向雜交育種技術。
本發(fā)明選育方法培育的雙孢蘑菇雜交新菌株CGMCC NO.0214酯酶同工酶表型成呈典型雜合態(tài)，屬高產優(yōu)質型。
CGMCC NO.0214雜交新菌株生物學特點如下1、在PDA培養(yǎng)基上菌絲呈銀白色，基內和氣生菌絲均發(fā)達，生長速度中等偏快；在麥粒和糞草培養(yǎng)基上菌絲生長快且強壯有力，一般不結菌被；2、在含水55—70％的糞草料中，菌絲生長速率相近，其最適的含水率為65—68％，菌絲生長溫度為10—32℃，最適溫度24—28℃，結菇溫度為14—20℃。
CGMCC NO.0214雜交新菌株的栽培特性為耐肥、耐水、耐高溫，適合于在經二次發(fā)酵的糞草料上栽培。該菌株為單生型，成菇率高達90％以上，成品率達80％，1—4潮產量分布均勻，轉潮不明顯，后勁大。該菌株對溫度適應性強，比一般本地種耐高溫3—5℃；栽培期可比一般菌株長30天左右，產菇期長20天左右，比傳統(tǒng)的優(yōu)質菌株(8213號本地種)增產50—100％；鮮菇子實體呈中等大小，直徑2.5—4.5cm，菇外形園整，色澤潔白，無鱗片，有半膜狀菌環(huán)，菌蓋厚，柄中粗、直短，組織結實，菌褶緊密、細小、色淡，一般不脫柄、子實體質量高；制罐予煮得率平均為65％，整菇率為50％，色澤好、湯汁清晰，組織結實，風味好，制罐質量明顯優(yōu)于高產菌株(H型)親本02號，相似于優(yōu)質菌株(G型)親本8213號。
權利要求
l、一種雙孢蘑菇雜交新菌株[Agaricus bisporus(Lange)lnbach]其保存號為CGMCC NO.0214，其特征在于該菌株是以高產菌株02(H型荷蘭種)與優(yōu)質菌株82l3(G型中國福建保留種)的同核不育單孢株經配對雜交選育的雜交子二代菌株，其酯酶同工酶表型為HG4型，呈典型雜合態(tài)，屬高產優(yōu)質類型菌株。
2.一種雙孢蘑菇雜交新菌株CGMCC NO.0214的選育方法，其特征在于該方法是選擇以同核不育單孢株配對雜交育種的技術路線，以同工酶為遺傳標記，采用凝膠電泳檢測技術分析出發(fā)菌株的親緣關系，鑒定菌株的基因型，推定同核不育單孢株跟蹤雜交過程，預測新菌株特性，其具體選育途徑為菌株搜集—菌株篩選—單孢分離、培養(yǎng)—菌株類別鑒定—配對培養(yǎng)—尖端菌絲分離—雜交種鑒定—雜交種栽培—單孢分離、培養(yǎng)與鑒定—實驗室選育—栽培選育獲得CGMCC NO.0214。
3.根據(jù)權利要求2所述的選育方法，其特征在于該選育方法是采用9％濃度的聚丙烯 胺凝膠電泳方法檢測搜集到的雙孢蘑菇菌株的酯酶、多酚氧化酶、細胞色素氧化酶、過氧化物酶、乙醇脫氧酶同工酶及水可溶性蛋白等的電泳表型用標記區(qū)帶的方法分類型。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的選育方法，其特征在于該選育方法是以酯酶同工酶譜作為區(qū)別雙孢蘑菇菌株的高產型、中間型、優(yōu)質型、不育型和高產兼優(yōu)質型的指標。
5.根據(jù)權利要求2所述選育方法，其特征在于同核不育株配對培養(yǎng)采用麩皮培養(yǎng)基培養(yǎng)，麩皮培養(yǎng)基配方以麩皮65g，葡萄糖20g，瓊酯20g，水1000ml重量比配制而成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雙孢蘑菇雜交新菌株CGMCC No.0214及其選育方法，該菌株酯酶同工酶表型呈典型雜合態(tài)，屬高產優(yōu)質型。本發(fā)明的選育方法是選擇同核不育單孢株配對雜交育種的技術路線，以同工酶電泳法預測或鑒定菌株特性的育種技術。采用本發(fā)明的育種方法大大提高了育種工作的主動性和篩選效率，使菌株對比篩選數(shù)量減少了75％，這是一種既有理論意義又有實際應用價值的定向雜交育種技術。
文檔編號A01G1/04GK1125034SQ9411946
公開日1996年6月26日 申請日期1994年12月13日 優(yōu)先權日1994年12月13日
發(fā)明者王澤生, 廖劍華, 李福根, 池致念, 王賢樵 申請人:福建省輕工業(yè)研究所