專利名稱：建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法。
建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的常規(guī)方法是受精卵內(nèi)顯微注射法，是將外源基因在高倍數(shù)顯微鏡下，借助顯微注射儀，通過(guò)安裝在其上尖端處約頭發(fā)絲的千分之一直徑的毛細(xì)玻璃管注入受精卵內(nèi)，然后將受精卵通過(guò)人工受精或體外受精的方法植入雌性動(dòng)物體內(nèi)，繁殖首建者動(dòng)物。其缺點(diǎn)是所用的高倍數(shù)光學(xué)顯微鏡、顯微注射儀、用于拉毛細(xì)玻璃管的拉針儀都非常昂貴，在操作上需要用人的眼睛在高倍數(shù)顯微鏡上一邊觀看，一邊用手對(duì)顯微注射儀進(jìn)行調(diào)節(jié)，使毛細(xì)玻璃管尖端非常緩慢地插入受精卵，并注入外源基因，這種操作往往對(duì)受精卵造成致命的損傷，因此成功率很低，制造的數(shù)量小、制造時(shí)間長(zhǎng)。另外要將此受精卵移植入雌性動(dòng)物體內(nèi)也是一項(xiàng)十分困難的操作，經(jīng)常出現(xiàn)移植的失敗。另外國(guó)際上還有在體外處理精子(如電擊或脂質(zhì)體作用或單純孵育等方法)，將外源基因轉(zhuǎn)入精子，然后再通過(guò)人工受精或體外受精等方法建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的精子載體法，但因是在體外處理精子，因此成功率及可重復(fù)性都比較低。
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中之不足，提供一種能夠迅速、大量、有效地使精子帶上外源基因而建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明所述的建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法，是將通過(guò)不同方法處理的外源基因置入雄性動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)，在輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)與精子作用，使精子帶上外源基因，然后通過(guò)自然交配或其他受精的方法建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器。
具體點(diǎn)說(shuō)是借助注射器，抽取通過(guò)不同方法處理的外源基因液，使針頭進(jìn)入動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)，推進(jìn)注射器，使外源基因注入動(dòng)物體內(nèi)。使外源基因直接在動(dòng)物體內(nèi)的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)與精子作用，使精子帶上外源基因，然后通過(guò)動(dòng)物的自然交配或體外或人工受精的方法繁殖首建者動(dòng)物。本方法不但方法簡(jiǎn)單，而且由于外源基因是在動(dòng)物體內(nèi)自然狀態(tài)下與精子作用，使精子帶上外源基因，轉(zhuǎn)染率比較高，因此繁殖的首建者動(dòng)物陽(yáng)性率也比較高。
實(shí)施例選小鼠作繁殖對(duì)象，將適用于小鼠的外源基因(采用tPA cDNA)由脂質(zhì)體包裹，按外源基因2微升，脂質(zhì)體2微升，DM EM12微升的配方配成轉(zhuǎn)染液，由于小鼠體形較小，采用帶適合于小鼠用的細(xì)針注射器，吸入所配置的轉(zhuǎn)染液，借助普通的解剖顯微鏡觀看小鼠，通過(guò)常規(guī)的人工方法將小鼠麻醉，在小鼠身上適當(dāng)?shù)牟课桓铋_一小口，將細(xì)針刺入已麻醉的小鼠輸精管內(nèi)，注入轉(zhuǎn)染液。雙側(cè)同樣操作。縫合切口。手術(shù)后2-3天將實(shí)驗(yàn)鼠與母鼠合籠，自然交配。待母鼠產(chǎn)子后檢測(cè)子代外源基因的整合及表達(dá)情況，確定轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠，即建成轉(zhuǎn)基因小鼠或小鼠生物反應(yīng)器。
由于小鼠所用的細(xì)針可能一時(shí)無(wú)合適的，可采用毛細(xì)玻璃管在酒精燈上拉出細(xì)尖端后通過(guò)橡膠管套在注射器的注射管口上。若是軀體較大的動(dòng)物，如豬、牛等可采用常規(guī)的玻璃針、塑料針或金屬針注射器，將所適應(yīng)的外源基因注入豬、牛等的輸精管及附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)。
本發(fā)明所述的建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法由于外源基因是在雄性動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)與精子作用，使精子在動(dòng)物體內(nèi)就能攜帶上外源基因，保持了精子在原有的狀態(tài)下生存，因此具有能夠迅速、大量、有效地使精子帶上外源基因，在不需特殊專用設(shè)備的條件下，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)率和成功率高等優(yōu)點(diǎn)。
權(quán)利要求
1．一種建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法，其特征是將通過(guò)不同方法處理的外源基因置入雄性動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)，在輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)與精子作用，使精子帶上外源基因，然后通過(guò)自然交配或其他受精的方法建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法，其特征是借助注射器，抽取通過(guò)不同方法處理的外源基因液，使針頭進(jìn)入動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)，推進(jìn)注射器，使外源基因注人雄性動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器的方法?？朔F(xiàn)有方法中使精子帶上外源基因操作復(fù)雜,操作過(guò)程緩慢,精子的成活率低,數(shù)量小的缺點(diǎn)。將通過(guò)不同方法處理的外源基因置入雄性動(dòng)物的輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi),在輸精管或附睪管或睪丸網(wǎng)或儲(chǔ)精池內(nèi)與精子作用,使精子帶上外源基因,然后通過(guò)自然交配或其他受精的方法建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或生物反應(yīng)器。具有能夠迅速、大量、有效地使精子帶上外源基因,在不需特殊專用設(shè)備的條件下,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)率和成功率高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61D19/00GK1223849SQ97108888
公開日1999年7月28日 申請(qǐng)日期1997年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月22日
發(fā)明者黃偉民 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué)