專利名稱：抗細(xì)菌的胺衍生物的制作方法
殺細(xì)菌和其它致病生物體的氨基化合物的甲醛衍生物。
溶血性尿毒綜合征(HUS)或“漢堡病”這一問(wèn)題在美國(guó)呈上升趨勢(shì)。其引起嚴(yán)重的胃抽筋，帶血腹瀉并且經(jīng)常使兒童和老年喪命。這種疾病由稱為大腸桿菌0157:H7的細(xì)菌引起。其發(fā)病可能在衛(wèi)生部門(mén)有機(jī)會(huì)干預(yù)之前它已發(fā)作，因?yàn)樵谑秤帽晃廴镜氖称泛?-7天才會(huì)出現(xiàn)癥狀而且感染大腸桿菌0157:H7的許多人開(kāi)始都被認(rèn)為是染上流感并等待其恢復(fù)。對(duì)于兒童，這種延誤常常導(dǎo)致晚期感染，約20％晚期感染會(huì)發(fā)展為HUS。染上HUS后約2％的人死亡。1993年一個(gè)公知事故發(fā)生在Kings County,WA的一個(gè)具體餐廳，人們食用牛肉后導(dǎo)致超過(guò)400成年人和兒童感染。其中兩個(gè)兒童死亡，幾個(gè)人病情嚴(yán)重，一個(gè)人持續(xù)昏迷。這種疾病不限于烹調(diào)后的肉和家禽產(chǎn)品。1991年在Fall River MA區(qū)當(dāng)人們飲用鮮榨蘋(píng)果汁后大腸桿菌0157:H7爆發(fā)引起23人病情嚴(yán)重，但是沒(méi)有發(fā)生死亡事件。在新傷口中也可能發(fā)生組織的直接感染。
現(xiàn)在美國(guó)人每年經(jīng)歷約20,000起食品引起的(foodborn)的大腸桿菌0157:H7感染并且其數(shù)量在增長(zhǎng)。大腸桿菌0157:H7是特別有毒的細(xì)菌。患者僅需要被幾個(gè)細(xì)菌感染則出現(xiàn)食物中毒癥狀，因?yàn)槠淇梢栽谀c中生長(zhǎng)，最后引起腸內(nèi)壁潰瘍。該細(xì)菌還產(chǎn)生與高度中毒的志賀氏毒素相關(guān)的毒素，然后其通過(guò)腸潰瘍進(jìn)入血流。該細(xì)菌毒素流向腎，被腎捕集并損傷腎，引起HUS?；加蠬US的人沒(méi)有腎功能，為了維持生命必須進(jìn)行透析或者進(jìn)行腎移植。
許多不同的抗菌化合物是已知的，其可消除食物中的細(xì)菌污染，可消毒藥物和醫(yī)療設(shè)備，并能治愈動(dòng)物和植物的系統(tǒng)或局部感染。但是，由于即使是低感染量的高毒性細(xì)菌也能引起疾病，所以僅僅滅菌一次還不能保證的物品絕對(duì)安全，因?yàn)槭称泛推渌锲吩诔醮螠缇幚砗笥袝r(shí)可能很容易被再次污染。最近美國(guó)食品和藥品管理局(FDA)已經(jīng)批準(zhǔn)用二氧化氯作浸泡液用于殺死牛肉上的大腸桿菌和沙門(mén)氏菌。然而由于二氧化氯和牛肉中的有機(jī)化合物之間的化學(xué)反應(yīng)，其殺細(xì)菌活性短時(shí)間后消失，因此其不能提供長(zhǎng)期保護(hù)免受再污染。本發(fā)明提供殺死高毒性細(xì)菌的方法及保護(hù)處理過(guò)的物品免受細(xì)菌再度污染。本發(fā)明還提供對(duì)細(xì)菌感染的系統(tǒng)和局部處理的方法。
本發(fā)明目的之一是提供殺細(xì)菌組合物，該組合物包括(a)甲醛與(b)具有兩個(gè)NH基團(tuán)的式Ⅰ化合物的反應(yīng)產(chǎn)物，R1NH(COR2)CH(CH2)nR3, (Ⅰ)其中R1是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，或R4CO基團(tuán)；R4是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；R2是H，C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；及R3是R5NH-,R5NHCO-,R5CONH-,-NC(=NR5)NHR5,-NC(=NR5)NR5R5或含有NH部分的雜環(huán)基，其中R5獨(dú)立地是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，及n是0-6之間的整數(shù)。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供沒(méi)有被大腸桿菌0157:H7污染并且抵制進(jìn)一步被細(xì)菌污染的人或動(dòng)物用食品，其含有甲醛和式Ⅰ化合物的反應(yīng)產(chǎn)物。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供消毒或保護(hù)物品免受細(xì)菌污染的方法，該方法包括將被細(xì)菌污染的物品用有效量的(a)甲醛和(b)式Ⅰ化合物的反應(yīng)產(chǎn)物處理。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供殺細(xì)菌組合物，該組合物包括1-50％(重量)(1)賴氨酸，精氨酸，組氨酸，谷酰胺，蘇氨酸或天冬氨酸或其鹽，和(2)甲醛的的反應(yīng)產(chǎn)物；和載體。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供式H2N(CO2H)CH(CH2)4NHCH2NH(CO2H)CH(CH2)4NH2抗菌化合物或其鹽。
本發(fā)明胺-甲醛加合物用作(1)人和動(dòng)物食品的化學(xué)防腐劑以防止食品因微生物變質(zhì)和延長(zhǎng)其存放期，(2)消毒以減少，消除或防止食品或其它物品如用于食品制作的布，塑料和金屬被細(xì)菌污染及(3)用于植物和動(dòng)物的系統(tǒng)或局部細(xì)菌感染處理。
本發(fā)明抗微生物化合物的生產(chǎn)是通過(guò)將上述式Ⅰ化合物的溶液或固體暴露在甲醛中形成殺微生物的產(chǎn)物。微生物包括以下細(xì)菌屬埃希氏桿菌屬，沙門(mén)氏菌屬，利斯特氏菌屬，梭狀芽孢菌屬，芽孢桿菌屬，葡萄球菌屬，彎曲桿菌屬和耶爾森氏菌屬。它們特別被用于控制涉及食品安全的微生物，如大腸桿菌0157:H7，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌，肉毒梭狀芽孢桿菌，Clostridiumhermosaccharolyticum，嗜熱脂肪芽孢桿菌，酪丁酸梭狀芽孢桿菌，蠟狀芽孢桿菌，產(chǎn)氣莢模梭狀芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌，空腸彎曲桿菌空腸亞種，鼠傷寒沙門(mén)氏菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌。
可以用本發(fā)明控制的涉及農(nóng)作物的微生物包括土壤桿菌屬，歐文氏桿菌屬，假單孢菌屬，黃單孢菌屬，和芽孢桿菌屬。
可以用本發(fā)明產(chǎn)物處理的動(dòng)物感染包括以下菌屬鏈球菌屬，葡萄球菌屬，棒狀桿菌屬，利斯特氏菌屬，丹毒絲菌屬，芽孢桿菌屬，梭狀芽孢桿菌屬，埃希氏菌屬，沙門(mén)氏菌，巴斯德氏菌屬，布魯氏菌屬，嗜血菌屬，莫拉氏菌屬，分支桿菌屬，放線菌屬(Actinomyus)，放線芽孢桿菌屬，諾卡氏菌屬，嗜皮菌屬，梭桿菌屬，彎曲桿菌屬，和鉤端螺旋體屬。
在本公開(kāi)中，抗污染指對(duì)于每克中有1000cfu大腸桿菌0157:H7的食品經(jīng)過(guò)在25℃培養(yǎng)24小時(shí)后使每25克食品中只有1cfu或更少的大腸桿菌0157:H7。
本發(fā)明化合物在水溶液中保持較長(zhǎng)時(shí)間的生物活性，因此被認(rèn)為不會(huì)釋放甲醛，但是現(xiàn)在還不知其作用方式。形成產(chǎn)物的化學(xué)反應(yīng)可以縮合反應(yīng)為特征。
式Ⅰ化合物可以游離胺或有機(jī)酸鹽或無(wú)機(jī)酸鹽形式反應(yīng)。鹽酸鹽可提高水溶性并且是優(yōu)選的鹽?？梢允褂玫钠渌}包括乙酸鹽，甲酸鹽和硫酸鹽。當(dāng)與甲醛的反應(yīng)在溶液中進(jìn)行時(shí)，優(yōu)選溶劑是水或水和C1-4醇的混合物?？梢允褂玫钠渌袡C(jī)溶劑包括鹵代烴，乙酸乙酯，乙腈和二甲基甲酰胺。當(dāng)如果與固體式Ⅰ化合物反應(yīng)時(shí)，游離堿是優(yōu)選的。
一般用以下方法方便地提供甲醛通過(guò)將空氣或氮?dú)?300至500cc/分鐘)通入37％甲醛水溶液(福爾馬林)中或在空氣或氮?dú)饬髦屑訜岬途奂兹┮孕纬蓺鈶B(tài)甲醛并且使該氣體通過(guò)式Ⅰ化合物的溶液或粉末狀固體式Ⅰ化合物同時(shí)攪拌粉末。該反應(yīng)通常需要1-15摩爾當(dāng)量的甲醛。
通過(guò)減壓蒸發(fā)溶劑分離產(chǎn)物，并且通過(guò)Sephadex，離子交換樹(shù)脂，硅膠或反相(親水)樹(shù)脂等，柱色譜純化剩余物，并用已知方法及用水，C1-4醇類，乙腈，乙酸乙酯，C1-10烴及其混合物作溶劑。
可以用胺衍生物制成抗污染食物的動(dòng)物類食品包括但不限于牛肉，豬肉，家禽，羊肉，魚(yú)和其它海鮮。一般將抗菌組合物撒在食品表面或者將食品浸泡在濃度0.1-1.0wt％的抗菌水溶液中。如果動(dòng)物類食品已經(jīng)被粉碎，如火腿腸或香腸，可向其中加入0.1-1.0wt％的固體或0.1-1.0wt％的溶液量的抗菌組合物。
可以消毒動(dòng)物飼料并且使其抗污染。實(shí)例包括但不限于烤制促酵物飼料和烤制生長(zhǎng)物飼料。
可以免受細(xì)菌污染的具體食品包括水，牛奶，奶酪，雞肉，所有類型的魚(yú)肉，用于蛋黃醬的蛋清，牛肉餡，處理過(guò)的肉，香蕉，西紅柿，其它水果和蔬菜，尿布產(chǎn)品，粉末或液體嬰兒用產(chǎn)品，用于預(yù)防或處理女性酵母菌感染的產(chǎn)品，花類和肥皂。
消毒溶液的具體用途包括醫(yī)院，家庭護(hù)理，日護(hù)理(daycare)中心和醫(yī)生辦公室的清潔劑，患處藥膏，手套用涂料和手術(shù)室用布，在手術(shù)期間開(kāi)放區(qū)域殺菌用噴劑，在艾滋病護(hù)理設(shè)備中殺菌用噴劑，藥物，衛(wèi)生紙，濕巾，空氣導(dǎo)管系統(tǒng)，繃帶擔(dān)架箱，農(nóng)作物撒布組合物，裝載液體或塊狀食品的清潔車或容器，類似Lysol的空氣噴霧劑，淋浴器和廁所用清潔劑，乳牛奶頭浸泡，進(jìn)入冰庫(kù)或加工廠之前洗滌鹿以保持肉新鮮，動(dòng)物圍欄中覆蓋的地板，在護(hù)理人員進(jìn)行口對(duì)口復(fù)蘇術(shù)前拭抹以清潔口腔，醫(yī)療或牙科設(shè)備的清潔劑，人類食品的防腐劑，狗食防腐劑，罐頭食品的防腐，牙膏添加劑和口腔洗液添加劑。
優(yōu)選的含蛋產(chǎn)品是加工的蛋，蛋架，奶酪，沙拉醬，面條，和面包店貨物。優(yōu)選的含牛奶產(chǎn)品是奶粉，嬰兒配方，冰淇淋，酸奶，牛奶巧克力，乳酪和奶酪。
在上述式(Ⅰ)中，術(shù)語(yǔ)芳基指取代或未取代的苯基和取代或未取代的萘基。含有NH部分的雜環(huán)基包括吡咯基，咪唑基，吡唑基，異吲哚基，吲哚基，吡咯烷基，咪唑啉基和二氫吲哚基。優(yōu)選的基團(tuán)是組氨酸的5-咪唑基。術(shù)語(yǔ)5-或6-員雜環(huán)基指未取代或取代的硫代苯基，呋喃基，吡咯基，咪唑基，吡啶基，異噁唑基，咪唑烷基，哌啶基，哌嗪基和嗎啉基。在芳基，含有NH部分的雜環(huán)基，5-或6-員雜環(huán)基上的任意取代基是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10烷氧基，氟，氯，溴，碘，C1-10一或二烷基氨基，C1-10烷氧基和氰基。
用下列非限定性實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例1將d,l-賴氨酸(2,6-二氨基己酸)仔細(xì)研磨并真空干燥。將干燥的粉末(100g)轉(zhuǎn)移至1升圓底燒瓶中。通過(guò)充入福爾馬林(500ml/分鐘)(37％的甲醛水溶液)產(chǎn)生甲醛蒸氣并且通過(guò)粉末表面96小時(shí)。將該產(chǎn)物真空干燥并在Sephadex G-10(600ml)上進(jìn)行柱色譜純化，用蒸餾水洗脫。根據(jù)時(shí)間收集柱洗脫液的流出液并用用于蛋白測(cè)定的Bradford方法鑒定含有產(chǎn)物的流出液。合并含有產(chǎn)物的流出液并冷凍干燥為干粉。產(chǎn)率40％，在Bradford方法中，藍(lán)色染料結(jié)合蛋白中特定氨基酸中的芳香基團(tuán)。與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較測(cè)定蛋白的濃度。染料將結(jié)合氨基酸中的其它基團(tuán)但是不敏感(特定)。
實(shí)施例2分別將下列氨基酸(2g)溶解在500ml Erlenmeyer燒瓶中的200ml去離子水中。通過(guò)充入37％甲醛溶液(500ml/分鐘)6小時(shí)加入甲醛至每個(gè)水溶液中。將溶液冷凍并冷凍干燥脫水。將剩余物轉(zhuǎn)移至鋁鍋中并通過(guò)在40℃干燥24小時(shí)蒸發(fā)任何殘余的甲醛。然后在60℃干燥加合物48小時(shí)。通過(guò)將100mg加合物溶解在10ml 98％的乙醇(10mg/ml)獲得加合物的儲(chǔ)存溶液。將儲(chǔ)存液稀釋在水中用于抗微生物試驗(yàn)。
加合物的抗微生物試驗(yàn)將鼠傷寒沙門(mén)氏菌和大腸桿菌(0157:H7)的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至小牛肉浸泡的肉湯中并在37℃培養(yǎng)24小時(shí)。通過(guò)系列稀釋液和選擇性瓊脂平皿測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量(細(xì)胞/ml)。用小牛肉浸泡肉湯稀釋細(xì)菌/ml濃度至107。將加合物溶液的等分液加到含有沙門(mén)氏菌和大腸桿菌的小牛肉浸泡肉湯的試驗(yàn)試管中以得到最終濃度為1mg/ml的加合物。將培養(yǎng)物在5℃培養(yǎng)1和24小時(shí)。將游離賴氨酸和賴氨酸加合物用作負(fù)和正對(duì)照。處理1和24小時(shí)后，將100μl小牛肉浸泡肉湯鋪在選擇性瓊脂平皿上。在計(jì)算細(xì)菌前將該平皿在37℃培養(yǎng)。
實(shí)施例3
抗菌化合物用于火腿肉防腐的試驗(yàn)方案1．將1kg買(mǎi)到的火腿腸肉充分混合并分成兩個(gè)500g小樣品。
2．將含有大腸桿菌0157:H7的等分小牛肉浸泡肉湯加到每個(gè)500g小樣品中以得到最終濃度為100菌落形成單位/g。
3．將50g根據(jù)實(shí)施例2獲得的抗菌化合物的水溶液(10wt％溶液)加到一個(gè)小樣品中并與火腿肉充分混合。
4．將50g去離子水(對(duì)照處理)加到第二個(gè)小樣品中并與肉充分混合。
5．將25g處理過(guò)的肉放在無(wú)菌陪替氏平皿中并在7-8℃培養(yǎng)5天。每種處理一式10份樣品。
6．5天后，從陪替氏平皿中除去每種處理的1個(gè)樣品并轉(zhuǎn)移至500ml含有225ml的磷酸鹽緩沖液的瓶中。
7．將該溶液用腕作用振蕩搖動(dòng)30分鐘，用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液系列稀釋并鋪在選擇性瓊脂中。
8．將培養(yǎng)盤(pán)在35℃培養(yǎng)24小時(shí)然后計(jì)數(shù)大腸桿菌，總細(xì)菌和腸桿菌屬。
9．在6,7,8,9,10,12,14,16和18天重復(fù)步驟6到8。
實(shí)施例4計(jì)數(shù)飼料和食品中的大腸桿菌群通過(guò)機(jī)械攪拌將細(xì)菌懸浮在磷酸鹽緩沖液中。將上清液放在選擇性培養(yǎng)基上并在計(jì)數(shù)前培養(yǎng)18-24小時(shí)。
試劑TX-100儲(chǔ)存液將20.0g Triton X-100移液至500ml安納晶試劑瓶中。加入400ml去離子水并攪拌。儲(chǔ)存在冰箱中。該溶液可儲(chǔ)存多達(dá)4星期。
Butterfield磷酸鹽/TX-緩沖稀釋液(BX)將510g磷酸鉀(KH2PO4)溶解在15L小口玻璃瓶中的7500ml去離子水中。加入2850ml 1N氫氧化鈉(NaOH)以調(diào)節(jié)pH至7.2。加入4650ml去離子水以調(diào)節(jié)體積至15L。加入127.5ml氯化鈉(NaCl)。移液15ml TX-100儲(chǔ)存液。分液至2L試劑瓶中。在121℃加壓滅菌45分鐘(注意在加壓滅菌期間應(yīng)蓋上瓶蓋)。當(dāng)試劑已經(jīng)冷卻至室溫時(shí)，無(wú)菌加到滅菌Brinkmann Dispensette上并檢查校準(zhǔn)。
MacConkey瓊脂板將50g MacConkey瓊脂基質(zhì)加到agarmatic容器(多達(dá)最大容量3L/轉(zhuǎn))的1L去離子水中。滅菌15分鐘。當(dāng)循環(huán)完成后，連接滅菌分液裝置。準(zhǔn)備和進(jìn)行Pourmatic分液14ml/板。小心將各堆積從含量計(jì)算器的agarmatic左側(cè)的圓盤(pán)除去，堆積轉(zhuǎn)移盤(pán)上的板以固化。用定量控制每批信息迅速編碼瓊脂板。
方法用樣品分割機(jī)獲得約10克要試驗(yàn)的食品。這種小樣品應(yīng)為要試驗(yàn)的大量食品的代表。在多數(shù)實(shí)例中，分析中誤差達(dá)到95％就無(wú)法得到試驗(yàn)用代表性的小樣品。在樣品處理瓶中稱重10.00+/-0.01g小樣品。移液90ml BX溶液至樣品瓶中。蓋緊蓋并在腕動(dòng)振蕩器上劇烈振蕩30分鐘。帶樣品編號(hào)的標(biāo)記螺旋質(zhì)量盤(pán)，帶樣品編號(hào)的鋪開(kāi)的盤(pán)及復(fù)制盤(pán)標(biāo)為“A”,“B”和“C”。打開(kāi)Electrapette控制臺(tái)，選擇細(xì)菌平皿接種程序。用1000μl尖管將100μl樣品上清液轉(zhuǎn)移至3個(gè)樣品盤(pán)中的每一個(gè)。(如果樣品阻塞尖管，用無(wú)菌巴斯德氏移液管)。用假玻璃棒(95％乙醇)鋪展樣品。裝好帶標(biāo)記樣品杯的無(wú)菌過(guò)濾儀，更換過(guò)濾塊并除去滴罩。移液前輕輕攪拌樣品。用無(wú)菌、大體積移液管和移液助劑轉(zhuǎn)移約4ml過(guò)濾得到的樣品上清液至杯子中。過(guò)濾后，在除去過(guò)濾塊前更換滴罩以防止交叉污染。用鋁箔覆蓋樣品并小心地將支架(rack)從通風(fēng)櫥轉(zhuǎn)移至螺旋盤(pán)。用螺旋盤(pán)機(jī)鋪樣品。小心倒置所有盤(pán)并放在37℃培養(yǎng)器中，A樣品放在架子頂部，B樣品放在架子中間，C樣品放在架子底部。培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)形成菌落單元，大腸桿菌群菌落的顏色由粉到紅，伴有或沒(méi)有沉淀的膽汁區(qū)。
參考文獻(xiàn)<細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)>(Bacteriological AnalyticalManual)(1984),6th Edition,A.O.A.C.,Arlington Virginia,Difco Manual(1985),10th Edition,Detroit,Michigan。
實(shí)施例5
甲醛∶賴氨酸加合物的形成從飼料加工廠購(gòu)得飼料級(jí)賴氨酸一鹽酸鹽粉末(純度98.2％)并用噴霧器將37％甲醛溶液噴在粉末上使它們混合。甲醛和賴氨酸的摩爾比如下表所示。<
>使用甲醛后,將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至敞開(kāi)容器中并儲(chǔ)存3天使甲醛蒸氣消失。
飼料處理用沙門(mén)氏菌(108cfu/ml)的液體培養(yǎng)物(2ml/kg飼料)污染家禽促酵物飼料。將賴氨酸加合物與飼料以重量比0.5∶100,1∶100或2∶100混合。24小時(shí)后，評(píng)價(jià)飼料中的沙門(mén)氏菌。<
>這些數(shù)據(jù)說(shuō)明其有殺菌活性。
甲醛∶賴氨酸加合物的形成從飼料加工廠購(gòu)得飼料級(jí)賴氨酸一鹽酸鹽(純度98.2％)并研磨成細(xì)粉。將甲醛(37％溶液)加到粉末賴氨酸中，同時(shí)通過(guò)噴霧混合。賴氨酸被甲醛飽和后，通過(guò)在35-40部分真空干燥5天從賴氨酸中除去未結(jié)合的甲醛。用蒸餾和比色衍生法測(cè)定殘余甲醛(0.203％)。
飼料處理將家禽飼料用加壓滅菌連續(xù)兩天滅菌1小時(shí)。用沙門(mén)氏菌(108×cfu/ml)的液體肉湯培養(yǎng)物(2ml/kg飼料)污染無(wú)菌飼料并使細(xì)菌群滅菌24小時(shí)。將賴氨酸加合物與污染的飼料以0,2,8,16，和32kg/噸處理水平混合。處理24小時(shí)后，評(píng)價(jià)飼料中的沙門(mén)氏菌。
實(shí)施例9甲醛∶賴氨酸加合物的形成從飼料加工廠購(gòu)得飼料級(jí)賴氨酸一鹽酸鹽(純度98.2％)并研磨成細(xì)粉。通過(guò)噴霧將甲醛(37％溶液)加到粉末賴氨酸同時(shí)混合。賴氨酸被甲醛飽和后，通過(guò)在35-40℃部分真空干燥5天從賴氨酸中除去未結(jié)合的甲醛。用蒸餾和比色衍生法測(cè)定殘余甲醛(2.03％)。
飼料處理從飼料加工廠購(gòu)得家禽飼料并用加壓滅菌連續(xù)兩天滅菌1小時(shí)。用大腸桿菌的液體肉湯培養(yǎng)物(2ml/kg飼料，105×cfu/ml)污染無(wú)菌飼料并對(duì)細(xì)菌群滅菌24小時(shí)。將賴氨酸加合物與污染的飼料以0,2,8,16，和32kg/噸處理水平混合。處理24小時(shí)后，評(píng)價(jià)飼料中的大腸桿菌。
結(jié)果
顯然，許多修改和變化可以根據(jù)上文所述進(jìn)行，但在下面的權(quán)利要求范圍內(nèi)，本發(fā)明可以不用本文所述的具體方法實(shí)現(xiàn)。
權(quán)利要求
1．免受大腸桿菌0157:H7污染的食品，包括(a)甲醛與(b)具有兩個(gè)NH基團(tuán)的式Ⅰ化合物的反應(yīng)產(chǎn)物或所說(shuō)反應(yīng)產(chǎn)物的鹽，R1NH(COR2)CH(CH2)nR3,(Ⅰ)其中R1是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，或R4CO基團(tuán)；R4是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；R2是H，C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；及R3是R5NH-,R5NHCO-,R5CONH-,-NC(=NR5)NHR5,-NC(=NR5)NR5R5或含有NH部分的雜環(huán)基，其中R5獨(dú)立地是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，及n是0-6之間的整數(shù)。
2．權(quán)利要求1的食品，其中每克有1000cfu大腸桿菌0157:H7的食品經(jīng)過(guò)在25℃培養(yǎng)24小時(shí)后使每25克食品中只有1cfu或更少的大腸桿菌0157:H7。
3．權(quán)利要求1的食品，其中含有食品總重量的0.1-10wt％的反應(yīng)產(chǎn)物。
4．權(quán)利要求1的食品，其中含有動(dòng)物源成分。
5．權(quán)利要求1的食品，其中所說(shuō)動(dòng)物源的成分是粉碎的牛肉。
6．含有0.1-20wt％、結(jié)構(gòu)為H2N(CO2H)CH(CH2)4NHCH2NH(CO2H)CH(CH2)4NH2或其鹽的防腐劑的食品。
7．權(quán)利要求6的食品，其中每克有1000cfu大腸桿菌0157:H7的食品經(jīng)過(guò)在25℃培養(yǎng)24小時(shí)后使每25克食品中只有1cfu或更少的大腸桿菌0157:H7。
8．權(quán)利要求7的食品，其中含有動(dòng)物源成分。
9．權(quán)利要求8的食品，其中所說(shuō)動(dòng)物源成分是粉碎的牛肉。
10．一種保護(hù)物品免受細(xì)菌污染的方法，包括將經(jīng)過(guò)細(xì)菌污染的物品用有效量的(a)甲醛與(b)具有兩個(gè)NH基團(tuán)的式Ⅰ化合物的反應(yīng)產(chǎn)物或所說(shuō)反應(yīng)產(chǎn)物的鹽處理，R1NH(COR2)CH(CH2)nR3,(Ⅰ)其中R1是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，或R4CO基團(tuán)；R4是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；R2是H,C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；及R3是R5NH-,R5NHCO-,R5CONH-,-NC(=NR5)NHR5,-NC(=NR5)NR5R5或含有NH部分的雜環(huán)基，其中R5獨(dú)立地是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，及n是0-6之間的整數(shù)。
11．權(quán)利要求10的方法，其中所說(shuō)物品是抗大腸桿菌0157:H7污染的食品，因而每克有1000cfu大腸桿菌0157:H7的食品在經(jīng)過(guò)25℃培養(yǎng)24小時(shí)后使每25克食品中只有1cfu或更少的大腸桿菌0157:H7。
12．權(quán)利要求11的方法，其中所說(shuō)食品含有動(dòng)物源成分。
13．權(quán)利要求10的方法，用食品總重量的0.1-10wt％的反應(yīng)產(chǎn)物處理物品。
14．權(quán)利要求10的方法，其中所說(shuō)反應(yīng)產(chǎn)物是H2N(CO2H)CH(CH2)4NHCH2NH(CO2H)CH(CH2)4NH2或其鹽。
15．一種抗菌組合物，包括(a)甲醛與(b)具有兩個(gè)NH基團(tuán)的式Ⅰ化合物的縮合反應(yīng)產(chǎn)物，R1NH(COR2)CH(CH2)nR3, (Ⅰ)其中R1是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，或R4CO基團(tuán)；R4是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；R2是H,C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，C1-10烷氧基，C1-10烷基氨基，C1-10二烷基氨基或C1-10硫代烷基；及R3是R5NH-,R5NHCO-,R5CONH-,-NC(=NR5)NHR5,-NC(=NR5)NR5R5或含有NH部分的雜環(huán)基，其中R5獨(dú)立地是C1-10烷基，C1-10鏈烯基，C1-10炔基，芳基，5-或6-員雜環(huán)，及n是0-6之間的整數(shù)。
16．權(quán)利要求15的抗菌組合物，包括0.1-50wt％的賴氨酸和甲醛的縮合反應(yīng)產(chǎn)物或其鹽及載體。
17．一種抗菌組合物，包括0.1-50wt％的H2N(CO2H)CH(CH2)4NHCH2NH(CO2H)CH(CH2)4NH2或其鹽和載體。
全文摘要
通過(guò)甲醛和具有兩個(gè)NH部分的化合物反應(yīng)得到的抗菌組合物。該產(chǎn)物被用于保護(hù)食品和其它物品免受大腸桿菌0157∶H7和其它細(xì)菌的感染及用于治療動(dòng)物和植物的系統(tǒng)和局部感染。
文檔編號(hào)A01N37/44GK1230876SQ97198037
公開(kāi)日1999年10月6日 申請(qǐng)日期1997年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月31日
發(fā)明者B·J·布蘭德, K·E·里薩德森 申請(qǐng)人:阿尼托克斯公司