專利名稱：多元靈芝硒的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系靈芝菌絲體經(jīng)液體深層培養(yǎng)，生成富含生物硒及多種生物微量元素的靈芝菌絲體高純度干品和水劑，本發(fā)明所涉及的是中醫(yī)藥學(xué)、真菌學(xué)、生命元素科學(xué)領(lǐng)域。
靈芝Gunoderma Lucidnm.味淡、性溫，能補(bǔ)潤虛寒，抉正固本?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載“主耳聾、利關(guān)節(jié)、保神、益精氣、堅(jiān)筋骨，好顏色”?！侗静菥V目》“久服、輕身不老延年”。現(xiàn)代多指標(biāo)綜合研究表明靈芝深層發(fā)酵液與靈芝子實(shí)體含有相似的化學(xué)成份和藥理作用。自然靈芝含硒元素0.5～2.0PPM。
硒是人體必需的微量元素之一。硒存在于肌體的多種功能蛋白酶。有機(jī)硒較之于無機(jī)硒更有利于人體的吸收和很好的安全性。硒化合物能清除脂質(zhì)過氧自由基和羥自由基。硒可以影響癌細(xì)胞基因的表達(dá)和調(diào)控，在癌癥高發(fā)區(qū)采用硒干預(yù)獲得良好的防癌效果。我國從東北到西南有一覆蓋15個(gè)省區(qū)的低硒地帶。我國成人日攝硒平均26.62μg，成人正常日需量為50～200μg。
占人體總重量的0.05％的41種微量元素中，鐵、鋅、銅、錳、硒、鉻、鈷、氟、碘等是人體必需微量元素。美國和日本公布的這些元素的需要量(日需量)是鐵10～12mg，鋅15mg，銅2～3mg，硒50～200μg，錳2.5～5mg，鈷100μg，鉻50～200μg，氟2.1～2.3mg，碘1.5mg。這些元素對(duì)人體的某些腺素和激素的合成，能量轉(zhuǎn)換，生殖、生長、發(fā)育，大腦的思維與記憶，信息的傳導(dǎo)，遺傳密碼的傳遞等各有其特殊功能。元素是唯一不能在人體內(nèi)自行合成的最基本的營養(yǎng)素。元素在人體共存時(shí)不但有數(shù)量的關(guān)系，更重要的是有比例關(guān)系和復(fù)雜的相互作用，具體表現(xiàn)為協(xié)同作用和拮抗作用或二者兼而有之。
微量元素在中藥的存在形式主要是和有機(jī)物形成絡(luò)合物，靈芝菌絲體所含氨基酸，肽、蛋白質(zhì)、核酸等可作為絡(luò)合物的優(yōu)良配體。靈芝菌絲體與硒元素及系列微量元素合成絡(luò)合物，不僅豐富了中醫(yī)中藥，還為中藥微量元素的研究提供了新的途徑。
在公知的技術(shù)中，專利94115520.x使用微生物制備有機(jī)硒提取劑的方法，95105605.0微量元素的生物轉(zhuǎn)化及酶化提取方法，96119695.5深層發(fā)酵法生產(chǎn)靈芝保健飲料，96107080.3富含多種微量元素的靈芝菌絲體及其生產(chǎn)方法，98113108.5靈芝10噸發(fā)酵罐工藝等技術(shù)，均說明了靈芝與硒元素、多種微量元素的轉(zhuǎn)化，固體培養(yǎng)及深層液體發(fā)酵及具體的發(fā)酵工藝。其不足之處是未充分發(fā)揮硒元素與靈芝菌絲體的主導(dǎo)作用，定量偏低，配套的系列微量元素未科學(xué)地定性定量，品種不明，用量不準(zhǔn)，缺法依據(jù)經(jīng)深層發(fā)酵成熟的菌絲體含無機(jī)元素未被有效清除；深層發(fā)酵只有機(jī)械，物理指標(biāo)而無具有綜合效應(yīng)的生物指標(biāo)；缺乏將靈芝菌絲體溶解的有效方法。
本發(fā)明的目的是采用先進(jìn)的液體深層發(fā)酵工藝，使用適應(yīng)于本工藝的專用液體培養(yǎng)液，并添加硒元素，及系列微量元素，制取多元靈芝硒菌絲體干品和水劑、使之能為缺硒人群補(bǔ)充生物硒，并在肝、心血管疾病、腫瘤防治等方面具有確切療效。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是1、靈芝菌株5.56紅靈芝(引自中國科學(xué)院微生物所菌種室)2、培養(yǎng)液配方靈芝種子培養(yǎng)液配方葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，亞硒酸鈉，PH自然。
靈芝菌絲體深層發(fā)酵液配方葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，PH5.5，亞硒酸鈉Sodium Selenite(Na2SeO3＝128.97)硫酸亞鐵Ferrous Sulfate(FeSO4.7H2O＝278.02)硫酸鋅Zinc Sulfate (ZnSO4.7H2O＝287.56)硫酸銅Cnpric Sulfate (CnSO4.5H2O＝249.69)硫酸錳Manganese Sulfate(MnSO4.H2O＝169.02)
碘化鉀Potassium lodide (KI＝166.00)鉻酸鉀Potassium chromate (K2CrO4＝194.19)氯化鈷Cobaltous chloride (COCL2.6H2O＝237.93)氟硼酸鈉Sodium fluoroborate(NaBF4＝109.82)上述配方中硒及系列元素定性定量的標(biāo)準(zhǔn)是易溶于水(或熱水)、無毒、無腐蝕作用，硒元素含量相當(dāng)于人體日需量100％，系列元素依據(jù)下列公式添加，其計(jì)算公式是
例
=100μg×100%×128.971×78.96=163.4μg]]>3、主要發(fā)酵設(shè)備三角瓶、旋轉(zhuǎn)式搖床，一級(jí)種子罐，二級(jí)種子罐，10噸發(fā)酵罐。
空氣過濾機(jī)、空壓機(jī)、離心機(jī)。
4、多元靈芝硒深層發(fā)酵工藝流程靈芝斜面母種經(jīng)搖床培養(yǎng)，進(jìn)入一級(jí)種子發(fā)酵，再經(jīng)二級(jí)種子發(fā)酵，進(jìn)行發(fā)酵罐培養(yǎng)。合格發(fā)酵液經(jīng)離心分離，清洗為純菌絲體、冷凍干燥成干品，加無菌水加熱菌絲體自溶后成水劑，即多元靈芝硒。
本發(fā)明同現(xiàn)有的技術(shù)相比其優(yōu)點(diǎn)是多元靈芝硒生產(chǎn)工藝水準(zhǔn)高，能達(dá)到我國藥品高效、優(yōu)質(zhì)、安全、穩(wěn)定的技術(shù)要求；作為中藥靈芝與硒及系列必需微量元素的有機(jī)絡(luò)合可為我國中藥寶庫提供一類新的菌類藥材及制劑；定性定量的硒及系列定性定量必需微量元素被靈芝菌絲體轉(zhuǎn)化，既保證了靈芝與硒絡(luò)合物的主導(dǎo)作用，也兼顧了系列微量元素復(fù)雜的協(xié)調(diào)作用，更保證了各種元素使用的準(zhǔn)確性和科學(xué)性；未被轉(zhuǎn)化的無機(jī)元素被有效地清除，保證了制劑的優(yōu)質(zhì)和低毒即生物硒≥800PPM，生物硒及生物系列元素含量＞95％，無機(jī)硒及無機(jī)系列元素含量＜5％。
實(shí)施例1、多元靈芝硒的制備工藝1靈芝斜面母種5.65紅靈芝2液體種子的搖瓶培養(yǎng)2.1種子培養(yǎng)液配方葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，亞硒酸鈉，PH自然。
2.2裝瓶每瓶裝量100毫升，玻璃株10粒，棉塞牛皮紙封口。
2.3滅菌壓力1.5kg/cm2，時(shí)間30分鐘。
2.4接種無菌接種，接入斜面母種。
2.5培養(yǎng)靜止培養(yǎng)，溫度24°-26℃震蕩培養(yǎng)溫度26℃±2℃，搖床偏心距4cm，頻率150-220轉(zhuǎn)/分。
2.6合格種子液標(biāo)準(zhǔn)清澈透明，菌絲小球1～2毫米，菌絲體干重10g/升。
3多元靈芝硒深層培養(yǎng)3.1培養(yǎng)液配方3.11種子液配方同2.13.12菌絲體深層培養(yǎng)液配方葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，亞硒酸鈉，硫酸亞鐵，硫酸鋅，硫酸銅，硫酸錳，碘化鉀，鉻酸鉀，氯化鈷，氟硼酸鈉。
3.2一、二級(jí)種子培養(yǎng)3.21定容一級(jí)種子罐容積50升，定容35升，二級(jí)種子罐容積500升，定容350升。
3.22空消溫度135℃-140℃，壓力2.5～2.8kg/cm2。
3.23實(shí)消1.2kg/cm2，50～60分鐘，恒溫8分鐘。
3.24降溫降至27℃，降壓至0.5kg/cm2。
3.25接種一級(jí)種子罐接入搖瓶種子1.8～2.5升。二級(jí)種罐接入一級(jí)種子35升。
3.26種子液發(fā)酵罐溫25°～28℃，罐壓20～40KPa，攬拌速率110～140r/min，通氣量1∶0.5，時(shí)間48小時(shí)3.27質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)O時(shí)查雜菌，OD值(光密度)，初糖；12、24、36、48小時(shí)OD，殘?zhí)牵琍H；48小時(shí)正常標(biāo)準(zhǔn)PH5.OD值凈長值0.5，耗糖1個(gè)單位。
3.3發(fā)酵罐發(fā)酵3.31定容10噸發(fā)酵罐，定容7500升。
3.32空消140℃、2.8kg/cm2，60分鐘3.33實(shí)消50～60分鐘、保溫8分鐘。
3.34降溫0.5kg/cm2，25℃。
3.35接種二級(jí)種子750升3.36培養(yǎng)26℃±2℃，PH5.5，通風(fēng)量1∶0.5(體積/體積/分)，發(fā)酵液溫度升高時(shí)加大至1∶1，罐壓10～30KPa，攬拌速率150～180r/min。
3.37質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)72小時(shí)后每隔12小時(shí)取樣測糖、氮、PH、無菌度。
3.38放罐標(biāo)準(zhǔn)PH.5，殘?zhí)?.5，氨態(tài)氮＜30毫克/毫升，菌球濃度1000-1500個(gè)/毫升。
4、發(fā)酵產(chǎn)品制取4.1離心分離所分離的必須是經(jīng)檢驗(yàn)后的合格發(fā)酵液，離心速率2000～300rpm。
4.2菌絲體清洗添加無菌水，比例1∶80，清洗之后，120目過濾、得菌絲體。
4.3菌絲體干品冷凍干燥，無菌分裝，常溫貯藏。
4.4菌絲體水劑添加1∶20無菌水，升溫，菌絲體自溶。無菌灌裝，0°-4℃貯藏。
權(quán)利要求
1.一種多元靈芝硒生產(chǎn)方法，其特征是在靈芝深層發(fā)酵液中添加定性定量硒制劑為主導(dǎo)，系列微量元素制劑為配組，利用靈芝菌絲體對(duì)無機(jī)元素的有機(jī)絡(luò)合能力，制成多元靈芝硒菌絲體干品和水劑，其制品有機(jī)元素含量＞95％，無機(jī)元素含量＜5％。
2.按權(quán)利要求1所述，其特征是靈芝種子培養(yǎng)液配方為葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，亞硒酸鈉，PH自然。
3.按權(quán)利要求2所述其特征是靈芝菌絲體深層培養(yǎng)液配方為葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氫鉀，PH5.5，亞硒酸鈉，硫酸亞鐵，硫酸鋅，硫酸銅，硫酸錳，碘化鉀，鉻酸鉀，氯化鈷，氟硼酸鈉。
4.按權(quán)利要求2其特征是靈芝菌絲體深層培養(yǎng)液元素制劑添加公式為
5.按權(quán)利要求1所述其特征是硒及系列元素制劑定性定量的標(biāo)準(zhǔn)是易溶于水(或熱水)，無毒，無腐蝕作用，硒元素含量相當(dāng)于人體日需量100％，系列元素含量，依據(jù)元素制劑添加量公式計(jì)算。
6.按權(quán)利要求1所述其特征是菌絲體清洗將合格發(fā)酵液離心分離后，添加無菌水，清洗之后過濾。
7.按權(quán)利要求1所述其特征是菌絲體自溶被清洗過濾后的菌絲體再添加20倍的無菌水，升溫，菌絲體自深成水劑。
8.按權(quán)利要求1所述其特征是多元靈芝硒發(fā)酵過程質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)為搖瓶種子液質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)清澈透明、菌絲小球1～2毫米，菌絲體干重10g/升。一、二級(jí)種子培養(yǎng)液質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)0時(shí)，查雜菌、OD值、初糖。12、24、48小時(shí)OD，初糖，PH。48小時(shí)正標(biāo)準(zhǔn)PH5.0，凈長值0.5，耗糖一個(gè)單位。10噸發(fā)酵罐質(zhì)監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)72小時(shí)后，每隔12小時(shí)取樣測糖、氮、PH、無菌度放罐標(biāo)準(zhǔn)PH5，殘?zhí)牵?.5，氨態(tài)氮＜30毫克/毫升，菌球濃度1000-1500個(gè)/毫升。
全文摘要
多元靈芝硒的生產(chǎn)方法屬中醫(yī)藥學(xué),真菌學(xué),生命元素科學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明采用靈芝深層發(fā)酵工藝,添加定性定量的硒及系列元素(鋅、鐵、銅、碘、鈷、鉻、氟),利用靈芝菌絲體對(duì)多種元素有機(jī)絡(luò)合,經(jīng)發(fā)酵,離心分離,清洗、冷凍干燥,菌絲體自溶過程制成干品和水劑。其生產(chǎn)工藝工業(yè)水準(zhǔn)高,以硒元素及靈芝為主導(dǎo),系列元素配套組合準(zhǔn)確合理,有機(jī)元素含量高,無機(jī)元素被清除,產(chǎn)品毒性低。制成品可為缺硒人群補(bǔ)充生物硒,并在肝、心血管疾病及腫瘤防治有確切的療效。
文檔編號(hào)A01H15/00GK1277060SQ9910873
公開日2000年12月20日 申請(qǐng)日期1999年7月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月11日
發(fā)明者李全才 申請(qǐng)人:李全才