專利名稱：蜜蜂幼蟲腐臭病的處理的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療性處理和預(yù)防蜜蜂疾病的方法和組合物。具體地說，本發(fā)明涉及用于生物防治蜜蜂幼蟲腐臭病的方法和組合物。
養(yǎng)蜂(養(yǎng)蜂業(yè))因蜜蜂易患多種疾病這一事實而復(fù)雜化。這些疾病包括那些由病毒、細(xì)菌、真菌、小孢子、原生動物、寄生螨蟲、其它昆蟲和線蟲引起的疾病。有兩種細(xì)菌性疾病是全球性的，并引起養(yǎng)蜂者和農(nóng)業(yè)管理者的廣泛關(guān)注 它們是美洲蜜蜂幼蟲腐臭病(American foulbrood)和歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病(Europeanfoulbrood)(一般稱作蜜蜂幼蟲腐臭病)。
美洲蜜蜂幼蟲腐臭病(AFB)是一種侵襲蜜蜂幼蟲的疾病，幾乎總是在前蛹階段殺死它們；幼蟲變成褐色、腐爛，發(fā)出討厭的魚膠樣臭味。AFB是由產(chǎn)孢子的革蘭氏陽性細(xì)菌幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種(Paenibacillus larvae subsp.larvae)引起的。孢子可以在不用的污染養(yǎng)蜂設(shè)備中休眠數(shù)十年，但一旦這些設(shè)備再次被利用或是被來自于感染群體的訪問蜂利用時則可引起疾病。細(xì)菌經(jīng)口感染一窩幼蟲，并在孢子形成時釋放出穩(wěn)定的蛋白水解酶，導(dǎo)致幼蟲死亡并最終溶解成粘著膠體。
歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病(EFB)是由非產(chǎn)孢子的革蘭氏陽性細(xì)菌冥王星蜜蜂球菌(Melissococcus pluton)引起的。該細(xì)菌導(dǎo)致EFB的散在爆發(fā)，致使成窩幼蟲死亡而不形成膠樣膠體。
目前有幾種處理AFB和EFB的方法可以利用，盡管每種方法都有其內(nèi)在的缺點。盡管激進(jìn)但可能最為有效的處理方法是控制性地焚燒蜜蜂群體和有關(guān)的設(shè)備。如果有其它方法可供選擇的話，由于明顯的經(jīng)濟(jì)原因這種破壞性措施并非一個優(yōu)選的處理方法。
把成年蜜蜂從感染疾病的群體中抖到新的蜂房上也經(jīng)常被嘗試，但此方法既不可靠又費力。
另一種處理方法包括利用滅菌性化學(xué)物質(zhì)例如福爾馬林、氯和氧化乙烯進(jìn)行蜂房和其內(nèi)容物的消毒。但是，這些化學(xué)物質(zhì)的使用可能導(dǎo)致蜂房內(nèi)的蜂蜜和花粉對蜜蜂的持久毒性，或引起蜂房變脆。另外，利用這些化學(xué)物質(zhì)治療AFB和EFB的效果是不穩(wěn)定的。
另一種可供選擇的治療形式涉及使用抗生素治療患病群體。引起AFB的細(xì)菌可以通過氧四環(huán)素，商品名通常為土霉素的抗生素來控制。但是在英國(UK)，根據(jù)1982年的《蜜蜂疾病規(guī)定》，確證的AFB爆發(fā)必須通過焚燒處理，這一政策實施幾十年來確保了英國的AFB低發(fā)生率，但是在一些國家，例如美國和澳大利亞，廣泛使用土霉素進(jìn)行預(yù)防性治療與造成抗生素依賴性的該疾病的亞臨床擴散有關(guān)，并可能引起對四環(huán)素具有抗性的幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的出現(xiàn)(這將招致蜜蜂群體的災(zāi)難性崩潰)。另外，抗生素對感染蜂房和設(shè)備的孢子無效，它的使用可能導(dǎo)致感染在群體間擴散，并因此提高對抗生素規(guī)律施用的依賴性。
在英國，輕度EFB事件可用四環(huán)素進(jìn)行處理，但是嚴(yán)重和重復(fù)爆發(fā)則通過焚燒進(jìn)行控制。由于存在出現(xiàn)抗性的危險和EFB的抑制可能掩蓋出現(xiàn)的低水平AFB感染以及因此產(chǎn)生的四環(huán)素依賴性這一可能性，利用四環(huán)素進(jìn)行預(yù)防和處理急性EFB事件是不可取的。
與使用四環(huán)素治療AFB和EFB有關(guān)的另一個主要問題是結(jié)果在蜂蜜中出現(xiàn)不想要的四環(huán)素殘余物，這些殘余物的出現(xiàn)違背了蜂蜜提倡者試圖給出的有利健康和衛(wèi)生的形象。
因此，迫切需要開發(fā)一種針對普遍性蜜蜂疾病，尤其是美洲和歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病的處理方法，該方法不僅避免了四環(huán)素使用的相關(guān)問題而且避免了焚燒所伴隨的破壞性經(jīng)濟(jì)浪費。
因此，第一次認(rèn)識到蜜蜂疾病可以被方便、安全有效地進(jìn)行生物學(xué)控制，而避免了使用抗生素制品所帶來的相關(guān)問題以及焚燒帶來的破壞性經(jīng)濟(jì)浪費。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供了一種用于治療性處理或預(yù)防蜜蜂疾病的組合物，該組合物包括接種物和養(yǎng)蜂業(yè)遞送載體，該養(yǎng)蜂業(yè)遞送載體用于將該接種物傳遞到蜂房以便在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系。
另一方面，本發(fā)明涉及用于治療性處理或預(yù)防蜜蜂疾病的方法，包括給蜂房接種以在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系。
術(shù)語接種物在本文中按其通常意義使用，以定義一種含有接種后能建立微生物區(qū)系的微生物的制劑。因此，在本發(fā)明中，接種物包含一種或多種活微生物，這些微生物具有足夠的數(shù)量，并且處于一種代謝/生理狀態(tài)，以致于當(dāng)它們被遞送到蜂房或蜜蜂群體中后，能建立一個微生物區(qū)系。
本文所用術(shù)語抗生素包括能夠抑制一種或多種蜜蜂病原體(例如通過抑制它們的生長)的致病活性的任何物質(zhì)(例如細(xì)菌素或次級代謝物)。
術(shù)語蜂房在本文中用以定義養(yǎng)蜂者用來盛放和處理蜜蜂群體和其所產(chǎn)蜜的所有各種容器。因此，該術(shù)語在本文中尤其用來指蓋子、盒子、架子、蜂巢(蜜蜂在架子中建造的有序蠟基質(zhì))或任何其它蜂房成分，包括單個的或集合的。
蜂房可以含有或不含蜜蜂群，例如，在本發(fā)明用于預(yù)防目的的情況下，可能將接種物投入空的蜂房。在這樣的實施方案中，接種物可以處于休眠狀態(tài)，直到通過定居蜜蜂的作用將其分散開來并促進(jìn)其生長這樣，保護(hù)性微生物區(qū)系與蜂群一起產(chǎn)生?；蛘撸梢栽跓o蜜蜂定居的情況下，通過以任何適當(dāng)技術(shù)(例如，提供適宜的營養(yǎng)和/或基質(zhì))促進(jìn)蜂房中接種微生物的生長來(至少部分地)形成該微生物區(qū)系。因此，治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系在有或無定居蜜蜂群體作用的情況下都可以建立。
任何適宜的養(yǎng)蜂用遞送載體都可用于本發(fā)明，只要它適宜于將接種物送至蜂房，以致(在有或無定居蜜蜂群體作用的情況下)最終能在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系。優(yōu)選地，該遞送載體與巢居蜂群的覓食和攝食行為一起發(fā)揮作用，當(dāng)(由遞送介質(zhì)攜帶的)接種物被蜜蜂攝取，并接著通過隨后的分泌(例如在幼蟲的喂食過程中通過下咽腺體)、排泄或釋放擴散至整個蜂房和/或群體時，接種物即獲得傳遞。
接種物可以以單一劑量或間隔施用的幾個較小劑量遞送。依據(jù)遞送載體的不同，可以將接種物投入蜂房的任何成分中(例如，未使用的蜂巢)或蜂群本身(例如取一勺量蜜蜂，在遠(yuǎn)離蜂房處用接種物噴灑它們，并隨后將其放回蜂房)。
接種物的大小、合適的給藥方案和遞送載體的類型將尤其隨著蜜蜂群體的營養(yǎng)狀況、待遞送的微生物、處理方式(預(yù)防性或治療性/治療用)、蜜蜂群體的年齡、蜂房的大小和結(jié)構(gòu)、地理、氣候和季節(jié)情況、待治療或預(yù)防的疾病的性質(zhì)和感染的嚴(yán)重程度而變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地通過常規(guī)嘗試法確定最佳參數(shù)。
已知有各種不同的在飼養(yǎng)越冬蜜蜂中用于遞送已知抗生素的蜜蜂養(yǎng)殖遞送載體。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選養(yǎng)蜂用小糖塊(patty)、糖漿、浸液(drench)、撒粉(dusting)或糊狀物(paste)。
術(shù)語養(yǎng)蜂用小糖塊是一個本領(lǐng)域術(shù)語，用以定義各種主要由固態(tài)糖構(gòu)成的固態(tài)小塊或餅狀物。尤其優(yōu)選用于本發(fā)明的是蔗糖小糖塊或含有蔗糖和脂肪(例如植物脂肪)混合物的混合小糖塊。
用于本發(fā)明的糖漿優(yōu)選由蔗糖和水構(gòu)成。尤其優(yōu)選50％W/V的蔗糖溶液。
優(yōu)選地，撒粉由糖粉構(gòu)成。既可以將其直接施用于蜂巢，也可以更為通常地將其施用(例如用風(fēng)箱)于蜂房的所有內(nèi)表面或直接應(yīng)用于蜂群。
用于本發(fā)明的糊狀物可以是花粉替代物。術(shù)語花粉替代物是一個本領(lǐng)域術(shù)語，用以定義大量功能上和/或化學(xué)上模擬花粉的制劑中的任一種(其被蜜蜂用作主要蛋白來源)。
本發(fā)明遞送載體中使用的糖優(yōu)選是蔗糖，但是也可以使用任何功能上和/或化學(xué)上模擬花蜜(其被蜜蜂用作非蛋白類食物的主要來源)的制劑。
本發(fā)明中使用的接種物包括一種或多種微生物。該微生物可以防止蜜蜂病原體的感染，并根除患病蜂群中已形成的感染(例如通過產(chǎn)生一種或多種抗生素或通過與蜜蜂病原體競爭，來預(yù)防或根除感染)。一些這種微生物可以天然地在蜂房或/和蜜蜂中找到。
在所述微生物產(chǎn)生針對一種或多種蜜蜂病原體的一種或多種抗生素的情況中，優(yōu)選地該抗生素具有抗冥王星蜜蜂球菌和/或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的活性。優(yōu)選抗生素具有對抗冥王星蜜蜂球菌和幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種兩者的活性。該抗生素可以是抑菌的或溶菌的，但優(yōu)選溶菌的。
尤其優(yōu)選包括一種或多種微生物的接種物，其中所述微生物產(chǎn)生在幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種(Paenibacillus larvaesubsp.pulvifaciens)中發(fā)現(xiàn)的抗冥王星蜜蜂球菌和抗幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的抗生素，或其同系物。
本文所用術(shù)語同系物(應(yīng)用于抗生素時)定義功能上或/和化學(xué)上與幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種產(chǎn)生的參考抗生素相似，但由不同來源的生物產(chǎn)生的抗生素。這些同系物(和產(chǎn)生它們的微生物)可以通過參考抗生素的結(jié)構(gòu)分析，或/和基于檢測抗冥王星蜜蜂球菌和/或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的活性的篩選程序來鑒定。
由本發(fā)明所用微生物產(chǎn)生的抗生素可以用包括尤其是抗如下微生物的活性的活性譜來表征大腸桿菌(Escherichia coli)，鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)，惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)，銅綠假單胞菌(Pseudomonas aerugenasa)，藤黃微球菌(Micrococcus luteus)，蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，蜂房類芽孢桿菌(Paenibacillusalvei)，幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種，Paenibacillus apiarius，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolinca)和冥王星蜜蜂球菌。
在優(yōu)選的實施方案中，微生物包含細(xì)菌，尤其優(yōu)選產(chǎn)生內(nèi)生孢子的產(chǎn)孢子細(xì)菌，在此情況下接種物優(yōu)選包含細(xì)菌內(nèi)生孢子(選擇性地聯(lián)合營養(yǎng)細(xì)胞)。
當(dāng)把細(xì)菌內(nèi)生孢子用做接種物時，其優(yōu)選的提供方式是洗滌的和/或濃縮的孢子制劑。這種制劑可以通過大量已知微生物技術(shù)中的任何一種來制備。典型的方法包括在液體培養(yǎng)基中使?fàn)I養(yǎng)細(xì)胞生長至靜止期(以誘導(dǎo)孢子形成)，之后通過離心從耗盡的培養(yǎng)基中將其分離出來。該實施方案利用了細(xì)菌內(nèi)生孢子的高度抗性性質(zhì)，這樣產(chǎn)生的組合物極為穩(wěn)定，生產(chǎn)便宜并易于儲存。
該細(xì)菌接種物優(yōu)選包含類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)的種或其亞種(見Heyndrickx等(1996)，Int.J.Syst.Bacteriol.46(4)，988-1003)。
尤其優(yōu)選幼蟲類芽孢桿菌的亞種，例如，幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種，或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的減毒或無毒菌株。其它合適的細(xì)菌可以通過從自然分離物中篩選至今未分類的表現(xiàn)出必需抗生素活性(但不具有致病性的)的類芽孢桿菌屬分離物。
幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種產(chǎn)生有抗致病性細(xì)菌幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種、蜂房類芽孢桿菌和冥王星蜜蜂球菌活性的抗生素，因此該亞種(或其衍生物)可以用作預(yù)防和/或治療性處理歐洲和美洲蜜蜂蜜蜂幼蟲腐臭病的組合物的基礎(chǔ)。
幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的減毒或無毒菌株產(chǎn)生有抗冥王星蜜蜂球菌和蜂房類芽孢桿菌活性的抗生素，因此這些菌株(或其衍生物)可以用作預(yù)防和/或治療性處理尤其是歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病和蜂房類芽孢桿菌介導(dǎo)疾病的組合物的基礎(chǔ)。
或者，可以遺傳工程改造其它微生物(尤其是細(xì)菌)成為表達(dá)以上定義的抗生素的宿主。
本發(fā)明所用細(xì)菌可以帶有一或多個改變毒性或/和抗生素生產(chǎn)能力的突變，和/或由減毒或無毒菌株構(gòu)成。在接種物是幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種的實施方案中這是尤其優(yōu)選的，因為該細(xì)菌的一些株引起一種稱作粉狀鱗片病(powdery scale)的輕微疾病。
減毒或無毒菌株可以容易地通過在實驗室培養(yǎng)基上重復(fù)傳代培養(yǎng)、誘變/篩選技術(shù)或毒性決定因素的定向誘變來產(chǎn)生。
本發(fā)明所治療或預(yù)防的蜜蜂疾病典型地是由細(xì)菌感染介導(dǎo)的疾病(例如由幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種，幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種，蜂房類芽孢桿菌，或冥王星蜜蜂球菌介導(dǎo)的疾病)。
在尤其優(yōu)選的實施方案中，該蜜蜂疾病為蜜蜂幼蟲腐臭病(即美洲和歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病)。作為替代，或此外，該疾病可以是粉狀鱗片病。
另一方面，本發(fā)明涉及一種類芽孢桿菌屬(例如幼蟲類芽孢桿菌)的減毒或無毒菌株。尤其優(yōu)選幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種、幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種或蜂房類芽孢桿菌的減毒或無毒菌株。
上述本發(fā)明減毒或無毒菌株可以用來治療性處理或預(yù)防蜜蜂感染。這些細(xì)菌株在上文所述的本發(fā)明方法和組合物中作為接種物有特殊用途。
在又一方面，本發(fā)明涉及接種物在制備用于治療或預(yù)防蜜蜂感染的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的這個方面中，該藥物優(yōu)選是根據(jù)本發(fā)明的組合物(例如上文定義的組合物)。
本發(fā)明還涉及本質(zhì)上從上文描述的微生物中分離的抗生素，以及這些抗生素在治療或預(yù)防以上討論的蜜蜂疾病中的應(yīng)用。這些抗生素制劑可以按與現(xiàn)有抗生素相同的方式(見上文)來施用。
現(xiàn)在通過參考以下非限制性實施例來闡明本發(fā)明。實施例1幼蟲類芽孢桿菌抗生素敏感性(透明區(qū))我們進(jìn)行了生物學(xué)試驗以闡明幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens變種(Paenibacillus larvae var.pulvifaciens)對各種微生物種的抗生素活性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在含有接種了測試微生物的生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中進(jìn)行試驗。將一個帶有幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens變種(PLP)的圓盤置于培養(yǎng)皿的中央，然后測量測試微生物的生長程度。下表1中記錄了圓盤周圍透明區(qū)的相對大小。
表1
表中所示結(jié)果說明幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens變種對于殺滅與AFB有關(guān)的致病株幼蟲類芽孢桿菌larvae變種(PLL)，以及在感染蜜蜂幼蟲腐臭病的蜂房內(nèi)還發(fā)現(xiàn)的蜂房類芽孢桿菌是有效的。這些結(jié)果也顯示它具有抗一定范圍內(nèi)的其它細(xì)菌的抗生素活性，而且抗革蘭氏陽性細(xì)菌的活性強于抗革蘭氏陰性細(xì)菌的活性。
檢測了PLP的3個株，發(fā)現(xiàn)每個菌株都可以殺死大范圍的來自不同地理來源如英國、斯洛文尼亞、澳大利亞和新西蘭的PLL株。沒有發(fā)現(xiàn)PLL株影響PLP。
這3種與蜜蜂有關(guān)的致病性類芽孢桿菌屬細(xì)菌都產(chǎn)生抗體，這在一定程度上解釋了它們在蜜蜂中的行為。因此，AFB感染的物質(zhì)經(jīng)常表現(xiàn)為單一培養(yǎng)物。對于EFB，冥王星蜜蜂球菌是第一個出現(xiàn)在蜜蜂幼蟲腸內(nèi)巨大細(xì)胞團(tuán)中的生物體。幼蟲死后，條件明顯有利于蜂房類芽孢桿菌，其占據(jù)主要地位并抑制冥王星蜜蜂球菌，以致于可能顯微鏡下很難在死的幼蟲中發(fā)現(xiàn)冥王星蜜蜂球菌，盡管在疾病早期冥王星蜜蜂球菌已形成濃密的優(yōu)勢培養(yǎng)物。用抗生素術(shù)語來說，實施的試驗證實蜂房類芽孢桿菌可以殺死廣譜細(xì)菌，包括冥王星蜜蜂球菌但不包括幼蟲類芽孢桿菌(PLP和PLL)。PLL可以殺死蜂房類芽孢桿菌、冥王星蜜蜂球菌以及所有的其它測試菌株，但不影響PLP。PLP可以殺死(蜜蜂相關(guān)范圍內(nèi)的)所有微生物，盡管對于所有這三種菌株，酵母(釀酒酵母)和藤黃微球菌相對具有抗性。實施例2競爭試驗為了給PLP對PLL殺傷作用的機制提供更多的信息，通過在豐富培養(yǎng)基上并排接種PLL和PLP，設(shè)立并排(side by side)競爭試驗。測試的兩個菌株呈斑塊狀生長，幾天后，PLL在緊鄰PLP的一邊開始后退。又幾天后，僅在離PLP的最遠(yuǎn)端留有一個模糊的生長邊緣。對后退邊緣細(xì)胞的顯微鏡觀察顯示空胞、原生質(zhì)體，否則就是受損細(xì)胞；來自PLL斑溶解部分的樣品顯示僅是碎片。因此，這些實驗表明PLP產(chǎn)生的抗生素是溶細(xì)胞性的而不是抑菌性的。實施例3PLP殺傷PLL和其它致病性類芽孢桿菌屬細(xì)菌的機制我們發(fā)現(xiàn)PLP對PLL(美洲蜜蜂幼蟲腐臭病細(xì)菌)的作用是由于細(xì)菌素引起的，該細(xì)菌素在生長的早期產(chǎn)生，并在整個生長期持續(xù)產(chǎn)生。該細(xì)菌素對PLL具有相當(dāng)?shù)奶禺愋院腿芫饔?。?所列的大部分細(xì)菌對這種細(xì)菌素是不敏感的，盡管偶爾一些種類如枯草芽孢桿菌似乎是敏感的。我們已鑒定該細(xì)菌素具有熱敏感性(100℃ 2分鐘即可將其破壞)和蛋白激酶K敏感性。
廣譜抗菌活性出現(xiàn)在孢子形成開始的時候。在上面描述的同等條件下該活性是熱不敏感的。不希望受任何理論的束縛，可以認(rèn)為該活性是由抗生素化合物的存在導(dǎo)致的。經(jīng)熱處理的抗生素提取物不能抑制PLL，因此可以認(rèn)為混合物中僅有該細(xì)菌素負(fù)責(zé)此抑制活性。實施例4組合物A養(yǎng)蜂用組合物把PLP孢子接種物分散在含50％蔗糖水溶液的糖漿中形成液體組合物。這一組合物用作蜜蜂的食物添加成分，可以布置在蜂房內(nèi)或蜂房附近的適合位置。組合物B小糖塊組合物將其中散布有PLP接種物的糖壓縮制成固體小塊或餅狀物(養(yǎng)蜂業(yè)中稱作小糖塊)。組合物C撒粉組合物把糖研磨成細(xì)粉末，然后在粉末中混入PLP接種物，制成撒粉組合物。該撒粉可直接施用于蜂房內(nèi)的蜂巢或是蜂房的內(nèi)表面，或是直接施用于蜜蜂群體。組合物D噴霧組合物把PLP接種物分散到水中制成液體噴霧組合物。這種組合物可以用于噴灑蜂房內(nèi)部或蜂巢，或是直接噴灑蜂群。
以上實施例僅僅為了舉例說明，而不是意圖從任何方面限制本發(fā)明。
權(quán)利要求
1.用于治療或預(yù)防蜜蜂疾病的組合物，該組合物包含(a)接種物；(b)用于將該接種物遞送到蜂房以便在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系的養(yǎng)蜂用遞送載體。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述養(yǎng)蜂用遞送載體是指如下任何一種物質(zhì)(a)小糖塊；(b)糖漿；(c)浸液；(d)撒粉；(e)糊狀物。
3.權(quán)利要求2(a)的組合物，其中所述小糖塊是(a)糖小糖塊；或(b)糖和脂肪混合小糖塊。
4.權(quán)利要求2(b)的組合物，其中所述糖漿含有糖和水。
5.權(quán)利要求2(d)的組合物，其中所述撒粉含有糖。
6.權(quán)利要求2(e)的組合物，其中所述糊狀物是花粉替代物。
7.用于治療或預(yù)防蜜蜂疾病的方法，包括接種蜂房以在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系。
8.以上權(quán)利要求之任何一項的組合物或方法，其中所述蜂房容納有蜜蜂群體。
9.以上權(quán)利要求之任何一項的組合物或方法，其中所述接種物包含一種或多種微生物，這些微生物產(chǎn)生有抗一種或多種蜜蜂病原體活性的一種或多種抗生素。
10.權(quán)利要求9的組合物或方法，其中所述抗生素具有抗冥王星蜜蜂球菌和/或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的活性。
11.權(quán)利要求9或10的組合物或方法，其中所述抗生素是溶菌的。
12.權(quán)利要求9-11之任意一項的組合物或方法，其中所述抗生素是幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種中所發(fā)現(xiàn)的抗冥王星蜜蜂球菌和/或抗幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的抗生素，或其同系物。
13.權(quán)利要求9-12之任意一項的組合物或方法，其中所述抗生素具有抗如下微生物的活性大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、惡臭假單孢菌、銅綠假單胞菌、藤黃微球菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蜂房類芽孢桿菌、幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種、Paenibacillus apiarius、單核細(xì)胞增生利斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌和冥王星蜜蜂球菌。
14.權(quán)利要求9-13之任意一項的組合物或方法，其中所述微生物含有細(xì)菌。
15.權(quán)利要求14的組合物或方法，其中所述細(xì)菌含有細(xì)菌內(nèi)生孢子。
16.權(quán)利要求15的組合物或方法，其中所述細(xì)菌內(nèi)生孢子是經(jīng)過洗滌和/或濃縮的。
17.權(quán)利要求14-16之任意一項的組合物或方法，其中所述細(xì)菌包含類芽孢桿菌屬細(xì)菌。
18.權(quán)利要求17的組合物或方法，其中所述類芽孢桿菌屬細(xì)菌是(a)幼蟲類芽孢桿菌的亞種，例如幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種，或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種的減毒或無毒菌株；或(b)蜂房類芽孢桿菌。
19.權(quán)利要求14-16之任意一項的組合物或方法，其中所述細(xì)菌經(jīng)遺傳工程改造，表達(dá)權(quán)利要求9-13之任意一項中所定義的抗生素。
20.權(quán)利要求14-19之任意一項的組合物或方法，其中所述細(xì)菌(a)帶有一或多個改變毒性和/或抗生素生產(chǎn)的突變；或(b)含有減毒或無毒菌株。
21.以上權(quán)利要求之任意一項的組合物或方法，其中所述蜜蜂疾病是由細(xì)菌感染介導(dǎo)的。
22.權(quán)利要求21的組合物或方法，其中所述蜜蜂疾病是由幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種、蜂房類芽孢桿菌或冥王星蜜蜂球菌介導(dǎo)的。
23.以上權(quán)利要求之任意一項的組合物或方法，其中所述蜜蜂疾病是蜜蜂幼蟲腐臭病。
24.權(quán)利要求23的組合物或方法，其中所述疾病是美洲或歐洲蜜蜂幼蟲腐臭病。
25.權(quán)利要求21的組合物和方法，其中所述疾病是粉狀鱗片病。
26.類芽孢桿菌屬的減毒或無毒菌株。
27.權(quán)利要求26的菌株，其是幼蟲類芽孢桿菌。
28.權(quán)利要求27的菌株，其是幼蟲類芽孢桿菌pulvifaciens亞種或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種。
29.權(quán)利要求26的菌株，其是蜂房類芽孢桿菌。
30.權(quán)利要求26-30之任意一項的菌株在治療或預(yù)防蜜蜂感染中的應(yīng)用。
31.權(quán)利要求1-25之任意一項的組合物或方法，其中所述接種物含有權(quán)利要求26-30之任意一項的菌株。
32.接種物在制備用于治療或預(yù)防蜜蜂感染的藥物中的應(yīng)用。
33.權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中所述藥物是權(quán)利要求1-25之任意一項中所定義的組合物。
34.權(quán)利要求32或33的應(yīng)用，其中所述接種物含有權(quán)利要求1-25之任意一項中所定義的微生物，或權(quán)利要求26-30之任意一項中所定義的減毒或無毒菌株。
全文摘要
本發(fā)明提供治療或預(yù)防蜜蜂疾病的組合物，該組合物包含(a)接種物；(b)用于將該接種物遞送到蜂房以便在其中建立一個治療性和/或保護(hù)性微生物區(qū)系的養(yǎng)蜂用遞送載體。該接種物優(yōu)選包含一種或多種微生物，這些微生物產(chǎn)生有抗一種或多種蜜蜂病原體活性的一種或多種抗生素，例如具有抗冥王星蜜蜂球菌和/或幼蟲類芽孢桿菌larvae亞種活性的抗生素。
文檔編號A01K51/00GK1466415SQ99815108
公開日2004年1月7日 申請日期1999年11月26日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月26日
發(fā)明者S·N·普林斯, B·N·丹瑟, S N 普林斯, 丹瑟 申請人:Uc3加的夫大學(xué)學(xué)院咨詢有限公司