一種金花茶的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種金花茶的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金花茶屬于山茶科、山茶屬，與茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等為孿生姐妹。金花茶的花金黃色，耀眼奪目，仿佛涂著一層蠟，晶瑩而油潤(rùn)，似有半透明之感。金花茶單生于葉腋，花開(kāi)時(shí)，有杯狀的、壺狀的或碗狀的，嬌艷多姿，秀麗雅致。以前，人們沒(méi)有見(jiàn)到過(guò)花色金黃的種類(lèi)。I960年，中國(guó)科學(xué)工作者首次在廣西南寧一帶發(fā)現(xiàn)了一種金黃色的山茶花，被命名為金花茶。國(guó)外稱(chēng)之為神奇的東方魔茶，被譽(yù)為“植物界大熊貓”、“茶族皇后”。
[0003]金花茶是一種古老的植物，極為罕見(jiàn)，分布極其狹窄，全世界90%的野生金花茶僅分布于中國(guó)廣西防城港市十萬(wàn)大山的蘭山支脈一帶，生長(zhǎng)于海拔700米以下，以海拔200?500米之間的范圍較常見(jiàn)，垂直分布的下限為海拔20米左右。如金花茶在防城縣大王江附近的濱海丘陵臺(tái)地仍有分布。垂直分布的上限可達(dá)海拔890米，如寧明縣那陶大山仍可見(jiàn)到個(gè)別小瓣金花茶，數(shù)量極少，是世界上稀有的珍貴植物。金花茶喜溫暖濕潤(rùn)氣候，喜歡排水良好的酸性土壤，苗期喜蔭蔽，進(jìn)入花期后，頗喜透射陽(yáng)光。對(duì)土壤要求不嚴(yán)，微酸性至中性均土壤中可生長(zhǎng)。耐瘠薄，也喜肥，耐澇力強(qiáng)。
[0004]據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所、廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心、廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)中心、北京疾病預(yù)防控制中心中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所、廣西壯族自治區(qū)分析測(cè)試研宄中心、廣西中醫(yī)學(xué)院、廣西農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心等權(quán)威機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)表明:金花茶屬無(wú)毒級(jí)、含有400多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、無(wú)毒副作用。富含茶多糖、茶多酚、總皂甙、總黃酮、茶色素、咖啡因、蛋白質(zhì)、維生素B1、B2、維生素C、維生素E、葉酸、脂肪酸、B-胡蘿卜素等多種天然營(yíng)養(yǎng)成份；金花茶含有茶氨酸、蘇氨酸等幾十種氨基酸，以及富含有多種對(duì)人體具有重要保健作用的天然有機(jī)鍺(Ge)、砸(Se)、鉬(Mo)、鋅(Zn)、釩(V)等微量元素，和鉀(K)、鈣(Ca)、鎂(Mg)等宏量元素。自2009年成功舉辦首屆金花茶節(jié)以來(lái)，金花茶節(jié)成為了防城港市主打的四大文化節(jié)慶品牌之一。金花茶產(chǎn)業(yè)也得到了迅速發(fā)展，涌現(xiàn)出桂人堂金花茶、中港高科國(guó)寶金花茶、百喜金花茶等一批龍頭企業(yè)，金花茶系列產(chǎn)品分獲廣西名牌產(chǎn)品、廣西著名商標(biāo)，產(chǎn)品暢銷(xiāo)國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)，年產(chǎn)值超過(guò)12億元。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種金花茶的快速繁殖方法，能降低繁殖的成本，生長(zhǎng)周期短、繁殖率高、方便管理、利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控大大的節(jié)約了人力、物力和田間作物的土地。
[0006]本發(fā)明的方案是通過(guò)這樣實(shí)現(xiàn)的:
一種金花茶的快速繁殖方法，包括如下步驟:
(I)外植體的消毒:采摘6?7月份的金花茶葉，使用20?40%樂(lè)果乳劑稀釋400?600倍液浸泡5?lOmin，取出后放入超凈工作臺(tái)使用4%維生素C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸進(jìn)行消毒5?lOmin，然后用無(wú)菌水沖洗3?5次，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉表面的無(wú)菌水；使用樂(lè)果乳劑對(duì)剛采摘的金花茶葉進(jìn)行消毒，能將金花茶葉上的害蟲(chóng)爬行過(guò)后殘留下的有害液體去除，然后使用維生素C浸泡再用次氯酸消毒不僅能有效延緩?fù)庵搀w褐化時(shí)間和保持外植體活力，而且能將金花茶葉上的細(xì)菌殺死，再使用無(wú)菌水沖洗，確保金花茶葉上其他液體無(wú)殘留，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉表面的無(wú)菌水，以防將金花茶葉放入愈傷組織培養(yǎng)基中對(duì)培養(yǎng)基有稀釋作用。
[0007](2)愈傷組織培養(yǎng):愈傷組織培養(yǎng):使用解剖刀沿著金花茶葉的莖干位置橫切出長(zhǎng)15?18cm，寬10?15cm的葉條片，將葉條片放入已經(jīng)裝入愈傷組織培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕壓葉條片，在29?31°C下暗培養(yǎng)8?15天，而后轉(zhuǎn)入26?28°C下進(jìn)行8?15天的暗培養(yǎng)，獲得金花茶愈傷組織；采用光暗培養(yǎng)的方式，暗培養(yǎng)的時(shí)間原大于光培養(yǎng)，可以避免金花茶葉修復(fù)期間過(guò)多的光照使其進(jìn)行光合作用生成糖類(lèi)，失去金花茶葉體內(nèi)的一部分物質(zhì)和能量，使得完成修復(fù)過(guò)程的物質(zhì)和能量的總量減少，造成形成愈傷組織的時(shí)間變慢。
[0008](3)愈傷組織分化芽:將上述得到的愈傷組織移置芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其中，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS+6?8g/L瓊脂+25?29 g/L蔗糖+ 0.3?0.8mg/L 6?芐基嘌呤+0.8?1.5mg/L萘乙酸，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6.0?6.5，轉(zhuǎn)入光照時(shí)間為12?14h/d、光照強(qiáng)度為20001X的條件下進(jìn)行培育30?40天；在長(zhǎng)期光照情況下生長(zhǎng)，有助于其組織化芽。
[0009](4)芽生根:待步驟(3)中芽長(zhǎng)至5?6cm時(shí)，將芽移置根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，其中，根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS+6?8g/L瓊脂+25?29g/L蔗糖+0.8?2.5mg/L吲哚乙酸+0.5?1.5mg/L萘乙酸+0.8?1.5mg/L活性炭+0.8?1.5mg/L的硫酸亞鐵，于25?28°C條件下，光暗培養(yǎng)20?30天，光照強(qiáng)度為20001X，培養(yǎng)出幼苗，組培結(jié)束。采用萘乙酸為培養(yǎng)基其中之一的添加物質(zhì)能夠促進(jìn)細(xì)胞分裂和擴(kuò)大，可誘導(dǎo)生根；而抗褐化劑活性炭+0.8?1.5mg/L的硫酸亞鐵可降低組培過(guò)程中外植體、原球莖和叢生芽產(chǎn)生褐化，目前已達(dá)到外植體初誘導(dǎo)、原球莖繼代增殖褐化率控制在15%以下，叢生芽生根誘導(dǎo)褐化率低于5%以下。
[0010]本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說(shuō)明，所述每個(gè)培養(yǎng)皿放入3?5片的葉條片。適當(dāng)放入葉條片能保證每條葉條片能充分的吸收足量的養(yǎng)分，防止養(yǎng)分不足造成培養(yǎng)失敗，即提高繁殖率。
[0011]本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說(shuō)明，所述愈傷組織培養(yǎng)基的配方為MS+6?8g/L瓊脂+25?29 g/L蔗糖+ 0.3?0.8mg/L 6?芐基嘌呤+0.8?1.5mg/L萘乙酸，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值為6.5?7.0 ;將培養(yǎng)基放入高溫滅菌鍋，在121?130°C、1.1?1.5 kg/cm2條件下進(jìn)行滅菌30?50min，然后取出冷卻至45 °C后迅速在超凈工作臺(tái)中傾倒分裝到已經(jīng)經(jīng)過(guò)高溫滅菌鍋滅菌的培養(yǎng)皿中。
[0012]本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說(shuō)明，所述培養(yǎng)皿的規(guī)格為90 X 15mm ;所述裝入培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基為培養(yǎng)皿體積的1/3?1/2。采用直接傾倒的方法，相比使用量筒量取定量的培養(yǎng)基，具有快速，簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。
[0013]本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說(shuō)明，所述步驟(3)和步驟(4)中的光培養(yǎng)周期為不超過(guò)15h。。在愈傷組織發(fā)芽和生根期間，需要吸收足夠的光源來(lái)形成葉綠素繼而能通過(guò)吸收光源來(lái)完成光合作用，光合作用能夠合成能源，補(bǔ)充生長(zhǎng)所需的能量。
[0014]本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說(shuō)明，所述金花茶葉為顏色嫩綠、完整、無(wú)病蟲(chóng)害；金花茶葉的采摘時(shí)間為晚上I?2點(diǎn)。在深夜對(duì)金花茶葉進(jìn)行采摘，深夜的金花茶葉已經(jīng)停止進(jìn)行光合作用，但是還是進(jìn)行呼吸作用，消耗了體內(nèi)的淀粉，為金花茶葉進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)提供良好的條件，減少形成愈傷組織的時(shí)間。與現(xiàn)有技術(shù)中先采摘葉片后進(jìn)行暗培養(yǎng)一段時(shí)間后再進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)的工序更加簡(jiǎn)單。
[0015]本發(fā)明的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著進(jìn)步是:
1.本發(fā)明利用深夜的金花茶葉進(jìn)行組培，為金花茶葉進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)提供良好的條件，能夠快速使金花茶葉形成金花茶葉愈傷組織，進(jìn)而減少了組培的時(shí)間。
[0016]2.本發(fā)明形成金花茶葉愈傷組織后發(fā)芽、生根都進(jìn)行光暗培養(yǎng)，不僅僅通過(guò)光培養(yǎng)促進(jìn)金花茶葉愈傷組織形成葉綠素，進(jìn)行光合作用合成能源提供生長(zhǎng)所需能量，而且通過(guò)暗培養(yǎng)促進(jìn)其進(jìn)行呼吸作用，物質(zhì)轉(zhuǎn)換，促進(jìn)生長(zhǎng)。
[0017]3.本發(fā)明光培養(yǎng)中期培育使用的是中強(qiáng)的光照強(qiáng)度，可以有效的提高種植培育速度；
4.本發(fā)明的方法有利于工業(yè)化生產(chǎn)和自動(dòng)化監(jiān)控，大大的節(jié)約了人力、物力和田間作物的土地；在金花茶苗栽培生產(chǎn)領(lǐng)域中具有極大的推廣價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，以使本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征更易于被理解，應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例僅僅是用于本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0019]實(shí)施例1:
一種金花茶的快速繁殖方法，包括如下步驟:
(1)外植體的消毒:于7月份晚上I點(diǎn)采摘顏色嫩綠、完整、無(wú)病蟲(chóng)害的金花茶葉，然后使用20%樂(lè)果乳劑稀釋400倍液浸泡5min，取出后放入超凈工作臺(tái)使用4%維生素C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸進(jìn)行消毒5min，然后用無(wú)菌水沖洗3次，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉表面的無(wú)菌水；
(2)愈傷組織培養(yǎng):使用解剖刀沿著金花茶葉的莖干位置橫切出長(zhǎng)15cm，寬1cm的葉條片，將3片的葉條片放入已經(jīng)裝入愈傷組織培養(yǎng)基的規(guī)格為90X15mm的培養(yǎng)皿中，輕壓葉條片，在29°C下暗培養(yǎng)8天，而后轉(zhuǎn)入26°C下進(jìn)行8天的暗培養(yǎng)，獲得金花茶愈傷