一種重樓活體塊莖快速分蘗繁殖技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥材重樓的快速繁殖技術(shù)，特別是一種重樓活體塊莖快速分蘗繁殖技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]重樓(/kris polyphylla Smith var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.)是延齡草科重樓屬多年生草本植物，別名獨(dú)腳蓮、重樓一枝箭、草河車等，是《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)收載的中藥材重樓的基源植物之一。野生重樓分布在云南、四川、貴州等省份，主產(chǎn)區(qū)為云南的滇中、滇西和滇西北地區(qū)，生長(zhǎng)在海拔為1400?3100m，年平均氣溫為10?13 °C，年降雨量850?1200mm的冷涼山區(qū)，多生于常綠闊葉林、針闊混交林、山坡陰濕處及灌木叢山地。重樓從種子萌發(fā)生長(zhǎng)發(fā)育5?6年后，才進(jìn)入生殖生長(zhǎng)期。由于生長(zhǎng)緩慢，多年的大量采挖使野生重樓資源面臨枯竭。
[0003]重樓以根莖入藥，秋季采收。重樓最早以蚤休之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是我國(guó)常用的傳統(tǒng)中藥之一。其性微寒味苦，有小毒，歸肝經(jīng)，具有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚等功效,主治疔瘡癰腫,咽喉腫痛,毒蛇咬傷,跌打傷痛,驚風(fēng)抽搐等癥。總皂苷是重樓的主要成分指標(biāo)，《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)規(guī)定，重樓干燥藥材中含重樓皂苷I和重樓皂苷II的總量，不得少于0.80%。現(xiàn)代藥理研究證明，重樓有止血、祛痰和抑菌、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗早孕殺滅精子、抗細(xì)胞毒等作用，臨床用于治療功能性子宮出血、神經(jīng)性皮炎、外科炎癥以及腫瘤等，具有顯著的療效。國(guó)內(nèi)以重樓為主要原料的產(chǎn)品有云南白藥系列、宮血寧、熱毒清、抗病毒顆粒、季德勝蛇藥片、重樓解毒酊等，產(chǎn)值40億元。
[0004]由于制藥企業(yè)對(duì)重樓原料大量的需求，使得重樓野生資源長(zhǎng)期過(guò)度無(wú)序地采挖，野生藥材的供應(yīng)量不斷減少，已不能滿足國(guó)內(nèi)以重樓為原料的制藥企業(yè)的生產(chǎn)需求。重樓從播種到收獲利用需八?十年的時(shí)間，制藥企業(yè)為獲取更多原料，大幅度提高重樓收購(gòu)價(jià)格，現(xiàn)在好的產(chǎn)品收購(gòu)價(jià)格已達(dá)800元/kg以上，是五年前的16?30倍。收購(gòu)價(jià)格上漲再刺激農(nóng)民過(guò)度的采挖，采挖速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了野生資源繁殖生長(zhǎng)的速度，導(dǎo)致重樓成為稀缺資源。重樓的稀缺已成為制約相關(guān)制藥企業(yè)規(guī)模生產(chǎn)和可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。進(jìn)行重樓人工栽培，保證藥材有效供應(yīng)，滿足制藥企業(yè)需求，造福人類健康，已勢(shì)在必行。但人工栽培重樓存在一些急待攻克的關(guān)鍵技術(shù)。
[0005]重樓種子休眠程度高、萌發(fā)緩慢、出苗率低等生物學(xué)特征限制，種子種苗繁殖難度大；根莖繁殖不僅因使用營(yíng)養(yǎng)體繁殖，重樓塊莖需求量大，使野生資源銳減，而且會(huì)使種質(zhì)退化，抗逆性下降；至今為止，對(duì)重樓的組織培養(yǎng)方面尚未取得令人滿意的結(jié)果。缺乏高效的種苗繁殖技術(shù)和完善的種苗繁育標(biāo)準(zhǔn)體系，缺乏重樓優(yōu)質(zhì)種苗供給是制約重樓栽培快速發(fā)展的關(guān)鍵因素。
[0006]為了解決市場(chǎng)供需矛盾，進(jìn)行重樓人工馴化，發(fā)展人工栽培，一些學(xué)者開(kāi)展了重樓種苗繁育的研究。
[0007]種子繁育種苗:孟繁蘊(yùn)等(2006)研究發(fā)現(xiàn)重樓種子休眠和發(fā)育過(guò)程中種子內(nèi)源激素ABA含量顯著下降，與休眠解除有較大的相關(guān)性，GA3，ΙΑΑ，ZR含量逐漸升高，變化趨勢(shì)與重樓分化和發(fā)育一致。黃瑋等(2008)進(jìn)一步探討重樓種子休眠機(jī)理，研究結(jié)果表明重樓種子不存在吸水障礙，與休眠無(wú)關(guān)，內(nèi)源激素ABA和GA3在重樓種子休眠與萌發(fā)中發(fā)揮重要作用。陳翠等(2007年)研究不同溫度、不同播種方式(播種時(shí)間、覆土厚度、地膜覆蓋)等因素對(duì)重樓種子萌發(fā)和出苗的影響，結(jié)果表明，重樓種子胚后熟和萌發(fā)的最適溫度在18?20°C，在此溫度下處理3?4個(gè)月以后，轉(zhuǎn)至O?10°C低溫處理2?4個(gè)月，可在翌年4月出苗；適宜的播種時(shí)間是4月份以前，育苗土覆蓋厚度為I cm左右，播種后用黑色地膜進(jìn)行覆蓋，可提高出苗率。
[0008]陳翠等(2009年)在相同種植條件下，對(duì)來(lái)源于云南省23份云南重樓種源進(jìn)行了物候期、形態(tài)特征及經(jīng)濟(jì)性狀的觀察、分析與評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，不同地理種源的重樓生長(zhǎng)物候期、形態(tài)特征及經(jīng)濟(jì)性狀園地理來(lái)源不同有一定的差異。
[0009]切塊繁殖:榮林姚(2008)對(duì)重樓的無(wú)性繁殖技術(shù)進(jìn)行研究，以培養(yǎng)種苗。方法采用根莖分割法繁殖。結(jié)果根莖分割法繁殖出苗率高(98%)。結(jié)論根莖分割法可縮短重樓的生長(zhǎng)周期，其應(yīng)用可為重樓規(guī)?；N植提供良好的種源。陳翠等(2010)研究云南重樓種苗繁育技術(shù)。在對(duì)云南重樓種苗繁育技術(shù)多年試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，總結(jié)了云南重樓有性和無(wú)性繁育技術(shù)。通過(guò)種子胚后熟催芽處理，當(dāng)年出苗率達(dá)到30%以上，種子育苗5年開(kāi)花結(jié)果可移栽作種苗，根莖單重達(dá)到8?15g ;帶頂芽的切段當(dāng)年可移栽，成苗率達(dá)到90%以上，不帶頂芽的切段第3年開(kāi)花結(jié)果成苗，成苗率達(dá)到78%以上，根莖單重達(dá)到7?12g。
[0010]通過(guò)此技術(shù)可實(shí)現(xiàn)云南重樓種苗的規(guī)范化快速生產(chǎn)，促進(jìn)云南重樓的產(chǎn)業(yè)化栽培和發(fā)展。
[0011]組織培養(yǎng):李群等(2006年)以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，對(duì)不同器官，不同取材時(shí)期的重樓外植體進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)研究。結(jié)果表明:6-BA和IAA有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；生長(zhǎng)期的幼芽組織是較適宜的培養(yǎng)器官，其愈傷組織的誘導(dǎo)頻率達(dá)26.7%。至今為止，對(duì)重樓的組織培養(yǎng)方面尚未取得令人滿意的結(jié)果O
[0012]中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所多次試驗(yàn)采用莖、葉、花蕾作外植體對(duì)重樓進(jìn)行組織培養(yǎng)，均未得到愈傷組織，雖用幼芽曾誘導(dǎo)出愈傷組織，但此愈傷組織生長(zhǎng)緩慢，且不含原植物中的皂甙。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]為了克服現(xiàn)有方法在選材和技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了在重樓活體塊莖上進(jìn)行快速分蘗繁殖的方法，在不破壞活體塊莖的條件下，通過(guò)生物學(xué)原理阻斷植株原生長(zhǎng)點(diǎn)，促使活體重樓塊莖產(chǎn)生多點(diǎn)萌發(fā)。
[0014]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:以正常生長(zhǎng)的重樓塊莖為母本，人為阻斷活體重樓塊莖的原生長(zhǎng)點(diǎn)，通過(guò)生物學(xué)原理促使活體重樓塊莖產(chǎn)生萌發(fā)多個(gè)新的生長(zhǎng)點(diǎn)，從而達(dá)到快速、多量無(wú)性繁殖新植株體(種源)的目的，解決現(xiàn)有技術(shù)種子繁育種苗、切塊繁殖和組織培養(yǎng)三種方式種苗繁殖率低、出苗慢、消耗大量塊莖的問(wèn)題。
[0015]上述技術(shù)方案，主要包括以下步驟:
(!)重樓母本的選擇:選擇基地條件好，定植4-6年以上，塊莖重量80-120克以上，植株生長(zhǎng)旺盛的重樓作為母本。
[0016](2)追肥:在常規(guī)管理的基礎(chǔ)上，從6月份重樓的生長(zhǎng)旺盛期開(kāi)始，每隔45天追施富含鈣、磷、鉀、氮的有機(jī)肥，追肥2-4次，按每畝130-150公斤施肥，保持土壤濕度65%，控制遮蔭率在70-75%，為母本儲(chǔ)存好養(yǎng)份，為來(lái)年多點(diǎn)萌發(fā)分蘗繁殖積存養(yǎng)分。
[0017](3)促發(fā)生長(zhǎng)點(diǎn):在12月份重樓地上植株到苗，新芽尚未出土?xí)r，撥開(kāi)覆土找到頂芽，切除原生長(zhǎng)點(diǎn)即頂芽，毀壞原生長(zhǎng)點(diǎn)，促使重樓塊莖萌發(fā)新的生長(zhǎng)點(diǎn)。
[0018](4)頂芽愈傷移栽:切除的頂芽的切口進(jìn)行愈傷處理，可用草木灰、創(chuàng)痕靈等直接在創(chuàng)口涂抹覆蓋，作愈傷處理后直接移栽，移栽后覆土。
[0019](5)出苗移栽:到次年3-5月份新的生長(zhǎng)點(diǎn)即可萌發(fā)長(zhǎng)出新芽并出苗；新芽經(jīng)過(guò)一年的常規(guī)管理生長(zhǎng)后即可移栽，之后按正常的常規(guī)管理即可使頂芽生長(zhǎng)為正常植株。
[0020]本發(fā)明具有以下有益效果:
1、不損壞母本重樓；母本頂芽可現(xiàn)時(shí)移栽，在母本生長(zhǎng)的過(guò)程中就可以有效積累肥料，便于后期的出芽生長(zhǎng)，追肥次數(shù)間隔大減少肥料用量；
2、新芽形成快，僅需一年的時(shí)間，相比現(xiàn)有技術(shù)一般需要三年才能移栽，提高了產(chǎn)量，縮短生長(zhǎng)和培育周期，保證種苗的后續(xù)；
3、成苗率高，一個(gè)母本可形成3-30個(gè)新芽，呈幾何級(jí)擴(kuò)繁，除去頂芽以后促進(jìn)其他的生長(zhǎng)點(diǎn)