一種金花茶種苗繁育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種金花茶的種苗繁育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金花茶組培快繁技術(shù)發(fā)展至今，有關(guān)金花茶離體培養(yǎng)的研宄報(bào)道較少，研宄主要集中于利用成年植株莖段為外植體誘導(dǎo)成苗，如鄭若仙(1980)、廖漢刃(1987)、顏幕勤(1988)、林莉(2005)。然而，利用莖段作為外植體仍存在諸多問題，如莖段滅菌很難徹底，極易發(fā)霉；木本植物莖段極易褐變，通過延長(zhǎng)流水沖洗時(shí)間、提高消毒液濃度和延長(zhǎng)滅菌時(shí)間進(jìn)行處理可以一定程度上緩解褐變，但效果并不理想；另一方面腋芽誘導(dǎo)難度大，不易掌握。金花茶生長(zhǎng)緩慢，枝條比較珍貴，過度剪取枝條會(huì)影響母株的開花，利用莖段作為外植體，枝條消耗大，獲得的無菌苗較少，且人力消耗大。
[0003]另外，有報(bào)道利用種子、子胚、葉片等作為外植體的研宄，但此研宄僅局限于誘導(dǎo)愈傷組織，且沒有全面系統(tǒng)的報(bào)道愈傷組織分化成苗的研宄。因此對(duì)于金花茶組培快繁技術(shù)的研宄應(yīng)當(dāng)在保證誘導(dǎo)成活率的基礎(chǔ)上盡可能的節(jié)省外植體材料，繼而形成一套全面、高效、實(shí)用性強(qiáng)的金花茶組培快繁技術(shù)體系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種快速、污染率低、材料消耗低、誘導(dǎo)萌發(fā)率高的金花茶種苗繁育方法。
[0005]本發(fā)明是以如下方式實(shí)現(xiàn)的:
[0006]一種金花茶種苗繁育方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:
[0007](I)果實(shí)預(yù)處理:選取尚未開裂，綠色，飽滿，無病蟲害的果實(shí)，用毛刷刷干凈果實(shí)表面的雜質(zhì)，然后用飽和洗衣粉水浸泡15-20min，流動(dòng)清水沖洗20-30min ；
[0008](2)果實(shí)滅菌處理:在超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡15-20min，無菌水洗3-4次，然后用解剖刀剖開果實(shí)，取出種子，放入0.1 %升汞中浸泡5-10min，無菌水洗4_5次，最后在接種盤中，切開種皮，取出胚乳，接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，將有胚芽的一端置于培養(yǎng)基底部，操作過程中不得傷及種子胚芽部分；
[0009](3)萌發(fā)誘導(dǎo):將胚乳接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中10-15d后，胚芽開始伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，60d后萌發(fā)率達(dá)85-100 %，胚芽可長(zhǎng)至4-5cm ；
[0010](4)初始繼代:將胚乳及胚芽取出，切掉頂芽以及部分胚乳，剩余部分接入繼代培養(yǎng)基中60d后，從胚芽基部長(zhǎng)出大量的叢生芽，增殖倍數(shù)達(dá)6-8倍；
[0011](5)繼代增殖:將叢生芽切成小塊接入繼代增殖培養(yǎng)基中60d后，單芽變壯，且長(zhǎng)出更多小芽，增殖倍數(shù)達(dá)5-7倍；
[0012](6)壯苗:將叢生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壯苗培養(yǎng)基中50d后，單芽伸長(zhǎng)生長(zhǎng)成無根健壯小苗，低于1.5cm的小叢芽繼續(xù)接入繼代增殖培養(yǎng)基中；
[0013](7)煉苗:將小苗放置于煉苗室進(jìn)行煉苗20d后，即可移栽，進(jìn)行瓶外生根；
[0014](8)瓶外生根:移栽前2天，打開瓶蓋，讓小苗適應(yīng)外部空氣濕度。然后取出小苗，洗去培養(yǎng)基，將小苗的基部置于750mg/L的IBA溶液中浸泡10_15min，然后種在黃泥:泥炭= 1:1的基質(zhì)中；
[0015](9)綜合管理:調(diào)試自動(dòng)噴淋系統(tǒng)，于8:00-18:00期間每間隔Ih噴水I次，每次噴淋30-60s，根據(jù)不同季節(jié)進(jìn)行調(diào)整，夏季噴淋時(shí)間長(zhǎng)，冬季噴淋時(shí)間短。
[0016]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟⑵和(3)中所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+GA30.5-1.0mg/Lo
[0017]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟(4)中所述繼代培養(yǎng)基為WPM+6-BA
2.0-4.0mg/Lo
[0018]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟(5)中所述繼代增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA1.0-3.0mg/Lo
[0019]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟(6)中所述壯苗培養(yǎng)基為MS+6-BA
1.0-3.0mg/L+NAA 0.05-0.lmg/L。
[0020]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟(7)中所述煉苗室的溫度為25(±7)°C，光照強(qiáng)度為50001x。
[0021]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)方案的有益效果是:
[0022]1.本發(fā)明方法能快速獲得大量無菌苗，采用未成熟果實(shí)，其種子的種皮比較軟，在超凈工作臺(tái)上容易切開，操作簡(jiǎn)單，污染率低，萌發(fā)率高。
[0023]2本發(fā)明的方法在增殖過程中，采用不完全切除胚乳進(jìn)行繼代，胚乳可以繼續(xù)向胚芽提供營(yíng)養(yǎng)，從而加快胚芽增殖速度。
[0024]3本發(fā)明的方法在移栽階段使用自動(dòng)噴淋，使金花茶組培苗生長(zhǎng)處于較穩(wěn)定的濕度環(huán)境，有效提高成活率。
[0025]4本發(fā)明選取因暴風(fēng)雨或其他原因掉落的未成熟果實(shí)作為外植體，可以有效減少材料的消耗。由于金花茶果實(shí)生長(zhǎng)期一般為每年的7-10月，期間經(jīng)常由于暴風(fēng)雨或其他原因?qū)е麓罅课闯墒旃麑?shí)的掉落，而此類果實(shí)若用作常規(guī)栽培，萌發(fā)率低，而用作本發(fā)明的材料，明發(fā)率則大大提尚，從而提尚材料的利用率。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合具體例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0027]實(shí)施例1:
[0028]一種金花茶種苗繁育方法，按以下步驟進(jìn)行操作:
[0029](I)果實(shí)預(yù)處理
[0030]選取廣西防城港市原生種金花茶的7-8成熟、尚未開裂、綠色、飽滿、無病蟲害的果實(shí)，用毛刷刷干凈果實(shí)表面的雜質(zhì)，然后用飽和洗衣粉水浸泡20min，流水沖洗30min ；
[0031](2)滅菌處理
[0032]在超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡15min，無菌水洗3次，然后用解剖刀剖開果實(shí)，取出種子，放入0.1 %升未中浸泡7min，無菌水洗4次，最后在接種盤中，切開種皮，取出胚乳，接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，將有胚芽的一端置于培養(yǎng)基底部，操作過程中不得傷及種子胚芽部分;
[0033](3)萌發(fā)誘導(dǎo)階段
[0034]誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1^+6^1.011^/1，10(1后胚芽開始伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，60(1以后，萌發(fā)率為92%，胚芽可長(zhǎng)至5cm左右；
[0035](4)初始繼代階段
[0036]將胚乳及胚芽取出，切掉頂芽以及部分胚乳，剩余部分接入繼代培養(yǎng)基WPM+6-BA
3.0mg/L，60d后，從胚芽基部長(zhǎng)出大量的叢生芽，增殖倍數(shù)達(dá)6倍；
[0037](5)繼代增殖階段
[0038]將叢生芽切成小塊接入繼代增殖培養(yǎng)基WPM+6-BA 1.5mg/L，60d后，單芽變壯，且長(zhǎng)出更多小芽，增殖倍數(shù)達(dá)5倍；
[0039](6)壯苗階段
[0040]將叢生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壯苗培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA
0.lmg/L，50d后，單芽伸長(zhǎng)生長(zhǎng)成無根健壯小苗，低于1.5cm的小叢芽繼續(xù)接入繼代增殖培養(yǎng)基中；
[0041](7)煉苗階段
[0042]將小苗放置于煉苗室進(jìn)行煉苗，溫度:25(±7)°C，光照強(qiáng)度50001x，20