一種柞蛹蟲草中藥材的人工培育方法、炮制、檢測(cè)及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬中藥材技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種柞蛹蟲草中藥材的人工培育方法、炮制、 特征成分的檢測(cè)及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草Cordyceps militaris (Linn. et. Fr.) Link為麥角菌科蟲草屬，又名北冬蟲 夏草、北蟲草、蛹草、東北蟲草等，天然野生蛹蟲草始載于《新華本草綱要》，后收載于《中華 本草》、《中藥辭?！贰ⅰ度珖?guó)中草藥匯編》、《中國(guó)藥用孢子植物》、《中華藥?！返戎兴幍浼?。 蛹蟲草作為冬蟲夏草的模式種，可作為冬蟲夏草入藥。此外，人工培育蛹蟲草已獲得成功， 中國(guó)專利申請(qǐng)87106987. 3、中國(guó)專利申請(qǐng)00130381. 3、中國(guó)專利申請(qǐng)201210376581. X公 開了蛹蟲草的人工培育方法。蛹蟲草菌已收載在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS3-286(Z-039)-2005(Z) "蛹蟲草菌粉"藥品標(biāo)準(zhǔn)中。上述公開的文獻(xiàn)并未考慮不同光源 交替照射對(duì)于蛹蟲草培育的作用以及蛹蟲草作為中藥材全草入藥的炮制、特征成分的檢測(cè) 及其新的用途。
[0003] 目前蛹蟲草人工培養(yǎng)品基本上作為高檔食用菌類烹調(diào)用，其食用部位為人工培育 的蛹蟲草子實(shí)體，即真菌部分，而沒有蛹體。衛(wèi)生部2009年根據(jù)《中華人民共和國(guó)食品衛(wèi)生 法》和《新資源食品管理辦法》的規(guī)定，批準(zhǔn)蛹蟲草為新資源食品，其用于食品生產(chǎn)加工。其 公告規(guī)定：蛹蟲草：即人工培養(yǎng)的蛹蟲草子實(shí)體。種屬：子囊菌亞綱、麥角菌科、蟲草屬。生 產(chǎn)工藝簡(jiǎn)述：接種蛹蟲草菌種到培養(yǎng)基上進(jìn)行人工培養(yǎng)，采收蛹蟲草子實(shí)體，經(jīng)烘干等步驟 而制成。食用量<2克/天。使用范圍：直接食用、酒類、罐頭、調(diào)味品、飲料。國(guó)家藥品標(biāo) 準(zhǔn)中蛹蟲草菌粉亦指是菌粉。口服，每日3次，每次lg。而相關(guān)中藥典籍明確指明蛹蟲草必 須全草入藥，即連蛹（蠶蛹部分）帶草（真菌部分）一起入藥。冬蟲夏草也是連蟲帶草一 起入藥（實(shí)際上是以蟲為主）。再有，人工培育的蛹蟲草成分復(fù)雜，而其作為中藥材用于臨 床治療必須保證每批產(chǎn)品特征成分的檢測(cè)、炮制工藝符合規(guī)定，并具有確切的治療效果。因 此，對(duì)于蛹蟲草人工培養(yǎng)品成分的檢測(cè)及控制、炮制工藝的確定，對(duì)其質(zhì)量控制、提高療效 及保證安全性非常重要。本發(fā)明提供了一種用活柞蠶人工培養(yǎng)的柞蛹蟲草中藥材、炮制方 法、特征檢測(cè)方法及用途，與市場(chǎng)上的各種食用級(jí)的蛹蟲草子實(shí)體或蛹蟲草菌粉不同，本發(fā) 明是將柞蛹蟲草全草作為中藥材及中藥飲片使用并具有明確的治療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種人工培育的柞蛹蟲草中藥材的培育及炮制方法。采用 活的、健康的柞蠶蠶蛹，人工接種蛹蟲草菌在溫度15~25°C，培育時(shí)間45~60天，采用藍(lán) 光（60-100勒克斯）及白光（350-400勒克斯）每日交替照射各8-10小時(shí)的條件下培育出 有效成份穩(wěn)定可控的作蛹蟲草中藥材。同時(shí)，作蛹蟲草中藥材（連蛹帶草）的炮制在溫度 不超過60°C的條件下進(jìn)行炮制，工藝為烘干及粉碎，最大限度的保證柞蛹蟲草中藥材有效 成份的活性。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述人工培育的柞蛹蟲草中藥材的特征檢測(cè)方法：采 用高效液相、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)系統(tǒng)及對(duì)照品對(duì)柞蛹蟲草中藥材成分進(jìn)行定性檢測(cè) 及成分指認(rèn)，并采用指紋特征圖譜進(jìn)行指紋檢測(cè)，5個(gè)特征色譜峰相對(duì)保留時(shí)間在±5%之 內(nèi)。經(jīng)過鑒定，各指紋成分分別為：峰1為：尿苷，峰2為：酪氨酸，峰3為：腺苷，峰4為：蟲 草素，峰5為：N-(2)羥基腺苷。
[0006] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是保證所述人工培育的柞蛹蟲草中藥材其相關(guān)成分在各批 次中的穩(wěn)定性。
[0007] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供所述人工培育的柞蛹蟲草中藥材在臨床治療的新用 途。
[0008] 以下通過【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明，本領(lǐng) 域技術(shù)人員可以根據(jù)發(fā)明做出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā) 明所附權(quán)利要求的范圍。
[0009] 本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0010] A -種柞蛹蟲草中藥材的人工培育方法及炮制方法
[0011] -種作蛹蟲草中藥材，為麥角菌科蟲草屬蛹蟲草Cordyceps militaris(Linn. et. Fr.) Link的人工培養(yǎng)品。本品系蛹蟲草菌接種在天蠶蛾科昆蟲作蠶（Antheraea pernyi Geurin-Meneville)的活蛹上，在溫度為15~25°C條件下，經(jīng)過45~60天培育，采用藍(lán)光 (60-100勒克斯）及白光（350-400勒克斯）每日交替照射各8-10小時(shí)，培養(yǎng)出的子座和蛹 體的復(fù)合體：由蛹體與從蛹體長(zhǎng)出的多個(gè)子座相連而成，二者結(jié)合緊密。蛹體呈長(zhǎng)橢圓形， 長(zhǎng)2~4. 5cm，直徑1~2. 5cm ;表面覆蓋黃白色至黃色菌膜，剝落后呈黑褐色至黑色，蛹體 腹部有環(huán)紋10~25個(gè)；質(zhì)較脆，易折斷，斷面略平坦，灰棕色。子座4~20個(gè)，細(xì)長(zhǎng)扁圓柱 形，長(zhǎng)2~8cm，直徑0. 15~0. 25cm ;表面橙黃色至橙紅色，少有分枝，頂端偶有膨大；質(zhì)柔 韌，斷面黃白色。氣微腥，味微咸。
[0012] B柞蛹蟲草中藥材的特征檢測(cè)方法
[0013] 采用高效液相、高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)系統(tǒng)及對(duì)照品對(duì)本發(fā)明的柞蛹蟲草中藥 材成分進(jìn)行定性檢測(cè)及成分指認(rèn)，并采用指紋特征圖譜進(jìn)行指紋檢測(cè)（圖2、圖3)。本發(fā)明 實(shí)施例1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6共6批樣品中均呈現(xiàn)5個(gè)特征色譜峰，以蟲草素（峰4) 為參照，相對(duì)保留時(shí)間分別為：〇. 32 (峰1)、0. 55 (峰2)、0. 87 (峰3)、1 (峰4)、1. 17 (峰5)。 且5個(gè)特征色譜峰相對(duì)保留時(shí)間在±5%之內(nèi)。經(jīng)過鑒定，各指紋成分分別為：峰1為：尿 苷，峰2為：酪氨酸，峰3為：腺苷，峰4為：蟲草素，峰5為：N-⑵羥基腺苷。
[0014] C柞蛹蟲草中藥材相關(guān)成分的檢測(cè)
[0015] 包括：水分、重金屬、砷鹽、熾灼殘?jiān)?、含量?br>[0016] D本發(fā)明柞蛹蟲草中藥材臨床上用于感冒的治療 [0017] 其特點(diǎn)是：療程短、見效快且無毒副作用。
【附圖說明】
[0018] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1-2培育的柞蛹蟲草中藥材圖片。
[0019] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1-2培育的柞蛹蟲草中藥材的特征圖譜。
[0020] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例1-2培育的柞蛹蟲草中藥材的LC-MS-MS (液相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜）色譜圖總離子圖。
[0021] 具體實(shí)施方法
[0022] 下面實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
[0023] 實(shí)施例1 :本發(fā)明柞蛹蟲草中藥材的培育與炮制
[0024] 1-1取無雜菌污染的蛹蟲草菌液1200毫升（吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院），健康的活 柞蠶蛹1000枚（河北省承德醫(yī)學(xué)院蠶業(yè)研究所），在百級(jí)空氣潔凈接種室人工接種。每枚 活柞蠶蛹接種1. 2毫升蛹蟲草菌液。培育條件：溫度15°C，時(shí)間45天，采用藍(lán)光（100勒克 斯）及白光（400勒克斯）每日交替照射各10小時(shí)，即藍(lán)光（C0B光源，深圳市永恒晟光電 有限公司）照射10小時(shí)，白光（白熾燈，南通三星電瓷照明有限公司）照射10小時(shí)，培養(yǎng) 出的子座和蛹體的復(fù)合體。本品由蛹體與從蛹體長(zhǎng)出的多個(gè)子座相連而成，二者結(jié)合緊密。 蛹體呈長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)2~4. lcm，直徑1~2. 2cm ;表面覆蓋黃白色至黃色菌膜，剝落后呈黑 褐色至黑色，蛹體腹部有環(huán)紋10~22個(gè)；質(zhì)較脆，易折斷，斷面略平坦，灰棕色。子座4~ 18個(gè)，細(xì)長(zhǎng)扁圓柱形，長(zhǎng)2~6cm，直徑0. 15~0. 18cm ;表面橙黃色至橙紅色，少有分枝，頂 端偶有膨大；質(zhì)柔韌，斷面黃白色。氣微腥，味微咸。炮制方法：在溫度為60°C以下的條件 將培育的柞蛹蟲草進(jìn)行紅外干燥，并在溫度為60°C以下的條件下研末為細(xì)粉。即按中國(guó)藥 典規(guī)定：指能全部通過五號(hào)篩，并含能通過六號(hào)篩不少于95%的粉末。
[0025] 1-2取無雜菌污染的蛹蟲草菌液1200毫升（吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院），健康的活 柞蠶蛹1000枚（河北省承德醫(yī)學(xué)院蠶業(yè)研究所），在百級(jí)空氣潔凈接種室人工接種。每枚 活柞蠶蛹接種1. 2毫升蛹蟲草菌液。培育條件：溫度18°C，時(shí)間60天，采用藍(lán)光（100勒克 斯）及白光（350勒克斯）每日交替照射各9小時(shí)，即藍(lán)光（C0B光源，深圳市永恒晟光電有 限公司）照射9小時(shí)，白光（白熾燈，南通三星電瓷照明有限公司）照射9小時(shí)，培養(yǎng)出的子 座和蛹體的復(fù)合體。本品由蛹體與從蛹體長(zhǎng)出的多個(gè)子座相連而成，二者結(jié)合緊密。蛹體 呈長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)2. 5~4. 5cm，直徑1. 5~2. 5cm ;表面覆蓋黃白色至黃色菌膜，剝落后呈黑 褐色至黑色，蛹體腹部有環(huán)紋16~25個(gè)；質(zhì)較脆，易折斷，斷面略平坦，灰棕色。子座5~ 20個(gè)，細(xì)長(zhǎng)扁圓柱形，長(zhǎng)3~8cm，直徑0. 18~0. 25cm ;表面橙黃色至橙紅色，少有分枝，頂 端偶有膨大；質(zhì)柔韌，斷面黃白色。氣微腥，味微咸。炮制方法：在溫度為60°C以下的條件 將培育的柞蛹蟲草進(jìn)行微波干燥，并在溫度為60°C以下的條件下研末為細(xì)粉。即按中國(guó)藥 典規(guī)定：指能全部通過五號(hào)篩，并含能通過六號(hào)篩不少于95%的粉末。
[0026] 1-3取無雜菌污染的蛹蟲草菌液1300毫升（吉林省蠶業(yè)科學(xué)研究院），健康的活 柞蠶蛹1000枚（河北省承德醫(yī)學(xué)院蠶業(yè)研究所），在百級(jí)空