先在28°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照11小時，光照強(qiáng)度為20001χ，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)至生根，生根率為88.3%，平均生根條數(shù)達(dá)3.62條。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.3mg/L NAA+0.2mg/LIBA+30g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0017](4)煉苗移栽:將步驟(3)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由營養(yǎng)土:沙土 = 2:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率為83.7%。
[0018]實施例2:
(O啟動培養(yǎng):選取健壯單葉刺槐植株一年生木質(zhì)化帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0?5.0長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段先用洗衣粉水沖洗lh，再用軟毛刷輕輕刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗2h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒8s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用無菌水沖洗4次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到啟動培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)2天，然后置于每天光照11小時，光照強(qiáng)度為15001x條件下培養(yǎng)7天即可開始形成叢生芽，污染率低到8%以下，芽誘導(dǎo)率為83%。所述的啟動培養(yǎng)基為:MS+1.5mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0019](2)繼代與增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)已萌發(fā)的腋芽剪切成帶芽的小段并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)2天，然后置于每天光照12小時，光照強(qiáng)度為15001x，置于培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)37天后增殖苗可長至3.28cm,增殖系數(shù)為4.59.多次反復(fù)切割進(jìn)行繼代培養(yǎng)，以得到更多的萌芽。所述的增殖培養(yǎng)基為:N6+0.3mg/LNAA+l.8mg/L 6_BA+15g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0020](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照12小時，光照強(qiáng)度為20001χ，培養(yǎng)溫度為28 °C的條件下培養(yǎng)至生根，生根率為85.9%，平均生根條數(shù)達(dá)3.12條。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.6mg/L NAA+0.4mg/LIBA+30g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0021](4)煉苗移栽:將步驟(3)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由營養(yǎng)土:沙土 = 2:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率為90.1%。
【主權(quán)項】
1.一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，其特征在于包括以下步驟: (1)啟動培養(yǎng):選取健壯單葉刺槐植株一年生木質(zhì)化帶芽莖段作為外植體，剪去葉片，切成3.0?5.0長的帶有2?3個腋芽的節(jié)段先用洗衣粉水沖洗I?3h，再用毛刷刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除，然后用自來水沖洗I?3h后置于超凈工作臺中，先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒10?25min,用無菌水沖洗4?6次再用無菌濾紙擦干表面的水珠后接種到啟動培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強(qiáng)度為1500?30001x，直至誘導(dǎo)形成叢生芽； (2)繼代與增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)已萌發(fā)的腋芽剪切成帶芽的小段并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?14小時，光照強(qiáng)度為1000?20001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，多次反復(fù)切割進(jìn)行繼代培養(yǎng)，得到萌芽； (3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照11?12小時，光照強(qiáng)度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根； (4)煉苗移栽:將步驟(3)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由營養(yǎng)土:沙土= 2:1混合成的基質(zhì)，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天以1/2MS大量元素營養(yǎng)液給幼苗澆水，保持濕度，待幼苗成活后再移栽大田。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，其特征在于步驟(1)所述的啟動培養(yǎng)基為:MS+1?3mg/L6-BA+0.1?lmg/L NAA+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，其特征在于步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:Ν6+0.5?1.5mg/LNAA+l?3mg/L 6-BA+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，其特征在于步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.1?lmg/L ΝΑΑ+0.1?lmg/L IBA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種單葉刺槐組培快繁體系的建立方法，涉及刺槐（Robinia. pseudoacacia）通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)短時間內(nèi)快速獲得大量刺槐優(yōu)良木苗的方法。本發(fā)明以單葉刺槐一年生木質(zhì)化帶芽莖段為外植體，經(jīng)過啟動培養(yǎng)、繼代與增殖培養(yǎng)、壯苗與生根培養(yǎng)、煉苗及移栽等過程建立了單葉刺槐組培快繁體系，為其規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支持，并為進(jìn)一步進(jìn)行分子育種奠定基礎(chǔ)。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686327
【申請?zhí)枴緾N201510085883
【發(fā)明人】楊業(yè)云
【申請人】楊業(yè)云
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月21日