一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及農業(yè)生物技術中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法。
【背景技術】
[0002]百合Ui7i_)是單子葉植物綱百合科百合屬的多年生球根草本植物的總稱，是中國傳統(tǒng)名花，具有極高的觀賞價值，深受廣大群眾的喜愛。百合屬大約有100個種，目前注冊的商用百合就有I萬多個，主要分布于北半球寒帶和溫帶的山區(qū)。除了具有較高的觀賞價值外，還具有重要的食用和藥用價值，其鱗莖具有消炎、止咳、鎮(zhèn)定的功效。
[0003]植物組織培養(yǎng)在百合的快速繁殖、轉基因、脫毒、種質資源保存及人工種子生產等方面具有極大的應用潛力。目前已成功建立了百合組織培養(yǎng)的多種方法，但由于存在基因特異性強的問題，一直缺乏高效、廣譜的再生體系，而本發(fā)明具有簡單、經濟、易操作的特點，易進行推廣應用。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，本發(fā)明本發(fā)明以東方百合“西伯利亞”(LOriental hybrid Siberia)鱗片為外植體,通過不定芽誘導、繼代培養(yǎng)、試管苗生根以及試管苗馴化移栽等階段實現(xiàn)了百合的組織培養(yǎng)快速繁殖，進而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，包括以下的工藝步驟:
(I)不定芽誘導:選取生長健壯飽滿的百合鱗莖，用清水洗凈，剝去外界I?3層鱗片，取中層和內層的鱗片，先在75%?80%的乙醇中浸泡10?30s，用無菌水沖洗3?5次，每次3?8min,然后用0.1%?0.5%的升萊溶液消毒5?1min,再用洗菌水沖洗3?5次，每次3?8min。用無菌濾紙吸干表面水珠后接種到誘導培養(yǎng)基上進行不定芽誘導。
[0006](2)不定芽芽增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為1500?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，25?30天轉接一次。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或步驟(2)獲得的莖長大于3cm的不定芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:將具有完整健壯根(根長3 0.5cm)試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由珍珠巖和火碳泥(I:1)混合成的基質中并定植于大田中。
[0009]上述步驟(I)所述的誘導培養(yǎng)基為1/2MS+2?5mg/L 6-BA+0.1?lmg/L NAA+1?5mg/LGA3+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值為 5.4 ?5.8ο
[0010]上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為MS+0.5?3mg/L 6-BA+0.1?lmg/LNAA+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.1?lmg/L NAA+1?2.0mg/L GGR(注:雙吉爾-GGR，購自北京艾比蒂研究開發(fā)中心)+2.5%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
[0012]與現(xiàn)有技術相比本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術手段在短時間內快速繁殖保持親本原有優(yōu)良性狀的百合種苗。以東方百合“西伯利亞”(LOriental hybridSiberia)鱗片為外植體，通過不定芽誘導、繼代培養(yǎng)、試管苗生根以及試管苗馴化移栽等階段實現(xiàn)了百合的組織培養(yǎng)快速繁殖。從而在人工控制的條件實現(xiàn)百合種苗的快速繁殖，短時間內大量試管苗，促進百合的商業(yè)化進程。
【具體實施方式】
[0013]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0014]實施例1:
(I)不定芽誘導:選取生長健壯飽滿的百合鱗莖，用清水洗凈，剝去外界3層鱗片，取中層和內層的鱗片，先在75%的乙醇中浸泡10s，用無菌水沖洗5次，每次3min，然后用0.1%的升汞溶液消毒5min,再用洗菌水沖洗3次，每次3min。用無菌濾紙吸干表面水珠后接種到誘導培養(yǎng)基上進行不定芽誘導，誘導率達92.7%。所述的誘導培養(yǎng)基為l/2MS+2mg/L6-BA+0.lmg/L NAA+lmg/LGA3+3.5% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0015](2)不定芽芽增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照15小時，光照強度為1500x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)，30天轉接一次，增殖系數(shù)為6.07。所述增殖培養(yǎng)基為 MS+0.5mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+3.5% 蔗糖 +0.5% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0016](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或步驟(2)獲得的莖長大于3cm的不定芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照12小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)26天即可生根，生根率為91.2%。所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.lmg/L NAA+lmg/L GGR+2.5%蔗糖+0.35%瓊脂+0.05%活性炭，pH值為5.8。
[0017](4)煉苗移栽:將具有完整健壯根(根長3 0.5cm)試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由珍珠巖和火碳泥(I:1)混合成的基質中并定植于大田中，移栽成活率為89.7%。
[0018]實施例2:
(I)不定芽誘導:選取生長健壯飽滿的百合鱗莖，用清水洗凈，剝去外界2層鱗片，取中層和內層的鱗片，先在78%的乙醇中浸泡12s，用無菌水沖洗5次，每次3min，然后用0.15%的升汞溶液消毒6min，再用洗菌水沖洗3次，每次3min。用無菌濾紙吸干表面水珠后接種到誘導培養(yǎng)基上進行不定芽誘導，誘導率達89.5.7%。所述的誘導培養(yǎng)基為1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+3mg/LGA3+3.5% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0019](2)不定芽芽增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)9天，然后置于每天光照13小時，光照強度為1500x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)，30天轉接一次，增殖系數(shù)為5.4。所述增殖培養(yǎng)基為MS+0.7mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+3.5% 蔗糖 +0.5% 瓊脂 +0.06% 活性炭，pH 值為 5.8。
[0020](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或步驟(2)獲得的莖長大于3cm的不定芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照12小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)28天即可生根，生根率為91.2%。所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg/L NAA+2mg/L GGR+2.5%蔗糖+0.35%瓊脂+0.05%活性炭，pH值為5.8。
[0021](4)煉苗移栽:將具有完整健壯根(根長3 0.5cm)試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由珍珠巖和火碳泥(I:1)混合成的基質中并定植于大田中，移栽成活率為90.1%。
【主權項】
1.一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下工藝步驟: (1)不定芽誘導:選取生長健壯飽滿的百合鱗莖，用清水洗凈，剝去外界I?3層鱗片，取中層和內層的鱗片，先在75%?80%的乙醇中浸泡10?30s，用無菌水沖洗3?5次，每次3?8min,然后用0.1%?0.5%的升萊溶液消毒5?1min,再用洗菌水沖洗3?5次，每次3?8min，用無菌濾紙吸干表面水珠后接種到誘導培養(yǎng)基上進行不定芽誘導； (2)不定芽芽增殖培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為1500?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，25?30天轉接一次； (3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或步驟(2)獲得的莖長大于3cm的不定芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進行誘導生根，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根； (4)煉苗移栽:將具有完整健壯根(根長30.5cm)試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由珍珠巖和火碳泥(1:1)混合成的基質中并定植于大田中。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(I)所述的誘導培養(yǎng)基為 1/2MS+2 ?5mg/L 6-BA+0.1 ?lmg/L NAA+1 ?5mg/LGA3+2.5% ?3.5% 蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為 MS+0.5 ?3mg/L 6-BA+0.1 ?lmg/L NAA+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.1?lmg/L NAA+1?2.0mg/L GGR (注:雙吉爾-GGR，購自北京艾比蒂研究開發(fā)中心)+2.5%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為 5.4 ?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種百合的組織培養(yǎng)快繁方法，涉及百合（Lilium）通過組織培養(yǎng)技術手段在短時間內快速繁殖保持親本原有優(yōu)良性狀的百合種苗。本發(fā)明以東方百合“西伯利亞”（L.Oriental hybrid Siberia）鱗片為外植體，通過不定芽誘導、繼代培養(yǎng)、試管苗生根以及試管苗馴化移栽等階段實現(xiàn)了百合的組織培養(yǎng)快速繁殖。從而在人工控制的條件實現(xiàn)百合種苗的快速繁殖，短時間內大量試管苗，促進百合的商業(yè)化進程。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686337
【申請?zhí)枴緾N201510085927
【發(fā)明人】梁仕華
【申請人】梁仕華
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月22日