一種白木香的組織培養(yǎng)技術的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物技術中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種白木香的組織培養(yǎng)技術。
【背景技術】
[0002]白木香(是我國沉香唯一植物來源,長期以來供不應求,力口上人為的掠奪式砍伐導致白木香野生資源枯竭，因此有必要對其資源進行保護。
[0003]近年來，白木香資源開發(fā)有了一定的規(guī)模，在廣西、廣東、福建等建立了 GAP種植基地，對白木香野生資源保護工作起到了一定的促進作用。目前白木香主要通過種子進行種苗繁殖，但由于種子繁殖后代性狀發(fā)生分離，不利于優(yōu)質種質資源保護，制約了優(yōu)質白木香的推廣種植。因此，有必要建立白木香的組織培養(yǎng)技術，為其良種快速繁殖提供技術支撐和保障，也為滿足我國對白木香種苗的需求、加速其資源擴充具有重要的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種白木香的組織培養(yǎng)技術，本發(fā)明以白木香帶芽莖段為外植體，經過外植體消毒、叢生芽誘導、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過程從而建立了白木香組織培養(yǎng)快速繁殖體系，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種白木香的組織培養(yǎng)技術，包括以下的步驟:
(I)叢生芽誘導:選取生長健壯無病蟲的幼樹當年生的帶芽莖段作為外植體，用洗潔精水溶液浸泡5?lOmin，然后用自來水沖洗10?30min，擦干表面水分后備用。在超凈工作臺中以70%?80%乙醇浸泡5?10s，0.1%升汞溶液消毒8?20min，再用無菌水清洗3?5次，擦干后切成長度為0.5?1.2cm的莖段接種到誘導培養(yǎng)基上，先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)15?20天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C條件下培養(yǎng),直至誘導形成叢生芽。
[0006](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)所得的叢生芽轉入增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)直至葉腋處萌生一個側芽，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至各叢生芽伸長到I ?2cm。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)所獲得的高度約為I?2cm的叢生芽芽切割并接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:白木香瓶內生根20?30天后，置于自然光照下煉苗5?7天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由黃心土:河沙=3:1混合成的基質中。
[0009]上述步驟(I)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+2?4mg/L6-BA+0.5?lmg/L NAA+0.1?
0.5mmol/L La (NO3) 2+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值為 5.4 ?5.8。
[0010]上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1?2mg/L6-BA+0.1?0.5mg/LNAA+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3 )所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+1?3mg/L NAA+2.0%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
[0012]與現(xiàn)有技術相比本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明通過離體快繁技術獲得優(yōu)質種苗的育苗方法。以白木香帶芽莖段為外植體，經過外植體消毒、叢生芽誘導、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過程從而建立了白木香組織培養(yǎng)快速繁殖體系，加速白木香良種的推廣和資源開發(fā)利用具有重要的現(xiàn)實意義。
【具體實施方式】
[0013]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0014]實施例1:
(I)叢生芽誘導:選取生長健壯無病蟲的幼樹當年生的帶芽莖段作為外植體，用洗潔精水溶液浸泡5min，然后用自來水沖洗lOmin，擦干表面水分后備用。在超凈工作臺中以75%乙醇浸泡5s，0.1%升汞溶液消毒8min，再用無菌水清洗3次，擦干后切成長度為0.5?
1.2cm的莖段接種到誘導培養(yǎng)基上，先在25°C條件下全暗培養(yǎng)15天，然后置于每天光照10小時，光照強度為ΙΟΟΟχ，培養(yǎng)溫度為25°C條件下培養(yǎng)39天即可誘導形成叢生芽，誘導率為 68.5%。所述誘導培養(yǎng)基為 MS+2mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+0.lmmol/L La (NO3) 2+2.0% 蔗糖+0.35%瓊脂+0.05%活性炭，pH值為5.8。
[0015](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)所得的叢生芽轉入增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)直至葉腋處萌生一個側芽，然后置于每天光照13小時，光照強度為ΙΟΟΟΙχ，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)31天各叢生芽即可伸長到I?2cm，增殖率為
4.09。所述增殖培養(yǎng)基為 MS+lmg/L6-BA+0.lmg/L NAA+2.0% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.05% 活性炭，pH值為5.8。
[0016](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)所獲得的高度約為I?2cm的叢生芽芽切割并接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照10小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)39天即可生根，生根率為73.4%。
[0017](4)煉苗移栽:白木香瓶內生根20天后，置于自然光照下煉苗5天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由黃心土:河沙=3:1混合成的基質中。移栽成活率為87%。
[0018]實施例2:
(I)叢生芽誘導:選取生長健壯無病蟲的幼樹當年生的帶芽莖段作為外植體，用洗潔精水溶液浸泡8min，然后用自來水沖洗15min，擦干表面水分后備用。在超凈工作臺中以78%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒lOmin，再用無菌水清洗4次，擦干后切成長度為0.5?1.2cm的莖段接種到誘導培養(yǎng)基上，先在28°C條件下全暗培養(yǎng)18天，然后置于每天光照12小時，光照強度為1500x，培養(yǎng)溫度為28°C條件下培養(yǎng)36天即可誘導形成叢生芽，誘導率為 74.9%。所述誘導培養(yǎng)基為 MS+4mg/L6-BA+0.9mg/L NAA+0.3mmol/L La (NO3) 2+2.0%蔗糖+0.35%瓊脂+0.05%活性炭，pH值為5.8。
[0019](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)所得的叢生芽轉入增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)直至葉腋處萌生一個側芽，然后置于每天光照14小時，光照強度為16001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)30天各叢生芽即可伸長到I?2cm，增殖率為5.29。所述增殖培養(yǎng)基為 MS+1.5mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+2.0% 蔗糖 +0.35% 瓊脂 +0.1% 活性炭，pH值為5.8。
[0020](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)所獲得的高度約為I?2cm的叢生芽芽切割并接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)5天，然后置于每天光照13小時，光照強度為20001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)33天即可生根，生根率為80.9%。
[0021 ] (4)煉苗移栽:白木香瓶內生根20天后，置于自然光照下煉苗5天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由黃心土:河沙=3:1混合成的基質中。移栽成活率為90%。
【主權項】
1.一種白木香的組織培養(yǎng)技術，其特征在于包括以下步驟: (1)叢生芽誘導:選取生長健壯無病蟲的幼樹當年生的帶芽莖段作為外植體，用洗潔精水溶液浸泡5?lOmin，然后用自來水沖洗10?30min，擦干表面水分后備用，在超凈工作臺中以70%?80%乙醇浸泡5?10s，0.1%升汞溶液消毒8?20min，再用無菌水清洗3?5次，擦干后切成長度為0.5?1.2cm的莖段接種到誘導培養(yǎng)基上，先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)15?20天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C條件下培養(yǎng),直至誘導形成叢生芽； (2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)所得的叢生芽轉入增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)直至葉腋處萌生一個側芽，然后置于每天光照12?15小時，光照強度為1000?15001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至各叢生芽伸長到I?2cm ； (3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)所獲得的高度約為I?2cm的叢生芽芽切割并接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?7天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為2000?25001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根； (4)煉苗移栽:白木香瓶內生根20?30天后，置于自然光照下煉苗5?7天后，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽由黃心土:河沙=3:1混合成的基質中。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種白木香的組織培養(yǎng)技術，其特征在于步驟(I)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+2 ?4mg/L6-BA+0.5 ?lmg/L ΝΑΑ+0.1 ?0.5mmol/L La (NO3) 2+2.0% ?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種白木香的組織培養(yǎng)技術，其特征在于步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1 ?2mg/L6-BA+0.1 ?0.5mg/L NAA+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值為5.4?5.8。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種白木香的組織培養(yǎng)技術，其特征在于步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+1 ?3mg/L NAA+2.0% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 瓊脂 +0.05% ?0.1%活性炭，PH值為5.4?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白木香的組織培養(yǎng)技術，涉及白木香（Aquilaria sinensis）通過離體快繁技術獲得優(yōu)質種苗的育苗方法。本發(fā)明以白木香帶芽莖段為外植體，經過外植體消毒、叢生芽誘導、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過程從而建立了白木香組織培養(yǎng)快速繁殖體系，加速白木香良種的推廣和資源開發(fā)利用具有重要的現(xiàn)實意義。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686341
【申請?zhí)枴緾N201510085931
【發(fā)明人】梁仕華
【申請人】梁仕華
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年2月22日