一種用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬生物技術領域，特別涉及一種用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液及采用 該培養(yǎng)液的培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002] 萱藻（隸屬褐藻門，系泛溫性海藻，在我國廣泛分布于 北起遼東半島，南至廣東省海陵島之間的海域。萱藻因其口味鮮美，營養(yǎng)價值高，具有抗氧 化、抗腫瘤功效及去除海水中過剩營養(yǎng)鹽的生態(tài)修復功能，而成為一種極具養(yǎng)殖前景的新 型經(jīng)濟海藻。萱藻具有異形世代交替的生活史，葉狀體為其配子體階段，絲狀體、類墊狀體 和墊狀體共同組成其孢子體階段。絲狀體、類墊狀體和墊狀體可以相互轉(zhuǎn)化，溫度是影響轉(zhuǎn) 化的關鍵因素。其中，絲狀體經(jīng)過誘導后可產(chǎn)生單室孢子囊，成熟孢子囊釋放出的孢子進一 步發(fā)育成萱藻幼葉狀體即萱藻幼苗。因此，絲狀體的生物量直接決定了萱藻人工育苗的規(guī) 模和產(chǎn)量。
[0003] 如何快速獲得足量、高品質(zhì)的絲狀體是開展萱藻人工育苗的重要環(huán)節(jié)。在萱藻絲 狀體的規(guī)?；瘮U增過程中，培養(yǎng)水體中的營養(yǎng)元素往往會成為限制絲狀體生物量增加的限 制因子，因此，在擴增過程中必須定期向培養(yǎng)水體中添加培養(yǎng)液以補充絲狀體生長的消耗。 培養(yǎng)水體中的營養(yǎng)鹽包括大量元素(如氮、磷)、微量元素、維生素等，這些營養(yǎng)元素不僅可 以顯著影響絲狀體細胞的生長速率而且還能影響細胞的發(fā)育質(zhì)量。據(jù)報道，ES培養(yǎng)液可以 促進海帶、裙帶菜配子體的生長，MAV#3培養(yǎng)液有助于紫菜絲狀體的快速擴增，匕培養(yǎng)液可 以促進萱藻絲狀體的生長發(fā)育。但上述三種及一些常用培養(yǎng)液用于萱藻絲狀體擴增時，絲 狀體生長速率和發(fā)育質(zhì)量難以滿足規(guī)?；瘮U高效增的需求。因此，研制一種能夠高效、快速 擴增萱藻絲狀體的培養(yǎng)液勢在必行。萱藻作為一種新型經(jīng)濟海藻，尚未有特定培養(yǎng)液能使 萱藻絲狀體擴增速率達到理想狀態(tài)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有培養(yǎng)液配方無法滿足萱藻絲狀體快速擴增需要的現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的是 提供一種配制簡單、使用方便、易于儲存的用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液，為萱藻絲狀 體的規(guī)?；咝U增提供技術保障。
[0005] -種用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液(簡稱為幻_amp)，其特征在于所述培養(yǎng)液 的組成為： I號液：硝酸鈉36. 0-48. 0克，磷酸二氫鈉1. 5-3. 0克，硼酸10. 0-20. 0克，以蒸餾水定 容至 1000 mL ; Π 號液：硫酸亞鐵0. 10-0. 30克，檸檬酸鐵0. 20-0. 50克，硫酸鎂0. 10-0. 50克，硫酸錳 0. 10-0. 50 克，硫酸鋅 0. 01-0. 20 克，硫酸鈷 0. 01-0. 20 克，EDTA-2Na 6. 0-8. 0 克，以蒸餾水 定容至1000 mL ; III號液：維生素 B1 4. OXKT4克，維生素 B2 8. OXKT4克，維生素 H 1.0 XKT4克，以蒸 餾水定容至1000 mL ; IV號液：萘乙酸（NAA)O. 10-0.44克，先以濃度為95%乙醇溶解，再以蒸餾水定容至 lOOOmL。
[0006] 上述組成中，所述I號液的配制方法為：先將硝酸鈉36. 0-48. 0克和磷酸二氫鈉 1. 5-3. 0克溶解于200-400mL蒸餾水中，再將硼酸10. 0-20. 0克投入500mL蒸餾水中，攪拌 并緩慢加熱至其完全溶解，待其冷卻至室溫后，將兩種溶液混合并以蒸餾水定容至l〇〇〇mL。
[0007] 所述Π 號液的配制方法為：將硫酸亞鐵0. 10-0. 30克，檸檬酸鐵0. 20-0. 50克， 硫酸鎂〇. 10-0. 50克，硫酸錳0. 10-0. 50克，硫酸鋅0. 01-0. 20克，硫酸鈷0. 01-0. 20克， EDTA-2Na 6. 0-8. 0克，以蒸餾水定容至1000mL。
[0008] 所述ΠΙ號液的配制方法為：將維生素&4. OX KT4克，維生素 B 28. OX KT4克，維生 素 H1.0 X KT4克，以蒸餾水定容至1000mL。
[0009] 所述IV號液的配制方法為：室溫條件下，稱取萘乙酸（NAA) 0. 10-0. 44克，先以濃 度為95%的乙醇進行溶解，再以蒸餾水定容至1000mL。
[0010] 一種將上述培養(yǎng)液（幻-amp)用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)方法，包括以下步 驟：（1)將I、Π、ΠΙ號液均以1:1000的體積比加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體中；（2) IV號液以 1:500的體積比加入培養(yǎng)水體中；（3)絲狀體擴增過程中，每5-7天全量更換培養(yǎng)水體并按 比例重新加入培養(yǎng)液。
[0011] 本發(fā)明的優(yōu)點主要體現(xiàn)在以下幾個方面：（1)可高效快速擴增萱藻絲狀體，相同 條件下，使用本培養(yǎng)液的擴增速度（日均生長率)顯著高于使用Fi、ES、MAV#3培養(yǎng)液的樣本； (2)可提高絲狀體品質(zhì)，使用本培養(yǎng)液擴增絲狀體的過程中，絲狀體細胞胞質(zhì)色澤和孢子囊 直徑均優(yōu)于使用Fp ES、MAV#3的樣本；（3)本發(fā)明的培養(yǎng)液配制過程簡單，使用方便，易于 儲存，特別適于萱藻絲狀體的規(guī)?；咝U增。
【具體實施方式】
[0012] 下面通過具體實施例來詳細說明本發(fā)明，應理解，下列實施例是用于說明本發(fā)明 而不是限制其保護范圍的。
[0013] 實施例1:幻-amp培養(yǎng)液用于萱藻絲狀體快速擴增 配制幻-amp培養(yǎng)液，配制方法如下： I號液：硝酸鈉 42. 0克，磷酸二氫鈉 2. 1克，硼酸15. 0克，以蒸餾水定容至1000 mL ; Π 號液：硫酸亞鐵0. 15克，檸檬酸鐵0. 30克，硫酸鎂0. 30克，硫酸錳0. 30克，硫酸鋅 0. 05克，硫酸鈷0. 01克，EDTA-2Na 6. 0克，以蒸餾水定容至1000 mL ; EI號液：維生素 &4. 0 X 10_4克，維生素 B 28. 0 X 10_4克，維生素 HL 0 X 10 _4克，以蒸餾水 定容至1000 mL ; IV號液：萘乙酸（NAA) 0. 4克，先以濃度為95%乙醇溶解，再以蒸餾水定容至1000mL。
[0014] 將上述培養(yǎng)液（幻-amp)用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)方法，包括以下具體步 驟： (1)選取生長良好的萱藻絲狀體在工廠化環(huán)境中擴增，以18L種質(zhì)瓶為擴增容器，接 種密度為〇. 2mg/mL，即單個種質(zhì)瓶中接入鮮重3. 60g的萱藻絲狀體。擴增過程以充氣培 養(yǎng)的方式進行，設定環(huán)境條件為：溫度21°C，光照時長14小時，光照強度54. 0-72. 0 μ mol/ (m2*s)〇
[0015] (2)接種后的種質(zhì)瓶為一個樣本，選取12個樣本進行培養(yǎng)，使用本發(fā)明培養(yǎng)液(簡 稱為幻-amp，下同，I -III使用比例1:1000 (V/V)，加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體中；IV號液使 用比例為1:500 (V/V)，加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體中）進行擴增，每5天全量更換培養(yǎng)水體 并按比例重新加入培養(yǎng)液。
[0016] (3)在擴增的第10、20、30天分別檢測絲狀體生物量、日均生長率、孢子囊直徑、細 胞色澤，以此作為評價培養(yǎng)液擴增效果的指標。
[0017] 使用幻-amp培養(yǎng)液對絲狀體進行擴增，樣本在生物量、日均生長率、孢子囊直徑 和細胞色澤方面的指標統(tǒng)計于表1。
[0018] 表1使用57-amp培養(yǎng)液擴增萱藻絲狀體的效果
【主權(quán)項】
1. 一種用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液，其特征在于包括以下組分： I號液：硝酸鈉36. 0-48. 0克，磷酸二氫鈉1. 5-3. 0克，硼酸10. 0-20. 0克，以蒸餾水定 容至 1000mL; II號液：硫酸亞鐵〇. 10-0. 30克，檸檬酸鐵0. 20-0. 50克，硫酸鎂0. 10-0. 50克，硫酸錳 0. 10-0. 50 克，硫酸鋅 0. 01-0. 20 克，硫酸鈷 0. 01-0. 20 克，EDTA-2Na6. 0-8. 0 克，以蒸餾水 定容至1000mL; III號液：維生素& 4. 0X10_4克，維生素1 8. 0X10_4克，維生素H1.0X10_4克，以蒸餾 水定容至l〇〇〇mL; IV號液：萘乙酸0. 10-0. 44克，先以濃度為95%乙醇溶解，再以蒸餾水定容至1000mL。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)液的配制方法，其特征在于所述I號液的配制方法為：先 將硝酸鈉36. 0-48. 0克和磷酸二氫鈉1. 5-3. 0克溶解于200-400mL蒸餾水中，再將硼酸 10. 0-20. 0克投入500mL蒸餾水中，攪拌并緩慢加熱至其完全溶解，待其冷卻至室溫后，將 兩種溶液混合并以蒸餾水定容至l〇〇〇mL;所述II號液的配制方法為：將硫酸亞鐵0. 10-0. 30 克，檸檬酸鐵〇. 20-0. 50克，硫酸鎂0. 10-0. 50克，硫酸錳0. 10-0. 50克，硫酸鋅0. 01-0. 20 克，硫酸鈷〇. 01-0. 20克，EDTA-2Na6. 0-8. 0克，以蒸餾水定容至1000mL;所述HI號液的配 制方法為：將維生素&4. 0X10_4克，維生素B28. 0X10_4克，維生素H1. 0X10 _4克，以蒸餾水 定容至1000mL;所述IV號液的配制方法為：室溫條件下，稱取萘乙酸0. 10-0. 44克，先以濃 度為95%的乙醇進行溶解，再以蒸餾水定容至1000mL。
3. -種權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)液用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)方法，其特征在于該 培養(yǎng)方法包括以下步驟：（1)將I、11、11丨號液均以1:1000的體積比加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體 中；（2)將IV號液以1:500的體積比加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體中；（3)絲狀體擴增過程中， 每5-7天全量更換培養(yǎng)水體并按比例重新加入培養(yǎng)液。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于萱藻絲狀體快速擴增的培養(yǎng)液及培養(yǎng)方法，其特征在于所述培養(yǎng)液包括： 號液：硝酸鈉36.0-48.0克，磷酸二氫鈉1.5-3.0克，硼酸10.0-20.0克，以蒸餾水定容至1000mL；號液：硫酸亞鐵0.10-0.30克，檸檬酸鐵0.20-0.50克，硫酸鎂0.10-0.50克，硫酸錳0.10-0.50克，硫酸鋅0.01-0.20克，硫酸鈷0.01-0.20克，EDTA-2Na 6.0-8.0克，以蒸餾水定容至1000mL；號液：維生素B14.0×10-4克，維生素B28.0×10-4克，維生素H1.0×10-4克，以蒸餾水定容至1000mL；Ⅳ號液：萘乙酸0.10-0.44克，先以濃度為95%乙醇溶解，再以蒸餾水定容至1000mL。、、號液均以1:1000的體積比加入萱藻絲狀體培養(yǎng)水體中，Ⅳ號液以1:500的比例加入培養(yǎng)水體中；每5-7天全量更換培養(yǎng)水體。本發(fā)明可高效快速擴增萱藻絲狀體，并提高絲狀體品質(zhì)，特別適于萱藻絲狀體的規(guī)?；咝U增。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104686369
【申請?zhí)枴緾N201510152610
【發(fā)明人】宮相忠, 高偉
【申請人】中國海洋大學
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年4月2日