一種用于防治美國白蛾的核型多角體病毒殺蟲劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于害蟲生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種美國白蛾核型多角體病毒殺蟲 劑及其使用的油懸劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 美國白蛾（Hyphantria cunea Drury)，又名美國燈蛾、秋幕毛蟲，屬鱗翅目，燈蛾 科，該蟲因食性雜、適應(yīng)性強(qiáng)、繁殖量大、傳播途徑廣等原因，已成為我國園林植物上的重要 檢疫性害蟲，也是國際植物重要的檢疫性對(duì)象。美國白蛾原產(chǎn)于北美地區(qū)，現(xiàn)分布于北美、 歐洲和亞洲地區(qū)的170多個(gè)國家。1979年從遼寧丹東傳入我國，目前，在北京、遼寧、天津、 河北、山東等省市均有不同程度的危害。該蟲以幼蟲取食植物葉片，主要為害果樹、行道樹 和觀賞樹木等闊葉樹以及農(nóng)作物和蔬菜，為害較輕時(shí)影響植物生長(zhǎng)，嚴(yán)重時(shí)則可引起樹木 和作物死亡，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失和生態(tài)環(huán)境的破壞。
[0003] 目前對(duì)美國白蛾常規(guī)的防治方式多是使用化學(xué)殺蟲劑，該方法在有效防治美國白 蛾的同時(shí)也帶來了環(huán)境污染等一系列問題。于是，人們將研究的方向逐漸放到了生物防治 上，由于昆蟲病毒殺蟲劑其對(duì)靶標(biāo)害蟲的作用專一、選擇性強(qiáng)，而且對(duì)環(huán)境和高等動(dòng)物安全 無毒，在生物防治領(lǐng)域的應(yīng)用前景非常廣闊。美國白蛾核型多角體病毒（Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus，HcNPV)是美國白蛾的專性病原微生物，對(duì)其具有較好的防治效果， 目前已經(jīng)在我國的部分疫區(qū)有一定面積的使用，在美國白蛾的有效治理中發(fā)揮著越來越重 要的作用。
[0004] 由于國內(nèi)對(duì)于昆蟲病毒殺蟲劑研發(fā)開展的時(shí)間比較晚，研究水平還不高，目前已 經(jīng)登記注冊(cè)的昆蟲病毒殺蟲劑的劑型主要是可濕性粉劑和懸浮劑，產(chǎn)品中多使用大量填充 料，在產(chǎn)品生產(chǎn)、銷售過程中病毒有可能變性失活，導(dǎo)致藥效的降低；同時(shí)，粉劑加工使用過 程中產(chǎn)生的粉塵易對(duì)環(huán)境和人體產(chǎn)生危害。因此，提供一種能有效保證病毒藥效以及提高 病毒制劑加工使用安全性的劑型成為生產(chǎn)上亟需解決的問題。油懸劑具有分散性好、性能 穩(wěn)定、適于機(jī)械化操作等特點(diǎn)，而且在加工生產(chǎn)過程中不產(chǎn)生粉塵，符合無公害生產(chǎn)要求， 是一種具有發(fā)展前途的新劑型。因此，本發(fā)明將美國白蛾核型多角體病毒制成油懸劑，既保 證病毒的活性，又能綜合油懸劑的多種優(yōu)點(diǎn)，將為美國白蛾的大規(guī)模有效治理提供新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種美國白蛾核型多角體病毒殺蟲劑，即使用油懸劑制備的 核型多角體病毒殺蟲劑。
[0006] 本發(fā)明首先提供一種油懸劑配方，所述的油懸劑包含有溶劑、乳化劑、增稠劑等， 其中各組份的百分比含量為：50%~80%的溶劑；10%~30%的乳化劑和0. 1 %~20%的 增稠劑。
[0007] 所述的溶劑為油酸甲酯；
[0008] 所述的乳化劑為十二烷基苯磺酸鈣、三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚、吐溫-80中的 一種或兩種以上的物質(zhì)組成；
[0009] 所述的增稠劑為阿拉伯膠、羧甲基纖維素、淀粉中的一種或兩種。
[0010] 本發(fā)明優(yōu)選的組份和比例分別為：所述的乳化劑同時(shí)采用十二烷基苯磺酸鈣、三 苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚和吐溫-80等三種，比例分別為ΙΟ%』％和4%;所述的增稠劑為 阿拉伯膠，比例為0. 16% ;所述的溶劑為油酸甲酯，比例為72%，余量為水。
[0011] 本發(fā)明提供一種美國白蛾核型多角體病毒殺蟲劑；包含有上述的油懸劑和美國 白蛾核型多角體病毒溶液，其中油懸劑比例為80 %，美國白蛾核型多角體病毒溶液比例為 20%，病毒的濃度為107~10乍18/!1^。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種美國白蛾核型多角體病毒油懸劑的制備方法。按上述比例 依次將美國白蛾核型多角體病毒液、十二烷基苯磺酸鈣、三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚、吐 溫-80、油酸甲酯混合，漩渦振蕩器上震蕩混合均勻，然后加入阿拉伯膠，繼續(xù)震蕩30min以 上，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，制成病毒油懸劑。
[0013] 本發(fā)明的制劑制作過程中沒有粉塵污染，降低環(huán)境污染，對(duì)人體危害??；制劑性能 穩(wěn)定，分散性好，熱貯藏穩(wěn)定性、懸浮率符合國家標(biāo)準(zhǔn)；制劑對(duì)病毒的活性沒有影響，對(duì)美國 白蛾的殺滅作用明顯。
【附圖說明】
[0014] 圖1為油懸劑對(duì)美國白蛾核型多角體病毒殺蟲活性的影響。
[0015] 圖2為貯存后的美國白蛾核型多角體病毒油懸劑的毒力。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例1 :油懸劑組份的優(yōu)化
[0017] 本發(fā)明通過大量試驗(yàn)，在油酸甲酯為溶劑的基礎(chǔ)上，對(duì)不同種類和比例的乳化劑、 增稠劑等進(jìn)行篩選，獲得的優(yōu)選組份和比例，具體制備方法如下：
[0018] 按比例依次取7. 2mL的油酸甲酯、ImL的十二烷基苯磺酸鈣、I. 6mL的三苯乙烯基 苯酚聚氧乙烯醚和0. 4mL的吐溫-80,加入試管中漩渦振蕩器上震蕩混合均勻，然后加入 0. 8mL 2%的阿拉伯I父，繼續(xù)震湯混合均勾后，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。
[0019] 經(jīng)檢測(cè)，本發(fā)明的油懸劑液相均勻，具有良好的分散性、穩(wěn)定性和流動(dòng)性。
[0020] 實(shí)施例2 :美國白蛾核型多角體病毒殺蟲劑油懸劑的制備
[0021] 1.病毒油懸劑的制備方法：按比例依次將20mL的美國白蛾核型多角體病毒液 (濃度10 9PIB/mL) UOmL的十二烷基苯磺酸鈣、16mL的三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚、4mL的 吐溫-80與72mL的油酸甲酯混合，漩渦振蕩器上震蕩混合均勻，然后加入SmL 2 %的阿拉伯 膠，繼續(xù)震蕩30min以上，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，制成病毒油懸劑。
[0022] 通過所述方法制成的油懸劑呈淡黃色較粘稠油狀物，無結(jié)塊和沉淀現(xiàn)象。
[0023] 2.熱貯藏穩(wěn)定性測(cè)定：按GB/T 19136進(jìn)行。將30mL試樣放入干凈的安瓿瓶中， 封口后放在54±2°C的烘箱中貯存14d。在貯存前后分別測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，分析誤差為± 1 %， 熱貯后各項(xiàng)指標(biāo)要求仍符合國家標(biāo)準(zhǔn)。
[0024] 3.懸浮率的測(cè)定：根據(jù)GB/T 14825進(jìn)行，測(cè)得熱貯前懸浮率為96%，熱貯后懸浮 率為93%，符合國家對(duì)油懸劑懸浮率的要求。
[0025] 4. pH值測(cè)定：按GB/T 1601進(jìn)行，測(cè)得熱貯前pH值為5· 67,熱貯后pH值為5· 54， 酸性環(huán)境能保證美國白蛾核型多角體病毒的多角體不被溶解，保護(hù)病毒活性。
[0026] 5.持久起泡性測(cè)試：取250mL量筒，加標(biāo)準(zhǔn)硬水至180mL刻度線處，將量筒置于天 平上，稱入試樣1.0 g (精準(zhǔn)至0.1 g)后取下，加標(biāo)準(zhǔn)硬水至200mL，塞上量筒塞，以量筒底部 為中心，上下顛倒30次（每次2s)。放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上靜置lmin，記錄泡沫體積。為保證產(chǎn)品 在加工、貯運(yùn)和使用中的可操作性，規(guī)定泡沫體積不大于10mL。本品經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，測(cè)得熱貯前 產(chǎn)品泡沫體積為6. 3mL，熱貯后泡沫體積為6. 7mL，符合國家標(biāo)準(zhǔn)。
[0027] 6.分散性測(cè)定：吸取0. 5mL待測(cè)HcNPV油懸劑樣品，從距燒杯水面5cm處滴入裝有 IOOmL標(biāo)準(zhǔn)硬水的燒杯中，觀察樣品在水中的分散狀況，結(jié)果顯示熱貯前產(chǎn)品在水中能迅速 呈云霧狀自動(dòng)分散，無可見顆粒下沉，熱貯后，產(chǎn)品可見少量顆粒，但經(jīng)輕微晃動(dòng)就可分散。
[0028] 實(shí)施例3 :油懸劑對(duì)美國白蛾核型多角體病毒活性影響的測(cè)定
[0029] 將病毒油懸劑（病毒濃度IO9PIBAiL)分別稀釋10倍和100倍，將純病毒液稀釋 至相同的濃度，作為對(duì)照使用；將稀釋的制劑和病毒液分別與飼料按比例混勻；挑選5齡初 美國白蛾幼蟲，饑餓6~8h ;每小盒放入5g混有病毒的飼料，放入30頭蟲，帶病毒飼料取 食完以后，換新鮮飼料繼續(xù)喂養(yǎng)；測(cè)定試驗(yàn)重復(fù)三次。待幼蟲開始發(fā)病后，分別記錄病毒油 懸劑和純病毒液處理的幼蟲死亡情況，計(jì)算死亡率并進(jìn)行比較。
[0030] 當(dāng)病毒濃度為IO8PIBAiL時(shí)，飼喂油懸劑的美國白蛾幼蟲死亡率為87. 78%，飼喂 HcNPV的美國白蛾幼蟲死亡率為83. 33%。當(dāng)病毒濃度為IO7PIBAiL時(shí)，飼喂油懸劑的美國 白蛾幼蟲死亡率為63. 33%，飼喂HcNPV的美國白蛾幼蟲死亡率為61. 11%。結(jié)果（圖1) 表明，制成油懸劑后，HcNPV活性并沒有降低，油懸劑對(duì)美國白蛾核型多角體病毒的殺蟲活 性沒有影響。
[0031] 實(shí)施例4 :美國白蛾核型多角體病毒油懸劑貯存后的毒力測(cè)定
[0032] 將制成的病毒油懸劑（病毒濃度109PIB/mL)和純病毒液在4°C條件下分別貯存3 個(gè)月后，按梯度稀釋法分別將病毒油懸劑和純病毒液稀釋至2X 108、2X 107、2X 106、2X IO5 和2 X 104PIB/mL等5個(gè)濃度，以5齡初美國白蛾幼蟲為試蟲，進(jìn)行生物測(cè)定，試驗(yàn)重復(fù)三次。 待幼蟲開始發(fā)病后，分別記錄各處理幼蟲的死亡情況，計(jì)算LC 5tl及其95%置信限。
[0033] 生物測(cè)定結(jié)果（表1和圖2)表明，貯存3個(gè)月病毒油懸劑對(duì)5齡美國白蛾幼蟲的 LC5tl為2. 29 X 10 6PIB/mL，純病毒液的LC5tl為3. 12 X 10 6PIB/mL，二者差異不顯著，說明油懸 劑貯存一段時(shí)間后，對(duì)其活性保持較好。
[0034] 表1貯存3個(gè)月病毒油懸劑和純病毒液的生物測(cè)定結(jié)果
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種油懸劑，其特征在于，所述的油懸劑包含有溶劑、乳化劑和增稠劑，其中各組份 的百分比含量為：50%~80%的溶劑；10%~30%的乳化劑、0. 1%~20%的增稠劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的油懸劑，其特征在于，所述的溶劑為油酸甲酯。
3. 如權(quán)利要求1所述的油懸劑，其特征在于，所述的乳化劑為十二烷基苯磺酸鈣、三苯 乙烯基苯酚聚氧乙烯醚、吐溫-80中的一種或以上。
4. 如權(quán)利要求1所述的油懸劑，其特征在于，所述的增稠劑為阿拉伯膠、羧甲基纖維 素、淀粉中的一種或幾種。
5. 如權(quán)利要求1所述的油懸劑，其特征在于，所述的乳化劑為十二烷基苯磺酸鈣、三苯 乙烯基苯酚聚氧乙烯醚和吐溫-80的混合物，其比例分別為ΙΟ%』％和4%;所述的增稠劑 為阿拉伯膠，比例為0. 16% ;所述的溶劑為油酸甲酯，比例為72%。
6. -種用于防治美國白蛾的核型多角體病毒殺蟲劑，其特征在于，所述的殺蟲劑包含 有權(quán)利要求1所述的油懸劑和美國白蛾核型多角體病毒溶液。
7. 如權(quán)利要求6所述的殺蟲劑，其特征在于，所述的殺蟲劑中的油懸劑為80%，美國白 蛾核型多角體病毒溶液為20%。
8. 如權(quán)利要求6或7所述的殺蟲劑，其特征在于，所述的美國白蛾核型多角體病毒的濃 度為 IO7~10 9PIB/mL。
9. 權(quán)利要求6所述的殺蟲劑的制備方法，其特征在于，所述的方法是將將美國白蛾核 型多角體病毒液、十二烷基苯磺酸鈣、三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚、吐溫-80、油酸甲酯混 合，漩渦振蕩器上震蕩混合均勻，然后加入阿拉伯膠，繼續(xù)震蕩30min以上制成病毒油懸 劑。
【專利摘要】本發(fā)明的目的是提供一種美國白蛾核型多角體病毒殺蟲劑，即使用油懸劑制備的核型多角體病毒殺蟲劑。本發(fā)明的油懸劑包含有溶劑、乳化劑、增稠劑等，其中各組份的百分比含量為：50％～80％的溶劑；10％～30％的乳化劑和5％～25％的增稠劑。本發(fā)明的制劑制作過程中沒有粉塵污染，降低環(huán)境污染，對(duì)人體危害??；制劑性能穩(wěn)定，分散性好，熱貯藏穩(wěn)定性、懸浮率符合國家標(biāo)準(zhǔn)；制劑對(duì)病毒的活性沒有影響，對(duì)美國白蛾的殺滅作用明顯。
【IPC分類】A01N25-04, A01P7-04, A01N63-00
【公開號(hào)】CN104705294
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510014803
【發(fā)明人】李長(zhǎng)友, 鄭桂玲, 蘇蕊
【申請(qǐng)人】青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年1月12日