工作臺(tái)上備用。在接種前先用0.15% HgCl2W 0. 1 %吐溫放在搖床上震蕩消毒5min，震蕩速度為100rpm/S，用無(wú)菌水沖洗3次。再用70% 酒精浸泡l〇s，最后無(wú)菌水沖洗5次。放在滅菌的不銹鋼盤子里，用滅菌濾紙吸干表面水分， 備用。每個(gè)品種采10個(gè)花托，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
[0033] 2)不定芽誘導(dǎo)與增殖
[0034] 將消毒好的材料放在無(wú)菌濾紙上吸干水分，剝?nèi)セㄝ嗪突ㄍ谢浚瑢Р糠只ㄍ?的小花縱切成1~2mm的厚的小塊，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。外植體的培養(yǎng)條件為： (25± I) °C、16h/d 光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度 4000 y mol ? HT2 ? s。
[0035] 培養(yǎng)2個(gè)月開(kāi)始，外植體上分化出不定芽，當(dāng)不定芽生長(zhǎng)到0. 5cm大小是將不定芽 轉(zhuǎn)接到MS培養(yǎng)基上壯苗。在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周后，將不定芽切成單棵轉(zhuǎn)接到上述修訂 的15培養(yǎng)基+0.611^/16-84+0.211^/1隱4+6〇11^/1硫酸鹽腺嘌呤的培養(yǎng)基以1)上誘導(dǎo)不定 芽的增殖和生長(zhǎng)。試驗(yàn)時(shí)，以MS基本培養(yǎng)基添加2. 0mg/L6-BA+0. 2mg/L NAA培養(yǎng)基（M2) 為對(duì)照比較增值效果。增殖35天的不定芽切成單棵轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根。
[0036] 3)非洲菊生根
[0037] 在兩種增殖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的不定芽轉(zhuǎn)接到修訂的MS培養(yǎng)基添加0. 2mg/L NAA， 〇. 5%瓊脂粉的生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。
[0038] 4)馴化移栽
[0039] 生根兩周后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到溫室馴化2~5天，之后打開(kāi)瓶蓋用清水漂洗粘在根 系上的培養(yǎng)基，移栽到基質(zhì)上?；|(zhì)的配比丹麥品氏托普基質(zhì)珍珠巖按3 : 2。移栽之后扣 小拱棚、保持溫度和濕度。
[0040] 實(shí)施例2
[0041] 利用實(shí)施例1方案進(jìn)行非洲菊組培快繁培育，并對(duì)其培育過(guò)程數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄和統(tǒng) 計(jì)。
[0042] 1)不定芽的誘導(dǎo)
[0043] 小花在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)一周時(shí)切割部分膨大，培養(yǎng)7天左右花托的小花 膨大、變綠，花托的切面膨大，但沒(méi)有愈傷組織。培養(yǎng)10天左右是小花上開(kāi)始出現(xiàn)愈傷組 織，小花膨大呈菊花狀，愈傷組織上開(kāi)始分化出小芽。培養(yǎng)35-42天時(shí)，小花逐漸變黑，變黑 的小花愈傷組織上不斷分化出叢生小芽。不同品種不定芽分化能力不同，大雪菊的不定芽 分化率最高為56. 6%，水粉為45. 5%、四季紅為38. 5%等。
[0044] 2)不定芽的伸長(zhǎng)、壯苗
[0045] 在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上分化出的不定芽為叢生芽。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上叢生芽的分化 旺盛而影響不定芽的伸長(zhǎng)。將叢生芽切成幾塊轉(zhuǎn)移至MS培養(yǎng)基促進(jìn)不定芽的伸長(zhǎng)，可提高 組培快繁種苗的質(zhì)量。在MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)21天左右可獲得粗壯、健康的小苗。
[0046] 3)不定芽的增殖
[0047] 將粗壯健康的叢生芽切成單株并轉(zhuǎn)移到以下培養(yǎng)基。
[0048] Ml :修訂的MS培養(yǎng)基添加0?6mg/L 6-BA+O. 2mg/L NAA+60mg/L硫酸鹽腺嘌呤。培 養(yǎng)21天左右小苗增殖效果較好，小苗呈綠色，株高均超過(guò)3cm，小苗的增值系數(shù)達(dá)5~10。 培養(yǎng)28~30天時(shí)，小苗的株高為5cm以上的苗數(shù)達(dá)80%以上，叢生芽被切之后均成單棵。 培養(yǎng)35天時(shí)，將小芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基。
[0049] M2 :在MS添加2. Omg/L 6-BA+O. 2mg/L NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的不定芽增殖效果比Ml 培養(yǎng)基差，小苗淺綠。28~30天時(shí)，大多數(shù)增殖苗的平均株高小于3cm，四季紅、黃色風(fēng)暴 等品種的增殖苗不成單棵，增殖時(shí)間長(zhǎng)。不定芽在不同培養(yǎng)基上的增殖效果見(jiàn)表1。
[0050] 表1在不同非洲菊品種在增殖培養(yǎng)中的增殖效果
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種非洲菊組培快繁培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其特征 在于：所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為修訂的MS培養(yǎng)基添加3. Omg/L 6-BA+O. 5mg/L IAA+1. Omg/L CPPU，30g/L 糖，0.8%瓊脂，用 0? IN NaOH 或 HCl 調(diào)至 pH 5.8,在 104kPa，121°C下高壓蒸汽 滅菌20min ;所述的增殖培養(yǎng)基為修訂的MS培養(yǎng)基+0. 6mg/L6-BA+0. 2mg/L NAA+60mg/L硫 酸鹽腺嘌呤；所述的生根培養(yǎng)基為修訂的MS+0. 2mg/L NAA。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種非洲菊組培快繁培養(yǎng)基，其特征在于：所述的修訂MS培 養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，在其它成分不變的條件下調(diào)整其中鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、 煙酸和泛酸1?的含量分別為：l〇mg/L，1.0 mg/L，1.0 mg/L，1.0 mg/L，并充分混勾成混合溶液。
3. -種非洲菊組培快繁培育方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 外植體的選擇和處理：選取幼嫩花托作為外植體，于當(dāng)日用飽和洗衣粉溶液清洗， 自來(lái)水沖洗干凈，接種前用0. 15% HgCl2W 0. 1 %吐溫置于搖床上以100rpm/S震蕩消毒 5min，用無(wú)菌水沖洗干凈，再用70%酒精浸泡10s，最后無(wú)菌水沖洗，備用； 2) 不定芽誘導(dǎo)：將將處理好的外植體吸干水分，剝?nèi)セㄝ嗪突ㄍ谢?，將帶部分花?的小花縱切成1~2mm的厚的小塊，接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中； 3) 不定芽增殖：外植體上分化出不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接至修訂的MS培養(yǎng)基中壯苗；培 養(yǎng)4周后，將不定芽切成單棵轉(zhuǎn)接至上述增殖培養(yǎng)基； 4) 不定芽生根：增殖35天的不定芽切成單棵轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)生根； 5) 馴化移栽：生根兩周后將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移至溫室馴化2~5天，用清水漂洗粘在根系上 的培養(yǎng)基，移栽到基質(zhì)上。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種非洲菊組培快繁培育方法，其特征在于：步驟⑵中所 述的培養(yǎng)條件為：25± 1°C、16h/d光培養(yǎng)，光照強(qiáng)度4000 y mol ? m 2 ? s。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種非洲菊組培快繁培育方法，其特征在于：步驟（5)所述 的基質(zhì)為丹麥品氏托普基質(zhì)與珍珠巖按質(zhì)量比3:2制備。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種非洲菊組培快繁培養(yǎng)基及其培育方法，組培培養(yǎng)基包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，使用所述的培養(yǎng)基進(jìn)行非洲菊幼嫩花托離體再生，該技術(shù)包括不定芽的誘導(dǎo)、增殖、生根、馴化移栽等過(guò)程。采用該方法與配方不僅可提高非洲菊的增值系數(shù)、可培育優(yōu)質(zhì)壯苗，而且可縮短培養(yǎng)周期，提高成活率，還可使非洲菊提早開(kāi)花15天左右，可提早大棚栽培時(shí)的小苗的分化時(shí)間，可提高采花產(chǎn)量和質(zhì)量。
【IPC分類】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104737912
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510149499
【發(fā)明人】廉玉姬
【申請(qǐng)人】臨沂大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年3月31日