一種白芨的種子組織快繁育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中醫(yī)藥種植領(lǐng)域，具體為一種白芨的種子組織快繁育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]白芨為蘭科白芨屬多年生草本植物，亦作白及、連及草、甘根，分布于中國至朝鮮、日本，我國產(chǎn)于華東、華南、及河南、陜西、四川、云南等地。白芨的塊莖為我國傳統(tǒng)中藥，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，《中國藥典》中所收載具有補肺、消腫、生肌、止血、斂瘡等功效，用于治療肺傷咳血、金瘡出血、潰瘍疼痛、湯火灼傷、手足皸裂等癥。此外，白芨花色艷麗，也是一種很好的景觀植物，因此市場對白芨的需求十分旺盛。由于市場需求的擴大，近年來我國大部分地區(qū)的野生白芨遭到過度采挖，導(dǎo)致其野生自然資源急劇減少，瀕臨滅絕，被國家列為重點保護(hù)的野生藥用植物之一。
[0003]為保護(hù)白芨野生資源，人工繁育和栽培白芨勢在必行。白芨的種子非常細(xì)小且無胚乳，因此在自然狀況下很難萌發(fā)和生長，實生苗的栽培較為困難，傳統(tǒng)栽培主要靠分株繁殖。但分株繁殖周期長，繁殖效率低，而且耗種量大，很難滿足大量栽培的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的就在于提供一種利用白芨的種子進(jìn)行組織培養(yǎng)，以便快速繁殖白芨幼苗，滿足市場需要。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用種子萌發(fā)途徑進(jìn)行組織培養(yǎng)，包括種子的消毒滅菌、種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo)、原球莖增殖、叢生芽誘導(dǎo)及增殖、生根培養(yǎng)、煉苗與移植。其特征在于具體方法如下:
(I)白芨種子的準(zhǔn)備與滅菌:取未開裂的健壯白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分鐘再經(jīng)流水漂洗，充分洗凈后在超凈工作臺上用70%的乙醇浸泡30s，再用0.15%升汞浸泡20min，無菌水沖洗4_5遍后至于滅菌的吸水紙上，吸干水分待用。
[0006](2)種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo):種子經(jīng)消毒滅菌后即可將其接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將溫度控制在晝溫22-24°C，夜溫18-20°C，在暗箱中進(jìn)行種子培養(yǎng)，5-6天后種子開始膨脹增大，此時調(diào)整培養(yǎng)條件，溫度控制在25±2°C，光照強度1500-2000LX，每天光照12小時，10天后形成原球莖。
[0007](3)原球莖增殖:在原球莖未分化出葉片時轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，放置于溫度為23-25 0C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，培養(yǎng)15天后獲得叢生型原球莖。
[0008](4)叢生芽誘導(dǎo)及增殖:將叢生型原球莖轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為23-25°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，在35-40天后可看到大量叢生芽。
[0009](5)生根培養(yǎng):當(dāng)叢生芽長到2.5-3.5cm時可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照強度2500-3000LX，每天光照12-15小時，30天后可觀察到根須粗壯的白芨苗。
[0010](6)煉苗與移植:在白芨苗生根后長到4-5cm時可煉苗移栽，保持煉苗前期的空氣濕度在80% -90%之間，將培養(yǎng)容器打開，與室內(nèi)自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自來水沖凈根上的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，適度遮蔭，保持一定的濕度，待其新葉展開和新根長出后，即可按常規(guī)管理。
[0011]上述組培繁殖方法中，所提到的各階段培養(yǎng)基的配方是:
原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):l/2MS+lmg/L6-BA+0.09mg/LNAA+ 蔗糖 30g+ 馬鈴薯泥 40g/L，ph =
5.8ο
[0012]原球莖增殖培養(yǎng):MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g+ 馬鈴薯泥 40g/L，ph =5.8ο
[0013]叢生芽誘導(dǎo)與增殖:MS+6_BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+ 卡拉膠 6g/L+ 薦糖 30g，ph =5.8ο
[0014]生根培養(yǎng):1/2MS+NAA0.6mg/+ 香蕉泥 70g/L，ph = 5.6。
[0015]本發(fā)明的有益效果是采用種子組培，所得的幼苗污染率低，分化率高，有效物質(zhì)含量高；同時本發(fā)明方法還大大縮短了白芨的組培繁殖周期，從種子到生根苗的組培周期為4個月左右，大大縮短了生產(chǎn)時間，降低了生產(chǎn)成本。
【具體實施方式】
[0016]制備培養(yǎng)基:
原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):l/2MS+lmg/L6-BA+0.09mg/LNAA+ 蔗糖 30g+ 馬鈴薯泥 40g/L，ph =
5.8ο
[0017]原球莖增殖培養(yǎng):MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g+ 馬鈴薯泥 40g/L，ph =5.8ο
[0018]叢生芽誘導(dǎo)與增殖:MS+6_BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+ 卡拉膠 6g/L+ 薦糖 30g，ph =5.8ο
[0019]生根培養(yǎng):1/2MS+NAA0.6mg/+ 香蕉泥 70g/L，ph = 5.6。
[0020]實施例1:
(I)白芨種子的準(zhǔn)備與滅菌:取未開裂的健壯白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分鐘再經(jīng)流水漂洗，充分洗凈后在超凈工作臺上用70%的乙醇浸泡30s，再用0.15%升汞浸泡20min，無菌水沖洗4_5遍后至于滅菌的吸水紙上，吸干水分待用。
[0021](2)種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo):種子經(jīng)消毒滅菌后即可將其接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將溫度控制在晝溫22-24°C，夜溫18-20°C，在暗箱中進(jìn)行種子培養(yǎng)，5-6天后種子開始膨脹增大，此時調(diào)整培養(yǎng)條件，溫度控制在25±2°C，光照強度1500-2000LX，每天光照12小時，10天后形成原球莖。
[0022](3)原球莖增殖:在原球莖未分化出葉片時轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，放置于溫度為23-25 0C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，培養(yǎng)15天后獲得叢生型原球莖。
[0023](4)叢生芽誘導(dǎo)及增殖:將叢生型原球莖轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為23-25°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，在35-40天后可看到大量叢生芽。
[0024](5)生根培養(yǎng):當(dāng)叢生芽長到2.5-3.5cm時可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照強度2500-3000LX，每天光照12-15小時，30天后可觀察到根須粗壯的白芨苗。
[0025](6)煉苗與移植:在白芨苗生根后長到4-5cm時可煉苗移栽，保持煉苗前期的空氣濕度在80% -90%之間，將培養(yǎng)容器打開，與室內(nèi)自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自來水沖凈根上的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，適度遮蔭，保持一定的濕度，待其新葉展開和新根長出后，即可按常規(guī)管理。
[0026]實施例2:
(I)白芨種子的準(zhǔn)備與滅菌:取未開裂的健壯白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分鐘再經(jīng)流水漂洗，充分洗凈后在超凈工作臺上用70%的乙醇浸泡30s，再用0.15%升汞浸泡20min，無菌水沖洗4_5遍后至于滅菌的吸水紙上，吸干水分待用。
[0027](2)種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo):種子經(jīng)消毒滅菌后即可將其接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將溫度控制在晝溫22-24°C，夜溫18-20°C，在暗箱中進(jìn)行種子培養(yǎng)，5-6天后種子開始膨脹增大，此時調(diào)整培養(yǎng)條件，溫度控制在25±2°C，光照強度1500-2000LX，每天光照12小時，10天后形成原球莖。
[0028](3)原球莖增殖:在原球莖未分化出葉片時轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，放置于溫度為23-25 0C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，培養(yǎng)15天后獲得叢生型原球莖。
[0029](4)叢生芽誘導(dǎo)及增殖:將叢生型原球莖轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為23-25°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，在35-40天后可看到大量叢生芽。
[0030](5)生根培養(yǎng):當(dāng)叢生芽長到2.5-3.5cm時可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照強度2500-3000LX，每天光照12-15小時，30天后可觀察到根須粗壯的白芨苗。
[0031](6)煉苗與移植:在白芨苗生根后長到4-5cm時可煉苗移栽，保持煉苗前期的空氣濕度在80% -90%之間，將培養(yǎng)容器打開，與室內(nèi)自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自來水沖凈根上的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，適度遮蔭，保持一定的濕度，待其新葉展開和新根長出后，即可按常規(guī)管理。
【主權(quán)項】
1.一種白芨的種子組織快繁育苗方法，其特征在于，具體方法如下: (1)白芨種子的準(zhǔn)備與滅菌:取未開裂的健壯白芨蒴果，用洗衣粉液清洗1-2分鐘再經(jīng)流水漂洗，充分洗凈后在超凈工作臺上用70%的乙醇浸泡30s，再用0.15%升汞浸泡20min，無菌水沖洗4_5遍后至于滅菌的吸水紙上，吸干水分待用； (2)種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo):種子經(jīng)消毒滅菌后即可將其接種到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將溫度控制在晝溫22-24?，夜溫18-20°C，在暗箱中進(jìn)行種子培養(yǎng)，5-6天后種子開始膨脹增大，此時調(diào)整培養(yǎng)條件，溫度控制在25±2°C，光照強度1500-2000LX，每天光照12小時，10天后形成原球莖； (3)原球莖增殖:在原球莖未分化出葉片時轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，放置于溫度為23-25 0C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，培養(yǎng)15天后獲得叢生型原球莖: (4)叢生芽誘導(dǎo)及增殖:將叢生型原球莖轉(zhuǎn)接到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為23-25°C的培養(yǎng)室中進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，光照強度2000-2500LX，每天光照12-15小時，在35-40天后可看到大量叢生芽； (5)生根培養(yǎng):當(dāng)叢生芽長到2.5-3.5cm時可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照強度2500-3000LX，每天光照12-15小時，30天后可觀察到根須粗壯的白芨苗； (6)煉苗與移植:在白芨苗生根后長到4-5cm時可煉苗移栽，保持煉苗前期的空氣濕度在80 % -90 %之間，將培養(yǎng)容器打開，與室內(nèi)自然光照下放置3-4天左右，然后取出小苗，用自來水沖凈根上的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的基質(zhì)中，適度遮蔭，保持一定的濕度，待其新葉展開和新根長出后，即可按常規(guī)管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芨的種子組織快繁育苗方法，其特征在于，原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方是:l/2MS+lmg/L6-BA+0.09mg/LNAA+蔗糖 30g+馬鈴薯泥 40g/L，ph = 5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芨的種子組織快繁育苗方法，其特征在于，原球莖增殖培養(yǎng)的配方是:MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30g+ 馬鈴薯泥 40g/L，ph = 5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芨的種子組織快繁育苗方法，其特征在于，叢生芽誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)的配方是:MS+6-BA0.9mg/L+NAA0.14mg/L+卡拉膠6g/L+蔗糖30g，ph = 5.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白芨的種子組織快繁育苗方法，其特征在于，生根培養(yǎng)的配方是:1/2MS+NAA0.6mg/+ 香蕉泥 70g/L，ph = 5.6。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種白芨的種子組織快繁育苗方法，包括以下步驟：種子的消毒滅菌、種子萌發(fā)和原球莖誘導(dǎo)、原球莖增殖、叢生芽誘導(dǎo)及增殖、生根培養(yǎng)、煉苗與移植。本發(fā)明的有益效果是采用種子組培，所得的幼苗污染率低，分化率高，有效物質(zhì)含量高；同時本發(fā)明方法還大大縮短了白芨的組培繁殖周期，從種子到生根苗的組培周期為4個月左右，大大縮短了生產(chǎn)時間，降低了生產(chǎn)成本。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104782485
【申請?zhí)枴緾N201510173823
【發(fā)明人】李勇, 韓邦興, 戴軍
【申請人】安徽春之蔚農(nóng)業(yè)科技有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年4月8日