基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻安全性的評(píng)價(jià)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于轉(zhuǎn)基因作物生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻安全性的評(píng)價(jià)方法，特別是基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評(píng)價(jià)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]褐飛虱lugens (Stal) (Brown planthopper，簡稱 BPH)是我國及許多亞洲國家當(dāng)前水稻生產(chǎn)上的首要害蟲。褐飛虱取食水稻后會(huì)排泄蜜露，蜜露排泄的多少與取食量成正比，取食越多，排泄的蜜露也相應(yīng)增多，因此，褐飛虱蜜露排泄量常作為其對(duì)水稻致害性的指標(biāo)，現(xiàn)也廣泛應(yīng)用于施用農(nóng)藥、肥料后，或氣候變化后褐飛虱與水稻的互作關(guān)系研宄上。
[0003]黑肩綠盲蝽lividipennis Reuter是水稻害蟲褐飛虱的重要天敵，在控制褐飛虱自然種群數(shù)量上發(fā)揮了很大作用?，F(xiàn)有關(guān)轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)黑肩綠盲蝽的安全性評(píng)價(jià)的研宄主要是在基因傳遞上和對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性的影響上，如轉(zhuǎn)Bt {Bacillusthuringiensis，蘇云金桿菌)基因水稻被褐飛虱取食后，黑肩綠盲蝽又取食褐飛虱卵，Bt^因在這一食物鏈中的傳遞；又如褐飛虱先取食轉(zhuǎn)基因水稻，黑肩綠盲蝽再捕食在轉(zhuǎn)基因水稻上生長發(fā)育的褐飛虱所產(chǎn)的卵，從而研宄轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性的影響。現(xiàn)有資料中收集褐飛虱蜜露的是用膜將褐飛虱套在稻桿上，過一段時(shí)間再收集，每次收集到的蜜露很少，需在多根稻桿上套上膜，再將收集到的蜜露匯集，工序繁瑣、效率低?’另一方面，膜內(nèi)常常有水蒸氣，容易影響所收集的蜜露的純度；稻桿豎著放置，收集的蜜露也容易漏出來。
[0004]褐飛虱取食水稻后，排泄的蜜露富含多種營養(yǎng)物質(zhì)，天敵昆蟲會(huì)取食褐飛虱蜜露，但是褐飛虱取食轉(zhuǎn)基因水稻后分泌的蜜露對(duì)捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評(píng)價(jià)，對(duì)于轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻環(huán)境釋放的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估也非常重要，目前還未見此類報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)上述現(xiàn)狀，提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻安全性的評(píng)價(jià)方法，對(duì)黑肩綠盲蝽直接取食褐飛虱取食轉(zhuǎn)基因水稻后分泌的蜜露對(duì)黑肩綠盲蝽壽命和捕食能力等方面的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而更全面、科學(xué)的評(píng)價(jià)抗除草劑轉(zhuǎn)基因水稻的生態(tài)安全性。
[0006]對(duì)此，本發(fā)明提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻的環(huán)境安全性評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟:
步驟S1:確定比較樣本的水稻品種得到各比較樣本，分別收集所述各比較樣本水稻上飼養(yǎng)的褐飛虱分泌的蜜露，得到各比較樣本水稻的褐飛虱蜜露；
步驟S2:用載體分別吸收比較樣本水稻的褐飛虱蜜露，然后將吸收了褐飛虱蜜露的載體分別裝入喂食容器中得到各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器，所述喂食容器的側(cè)壁設(shè)有通孔；準(zhǔn)備與樣本數(shù)量相同的試驗(yàn)箱，將所述各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器分別放入各試驗(yàn)箱中；
步驟S3:將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到所述步驟S2裝有比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗(yàn)箱中，定時(shí)檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡；
步驟S4:準(zhǔn)備帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖；將帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖放入到所述步驟S2裝有對(duì)應(yīng)的比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗(yàn)箱中，將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到所述各試驗(yàn)箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量；
步驟S5:分析比較取食了各比較樣本褐飛虱蜜露的黑肩綠盲蝽的成蟲壽命，以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性和捕食能力的影響。
[0007]上述技術(shù)方案，將載體裝入帶孔的喂食容器內(nèi)，可以避免蟲與載體直接接觸，減少了影響因素。如果用載體吸收稻株傷流液直接來喂蟲子，蟲子接觸液體的面積大，容易沾濕翅膀、身體，影響實(shí)驗(yàn)效果。
[0008]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述比較樣本水稻品種為三個(gè)，分別為轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻。
[0009]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟SI中收集褐飛虱蜜露的方法為:將水稻稻桿放置在收集容器中，所述收集容器底部設(shè)有通孔，然后將褐飛虱放入所述收集容器中，用吸水透氣材料片或膜覆蓋收集容器的口部，從收集容器底部的通孔收集褐飛虱蜜露。所述吸水透氣材料片或膜優(yōu)選濾紙。采用此種方案，將褐飛虱放入后，便于集中收集褐飛虱蜜露，操作簡單、效率高，且不容易漏出；采用濾紙覆蓋收集容器的口部，減少了水蒸氣的影響。
[0010]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述收集容器為漏斗形，所述收集容器的口部設(shè)有對(duì)稱的凹槽，所述水稻稻桿水平放入到對(duì)稱的凹槽中；所述收集容器在漏斗形的上部與傾斜部之間采用隔斷物分開，所述隔斷物上設(shè)有通孔。采用此技術(shù)方案，便于水稻稻桿的固定，避免褐飛虱跑出，同時(shí)又收集了蜜露。
[0011 ] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述水稻稻桿與凹槽之間設(shè)有所述水稻稻桿與凹槽之間設(shè)有棉花、棉球或者棉布中至少一種。即將所述將水稻稻桿放置在收集容器中時(shí)，先在所述凹槽內(nèi)墊上棉花、棉球或者棉布，然后將水稻稻桿水平放入到收集容器對(duì)稱的凹槽內(nèi)；或者先在與凹槽對(duì)應(yīng)的水稻稻桿的位置先用棉花、棉球或者棉布裹住稻桿，然后再水稻稻桿水平放入到收集容器對(duì)稱的凹槽內(nèi)。采用此技術(shù)方案，棉花、棉球或者棉布裹住凹槽內(nèi)的稻桿，減少了對(duì)稻桿的擠壓，同時(shí)能更好地固定水稻稻桿和密封收集容器，避免褐飛虱跑出。
[0012]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述收集容器的口部為方形。采用此技術(shù)方案，相對(duì)圓形口部的漏斗更容易固定稻桿，而且可以放長度相等的稻桿，實(shí)現(xiàn)定量收集。
[0013]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述隔斷物為紗網(wǎng)。采用此技術(shù)方案，避免褐飛虱跑出，同時(shí)便于更好地收集褐飛虱蜜露。
[0014]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，步驟S2中，所述喂食容器為圓柱形中空管。
[0015]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟S3中，將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲裝入到試驗(yàn)箱后，定時(shí)用膠頭滴管給載體補(bǔ)充各比較樣本的褐飛虱蜜露，保證載體濕潤。
[0016]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述步驟S4中，準(zhǔn)備帶有褐飛虱卵的各比較樣本水稻稻莖的方法為，將懷卵褐飛虱雌蟲分別在各比較樣本的稻莖上產(chǎn)卵24h，得到帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖。
[0017]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，還包括以蒸餾水代替褐飛虱蜜露喂食作為對(duì)照，重復(fù)步驟S2到步驟S5的步驟，即還包括:
將浸泡蒸餾水的載體，裝入另外一個(gè)喂食容器中；將含有浸泡蒸餾水載體的喂食容器放入另外一個(gè)試驗(yàn)箱中，定時(shí)檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡；將帶有褐飛虱卵的任一比較樣本的水稻稻莖放入到所述裝有浸泡蒸餾水載體喂食容器的試驗(yàn)箱中，將24h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到試驗(yàn)箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量，將得到的數(shù)據(jù)作為對(duì)照數(shù)據(jù)。
[0018]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述黑肩綠盲蝽為室內(nèi)用TNl水稻品種飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)種群；所述褐飛虱為在TNl水稻上飼養(yǎng)一代后，再接入蟲籠中的不同水稻品種或品系上飼養(yǎng)得到的種群。
[0019]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述載體為棉球、海綿或棉布中至少一種。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
本發(fā)明提供了基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻安全性的評(píng)價(jià)方法，特別是基于褐飛虱蜜露的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評(píng)價(jià)方法，該方法從另外一個(gè)角度研宄了褐飛虱取食轉(zhuǎn)基因水稻后分泌的蜜露對(duì)捕食性天敵黑肩綠盲蝽的影響；該方法可在室內(nèi)測定，使用更加方便，易于控制，準(zhǔn)確性高，周期性短，可以為轉(zhuǎn)基因水稻的環(huán)境釋放對(duì)天敵昆蟲是否安全提供新的評(píng)價(jià)方法。
【附圖說明】
[0021]圖1是本發(fā)明一種實(shí)施例褐飛虱蜜露收集容器的剖視結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2是本發(fā)明一種實(shí)施例褐飛虱蜜露收集容器的俯視圖；
圖3是本發(fā)明一種實(shí)施例的飼喂裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖4是本發(fā)明一種實(shí)施例的三種褐飛虱蜜露對(duì)黑肩綠盲蝽雌成蟲壽命影響對(duì)比圖；
圖5是本發(fā)明一種實(shí)施例的三種褐飛虱蜜露對(duì)黑肩綠盲蝽雄成蟲壽命影響對(duì)比圖；
圖6是本發(fā)明一種實(shí)施例的三種褐飛虱蜜露和蒸餾水對(duì)黑肩綠盲蝽捕食褐飛虱卵能力的影響對(duì)比圖。
[0022]其中，CK:喂食蒸餾水的實(shí)驗(yàn)處理；
HTNl:喂食TNl水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實(shí)驗(yàn)處理；
HD68:喂食D68水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實(shí)驗(yàn)處理；
HBar68-l:喂食Bar68_l水稻的褐飛虱排泄的蜜露的實(shí)驗(yàn)處理；
圖中，a，b，ab，bc，c表不差異性，相同字母表不兩者差異不顯者，不同字母表不差異顯著。
【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽環(huán)境安全性的評(píng)價(jià)方法，【具體實(shí)施方式】為，包括以下步驟:
步驟S1:分別收集轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻上飼養(yǎng)的褐飛虱分泌的蜜露，得到轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻的褐飛虱蜜露；
步驟S2:用棉球分別吸收轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻的褐飛虱蜜露，然后將吸收了褐飛虱蜜露的棉球分別裝入三個(gè)喂食容器中，所述喂食容器的側(cè)壁設(shè)有通孔；將三個(gè)喂食容器分別放入到三個(gè)試驗(yàn)箱中；
步驟S3:將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到三個(gè)試驗(yàn)箱中，每6 h檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡；
步驟S4:將懷卵褐飛虱雌蟲分別在轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻TNl稻莖上產(chǎn)卵24h，得到帶有褐飛虱卵的上述三種水稻稻莖；將這三種帶有褐飛虱卵的水稻稻莖分別放入到步驟S2裝有對(duì)應(yīng)的比較樣本的褐飛虱蜜露喂食容器的三個(gè)試驗(yàn)箱中，將24h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲分別裝入到這三個(gè)試驗(yàn)箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量；
步驟S5:比較采用轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻的褐飛虱蜜露和非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照、非轉(zhuǎn)基因感蟲品種的褐飛虱蜜露喂食處理間，黑肩綠盲蝽的成蟲壽命以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性和捕食能力的影響。
[0024]另外，還包括以蒸餾水代替褐飛虱蜜露喂食作為對(duì)照，重復(fù)步驟S2到步驟S5的內(nèi)容。
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