石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法和培養(yǎng)裝置的制造方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物工程技術，特別涉及一種石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法和培養(yǎng)裝置。
技術背景
[0002]石斛是我國的一味珍貴的滋補類中草藥，具有補氣健胃，滋補腎陰，增強人體免疫力的作用，《神農本草經》中列為上品。由于用量巨大，目前面臨著兩個危機:一是野生植物資源蘊藏量和產量普遍存在著下降趨勢；二是石斛需求量不斷增加，造成了對該藥用植物資源的超量采挖。傳統(tǒng)的石斛栽培技術主要包括活樹接種培養(yǎng)和無土基質栽培?；顦浣臃N培養(yǎng)產量太低；無土基質培養(yǎng)時所用基質以松樹皮為主，不僅破壞了寶貴的樹木資源，而且增加了種植成本。通過對現(xiàn)有技術的檢索發(fā)現(xiàn)，蔣娉等(2013)發(fā)明了一種“一種鐵皮石斛無糖組織培養(yǎng)方法”，肖玉蘭等(2012)發(fā)明了“一種無糖箱式植物組織的培養(yǎng)方法”，王錫麟等(2006)發(fā)明了一種“氣培式植物無糖組培裝置”，這些發(fā)明專利可以降低石斛無菌組培苗的污染率，但沒有解決石斛苗室外自然條件下生長時，所需基質的問題。另外，石斛對根部的通氣要求高，上述專利中植物長期浸泡在液體中，容易引起爛根；另外往箱底通入二氧化碳會增加種植成本。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的，就是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的問題，提供一種石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法和培養(yǎng)裝置。
[0004]為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用了以下技術方案:一種石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0005]一、用氯化汞溶液對石斛種子進行消毒，然后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，光照下培養(yǎng);
[0006]二、無菌苗生根后打開瓶蓋，練苗2-3天；
[0007]三、練苗結束后洗浄根部殘留的瓊脂，然后轉入間歇浸沒式培養(yǎng)裝置中；
[0008]四、在間歇浸沒式培養(yǎng)裝置下腔注入營養(yǎng)液，然后把石斛苗無菌扦插到裝置上腔并用不銹鋼網狀苗床固定；采用間歇浸沒式培養(yǎng)模式對石斛苗進行培養(yǎng)，讓營養(yǎng)液在虹吸管和液泵的共同作用下在裝置的上腔和下腔之間間歇循環(huán)轉移。
[0009]步驟一所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基，為添加0.2-0.5mg/L赤霉素的MS固體培養(yǎng)基。
[0010]步驟四所述間歇浸沒式培養(yǎng)模式是，在室溫下，將間歇浸沒式培養(yǎng)裝置置于室外陰涼處，避免陽光直射，不需要無菌環(huán)境，營養(yǎng)液間歇循環(huán)轉移的周期控制在30-60分鐘，每15-20天更換一次新鮮營養(yǎng)液。
[0011]所述營養(yǎng)液的配方為大量元素減半的1/2MS無糖培養(yǎng)基，石斛生長所需糖份來自光合作用。
[0012]用于上述石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法的培養(yǎng)裝置，包括培養(yǎng)箱，該培養(yǎng)箱由一塊隔板分隔成上腔和下腔，在上腔和下腔之間分別連接有連通管、虹吸管和液泵，在上腔還設有用于固定石斛苗的不銹鋼網狀苗床。
[0013]所述虹吸管的虹吸口接近上腔的腔底。
[0014]采用本發(fā)明的裝置和方法，將已生根的無菌石斛苗，轉移到一個間歇浸沒式培養(yǎng)裝置中，在自然條件下進行液體培養(yǎng)，培養(yǎng)液中不加糖，也不需通入二氧化碳，石斛生長所需的碳源來自于自身的光合作用，簡化了培養(yǎng)條件，降低了種植成本。
【附圖說明】
[0015]圖1為石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)裝置的結構示意圖。
[0016]具體實施方法
[0017]本發(fā)明石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0018]一、用氯化汞溶液對石斛種子進行消毒，然后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，室內光照下培養(yǎng)；種子萌發(fā)培養(yǎng)基為添加0.5mg/L赤霉素的MS固體培養(yǎng)基。
[0019]二、無菌苗生根后打開瓶蓋，練苗2天；
[0020]三、練苗結束后洗浄根部殘留的瓊脂，然后轉入間歇浸沒式培養(yǎng)裝置中進行培養(yǎng)。
[0021]四、在室溫下，將間歇浸沒式培養(yǎng)裝置置于室外陰涼處，避免陽光直射。在間歇浸沒式培養(yǎng)裝置下腔注入營養(yǎng)液，營養(yǎng)液的配方為大量元素減半的1/2MS無糖培養(yǎng)基，然后把石斛苗無菌扦插到裝置上腔并用不銹鋼網狀苗床5固定；開啟液泵3，營養(yǎng)液在液泵的作用的下從容器的下腔轉移到上腔，當上腔液體的液面超過虹吸管4的最高點時(虹吸管4的最高點高于石斛苗的最高點，保證營養(yǎng)液能浸沒全體石斛苗)，容器上腔的培養(yǎng)液在虹吸作用下迅速轉移到容器下面。如此，營養(yǎng)液在容器的上、下腔之間往復循環(huán)轉移，而石斛苗就會處于液體浸泡和裸露交替出現(xiàn)的條件下實現(xiàn)間歇浸沒式培養(yǎng)。營養(yǎng)液間歇循環(huán)轉移的周期控制在30-60分鐘，每15-20天更換一次新鮮營養(yǎng)液。
[0022]本實施例所用的培養(yǎng)裝置如圖1所示，包括培養(yǎng)箱1，該培養(yǎng)箱由一塊隔板分隔成上腔11和下腔12，在上腔和下腔之間分別連接有連通管2、虹吸管4和液泵3，在上腔還設有用于扦插石斛苗的不銹鋼網5。虹吸管的虹吸口接近上腔的腔底。
[0023]培養(yǎng)箱置于設有遮蔭網的溫室中，溫度為20度左右，光照為自然光。培養(yǎng)液為大量元素減半的1/2MS無糖培養(yǎng)基，間歇周期為30分鐘，營養(yǎng)液每15-20天置換一次。30天后，統(tǒng)計石解生物量，結果生長略慢于傳統(tǒng)的固體基質培養(yǎng)模式，但成本明顯降低。
[0024]本實施例中所用石斛苗來自本實驗室，所用培養(yǎng)裝置與上海泰和玻璃儀器廠定做，液體泵由河北保定泵業(yè)有限公司提供。
【主權項】
1.一種石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法，其特征在于:包括如下步驟: 一、用氯化汞溶液對石斛種子進行消毒，然后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，光照下培養(yǎng)； 二、無菌苗生根后打開瓶蓋，練苗2-3天； 三、練苗結束后洗浄根部殘留的瓊脂，然后轉入間歇浸沒式培養(yǎng)裝置中； 四、在間歇浸沒式培養(yǎng)裝置下腔注入營養(yǎng)液，然后把石斛苗無菌扦插到裝置上腔并用不銹鋼網狀苗床固定；采用間歇浸沒式培養(yǎng)模式對石斛苗進行培養(yǎng)，讓營養(yǎng)液在虹吸管和液泵的共同作用下在裝置的上腔和下腔之間間歇循環(huán)轉移。
2.根據權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟一所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基，為添加0.2-0.5mg/L赤霉素的MS固體培養(yǎng)基。
3.根據權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟四所述間歇浸沒式培養(yǎng)模式是，在室溫下，將間歇浸沒式培養(yǎng)裝置置于室外陰涼處，避免陽光直射，不需要無菌環(huán)境，營養(yǎng)液間歇循環(huán)轉移的周期控制在30-60分鐘，每15-20天更換一次新鮮營養(yǎng)液。
4.根據權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述營養(yǎng)液的配方為大量元素減半的1/2MS無糖培養(yǎng)基，石斛生長所需糖份來自光合作用。
5.用于權利要求1所述石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法的培養(yǎng)裝置，其特征在于:包括培養(yǎng)箱，該培養(yǎng)箱由一塊隔板分隔成上腔和下腔，在上腔和下腔之間分別連接有連通管、虹吸管和液泵，在上腔還設有用于固定石斛苗的不銹鋼網狀苗床。
6.根據權利要求5所述石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述虹吸管的虹吸口接近上腔的腔底。
【專利摘要】一種石斛的間歇浸沒式培養(yǎng)方法與裝置，將已生根的無菌石斛苗，轉移到間歇浸沒式培養(yǎng)裝置中，在自然條件下進行液體培養(yǎng)，培養(yǎng)液中不加糖，也不需通入二氧化碳，石斛生長所需的碳源來自于自身的光合作用。采用本發(fā)明的方法，簡化了石斛培養(yǎng)條件，降低了種植成本。
【IPC分類】A01G31-00, A01G31-02
【公開號】CN104823824
【申請?zhí)枴緾N201510225344
【發(fā)明人】王貴榮
【申請人】上海交通大學
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月4日