內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)藥殺蟲劑領(lǐng)域，具體涉及一種有效評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒 力測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 綠盲疇/wcor應(yīng)（Meyer-Dilr) 屬半翅目（Hemiptera)盲疇科 (Miridae)后麗盲蝽屬（如〇心^?5)，其寄主范圍廣泛，已報(bào)道有50余科200多種，包括棉 花、棗、葡萄、櫻桃、蘋果、茶樹等多種重要作物。近年來，由于農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，果樹 和蔬菜種植面積的大幅度增加，為綠盲蝽提供了豐富的寄主植物和適宜的越冬場所，同時(shí) 由于轉(zhuǎn)Bt基因棉的大量種植，防治棉鈴蟲的殺蟲藥劑的使用量減少，導(dǎo)致刺吸性害蟲數(shù) 量急劇上升，而長期以來一直處于次要地位的綠盲蝽已成為棉田的主要害蟲（Wuda乂， 2008;Luetal. ,2010b) 〇
[0003] 目前，噴施化學(xué)殺蟲劑仍是控制綠盲蝽種群數(shù)量的主要手段，國內(nèi)學(xué)者在殺蟲劑 的篩選和替代方面展開了很多工作，但大多數(shù)應(yīng)用瓶膜法和點(diǎn)滴法篩選出了部分有效防治 盲蝽的藥劑，此兩種方法均可評價(jià)觸殺效果。例如，根據(jù)瓶膜法和點(diǎn)滴法測到的對綠盲蝽的 毒力效果，有機(jī)磷和菊酯類殺蟲劑均高于新煙堿類殺蟲劑（Zhangda/.，2009 ;李國平等， 2009 ;門興元等，2010 ;李耀發(fā)等，2007)。因此，在實(shí)際應(yīng)用中，一般都推薦了毒死蜱、馬拉 硫磷、聯(lián)苯菊酯等觸殺作用較強(qiáng)的藥劑。但由于綠盲蝽成蟲和若蟲均有躲在棉花苞葉中刺 吸為害的習(xí)性，導(dǎo)致害蟲接觸藥劑不均一，增加了對其有效治理的難度。新煙堿類殺蟲劑作 用方式以內(nèi)吸為主，如果內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽防治效果好，盲蝽即使隱蔽在棉花苞葉內(nèi) 危害，取食后也將能被殺死。因此，亟待提出一種內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法， 來客觀正確的評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑的效果，為指導(dǎo)大田綠盲蝽的防治提供技術(shù)支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述問題，本發(fā)明提供一種內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法，可客觀 正確的評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑的殺滅效果，可用于殺盲蝽藥劑的篩選和復(fù)配，為指導(dǎo)大田綠盲 蝽的防治提供技術(shù)支持。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 設(shè)計(jì)一種內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法，包括以下步驟： (1)人工飼料制備 ①以重量份計(jì)，先取蔗糖20~55份、50%蜂蜜水15~55份、10%乙酸1~11份與 70~90份水混合后加熱煮沸，加熱過程中加入啤酒酵母粉1~11份，再倒入混勻的雞蛋 200~355份，不停的攪拌至成均勻一致的金黃色時(shí)為止；②再取卵黃200~450份、黃豆 粉10~45份、小麥胚50~150份、利馬豆粗粉100~250份與水850~950份均勻混合 后，121°C、高壓滅菌15~25min;③再取大豆卵磷脂10~45份、復(fù)合維生素10~25份、 硫酸鏈霉素〇. 06~0. 30份、頭孢類抗生素0. 03~0. 30份、37%福爾馬林0. 7~1. 5份、 丙酸0. 7~I. 5份、苯甲酸3.O~6. 5份與無菌水650~670份均勻混合；④最后將步驟 ②滅菌后的混合料取出冷卻到50°C時(shí)，分別加入步驟①和步驟③所得混合料，攪拌均勻 后即成； 上述人工飼料的營養(yǎng)構(gòu)成適合綠盲蝽的生長發(fā)育，且飼料飼養(yǎng)的穩(wěn)定性、可重復(fù)性強(qiáng)， 有利于保障綠盲蝽取食的一致性，以獲得真實(shí)可靠的毒力檢測數(shù)據(jù)； (2) 試驗(yàn)對象準(zhǔn)備： 將綠盲蝽若蟲用四季豆飼養(yǎng)至羽化成蟲階段，期間不接觸任何藥劑，作為試蟲備用； (3) 飼料混合： 以丙酮為溶劑配制一定濃度的內(nèi)吸性殺蟲劑母液，再將內(nèi)吸性殺蟲劑母液稀釋成系列 等比或等差質(zhì)量濃度梯度，分別取所得各個(gè)濃度的稀釋液0. 5~ImL均勻混入50~100g 所述人工飼料中，密封4°C低溫保存，作為試驗(yàn)組飼料備用；在相同質(zhì)量的人工飼料中加入 0.5~ImL丙酮，充分?jǐn)嚢杈鶆颍芊?°C低溫保存，作為空白對照組飼料備用； (4) 混藥飼料包的制作： 用Parafilm膜制成5cmX5cm袋體，分別灌入試驗(yàn)組和對照組飼料，縫口制成對應(yīng)的混 藥飼料包，備用； (5 )伺喂： 將各混藥飼料包均勻拉伸到原來的2倍(利于綠盲蝽口針刺吸)，放入對應(yīng)的150~ 300mL杯體中，再選取羽化IOd內(nèi)的綠盲蝽成蟲饑餓處理5h，隨機(jī)的以每杯10頭接入到所 述杯體中，杯口用紗布覆蓋，放在溫度為25~27°C、相對濕度為75~85%、光照L/D=16h/8h 的條件下，48h后觀察試驗(yàn)組和對照組試蟲死亡情況； (6)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)： 擬合藥劑毒力回歸曲線，查找或計(jì)算出LC5tl值(半數(shù)致死量）及95%置信限?？刹捎肞olo統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。
[0006] 對于上述的毒力測定方法，步驟（3)所述系列等比或等差質(zhì)量濃度梯度為5~7 個(gè)等比或等差質(zhì)量濃度梯度。
[0007] 對于上述的毒力測定方法，所述試驗(yàn)組飼料中的內(nèi)吸性殺蟲劑含量控制在殺死率 10~90%范圍內(nèi)。
[0008] 對于所述內(nèi)吸性殺蟲劑含量的控制，可先做預(yù)備試驗(yàn)：將內(nèi)吸性殺蟲劑配置一定 濃度的丙酮溶液，按照步驟（3)加入人工飼料混勻，再選取羽化IOd內(nèi)的綠盲蝽成蟲饑餓處 理5h作為試蟲，在人工飼料中接入試蟲48h后，根據(jù)死亡情況，上調(diào)或下調(diào)殺蟲劑濃度，使 殺死試蟲的比例占10~90%。
[0009] 本發(fā)明的積極有益效果： 本發(fā)明毒力測定方法克服了現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，采用穩(wěn)定、一致性好的人工飼料混藥 飼喂，并模擬綠盲蝽的自然取食狀態(tài)，最終達(dá)到客觀正確的評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑的殺滅效果 的目的，有利于篩選出對綠盲蝽殺滅高效的殺蟲劑，為指導(dǎo)大田綠盲蝽的防治提供技術(shù)支 持。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明技術(shù)方案。以下各實(shí)施例中所用原料，如 無特別說明，則均為市售。
[0011] 實(shí)施例1 一種內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法，包括以下步驟： (1) 人工飼料制備： 原料：混勻雞蛋(蛋清、蛋黃混合)300份、蔗糖40份、啤酒酵母6份、50%蜂蜜水30份、 卵黃350份、小麥胚100份、利馬豆粗粉200份、大豆粉30份、大豆卵磷脂30份、復(fù)合維生 素20份、水1640份、硫酸鏈霉素0. 15份、頭孢類抗生素0. 15份、10%乙酸6份、37%福爾馬 林1. 2份、丙酸1. 2份、苯甲酸5份，所述人工飼料的制備方法包括以下步驟：1)先將蔗糖、 蜂蜜水、10%乙酸與80份水混合后加熱煮沸，加熱過程中加入啤酒酵母粉，再倒入混勻的雞 蛋，不停的攪拌，至混合料成金黃色且均勻一致時(shí)為止；2)將卵黃、黃豆粉、小麥胚、利馬豆 粗粉與水900份均勻混合后，121°C、高壓滅菌20min;3)再將大豆卵磷脂、復(fù)合維生素、抗 生素、其余防腐劑與無菌水660份均勻混合；4)將步驟2)滅菌后的混合料取出冷卻到 50°C時(shí)，分別加入步驟1)和步驟3)所得混合料，攪拌均勻后即成； (2) 試驗(yàn)對象準(zhǔn)備： 將綠盲蝽若蟲用四季豆飼養(yǎng)至羽化成蟲階段，期間不接觸任何藥劑，作為試蟲備用； (3) 飼料混合： 以丙酮為溶劑配制一定濃度的殺蟲劑母液，再將殺蟲劑母液稀釋成系列等比或等差質(zhì) 量濃度梯度(見表1)，分別取所得各個(gè)濃度的稀釋液ImL均勻混入100g所述人工飼料中，密 封4°C低溫保存，作為試驗(yàn)組飼料備用；在相同質(zhì)量的人工飼料中加入ImL丙酮，充分?jǐn)嚢?均勻，密封4°C低溫保存，作為空白對照組飼料備用； 表1殺蟲劑種類及質(zhì)量濃度梯度設(shè)置
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 人工飼料制備： ①以重量份計(jì)，先取蔗糖20~55份、50%蜂蜜水15~55份、10%乙酸1~11份與 70~90份水混合后加熱煮沸，加熱過程中加入啤酒酵母粉1~11份，再倒入混勻的雞蛋 200~355份，不停的攪拌至成均勻一致的金黃色時(shí)為止；②再取卵黃200~450份、黃豆 粉10~45份、小麥胚50~150份、利馬豆粗粉100~250份與水850~950份均勻混合 后，12Γ C、高壓滅菌15~25min ;③再取大豆卵磷脂10~45份、復(fù)合維生素10~25份、 硫酸鏈霉素〇. 06~0. 30份、頭孢類抗生素0. 03~0. 30份、37%福爾馬林0. 7~1. 5份、 丙酸0. 7~1. 5份、苯甲酸3. 0~6. 5份與無菌水650~670份均勻混合；④最后將步驟 ②滅菌后的混合料取出冷卻到50° C時(shí)，分別加入步驟①和步驟③所得混合料，攪拌均勻 后即成； (2) 試驗(yàn)對象準(zhǔn)備： 將綠盲蝽若蟲用四季豆飼養(yǎng)至羽化成蟲階段，期間不接觸任何藥劑，作為試蟲備用； (3) 飼料混合： 以丙酮為溶劑配制一定濃度的內(nèi)吸性殺蟲劑母液，再將內(nèi)吸性殺蟲劑母液稀釋成系列 等比或等差質(zhì)量濃度梯度，分別取所得各個(gè)濃度的稀釋液0. 5~1.0 mL均勻混入50~100g 所述人工飼料中，密封4°C低溫保存，作為試驗(yàn)組飼料備用；在相同質(zhì)量的人工飼料中加入 0.5~ImL丙酮，充分?jǐn)嚢杈鶆颍芊?°C低溫保存，作為空白對照組飼料備用； (4) 混藥飼料包的制作： 用Parafilm膜制成5cmX 5cm袋體，分別灌入試驗(yàn)組和對照組飼料，縫口制成對應(yīng)的混 藥飼料包，備用； (5 )伺喂： 將各混藥飼料包均勻拉伸到原來的2倍，放入對應(yīng)的150~300mL杯體中，再選取羽化 IOd內(nèi)的綠盲蝽成蟲饑餓處理5h，隨機(jī)的以每杯10頭接入到所述杯體中，杯口用紗布覆蓋， 放在溫度為25~27°C、相對濕度為75~85%、光照L/D=16h/8h的條件下，48h后觀察試驗(yàn) 組和對照組試蟲死亡情況； (6)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)： 擬合藥劑毒力回歸曲線，查找或計(jì)算出LC5tl值及95%置信限。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的毒力測定方法，其特征在于：步驟（3)所述系列等比或等差 質(zhì)量濃度梯度為5~7個(gè)等比或等差質(zhì)量濃度梯度。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的毒力測定方法，其特征在于：所述試驗(yàn)組飼料中的內(nèi)吸性殺 蟲劑含量控制在殺死率10~90%范圍內(nèi)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的毒力測定方法，其特征在于：所述內(nèi)吸性殺蟲劑含量的控制 方法為：將內(nèi)吸性殺蟲劑配置一定濃度丙酮溶液，按照步驟（3)加入人工飼料混勻，再選取 羽化IOd內(nèi)的綠盲蝽成蟲饑餓處理5h作為試蟲，在人工飼料中接入試蟲48h后，根據(jù)死亡 情況，上調(diào)或下調(diào)殺蟲劑濃度，使殺死試蟲的比例占10~90%。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種有效評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑對綠盲蝽的毒力測定方法，包括以下步驟:人工飼料制備、試驗(yàn)對象準(zhǔn)備、飼料混合、混藥飼料包的制作、飼喂、試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)等，本發(fā)明毒力測定方法克服了現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，采用穩(wěn)定、一致性好的人工飼料混藥飼喂，并模擬綠盲蝽的自然取食狀態(tài)，最終達(dá)到客觀正確的評價(jià)內(nèi)吸性殺蟲劑的殺滅效果的目的，有利于篩選出對綠盲蝽殺滅高效的殺蟲劑，為指導(dǎo)大田綠盲蝽的防治提供技術(shù)支持。
【IPC分類】A23K1-18, A01K67-033, A23K1-16, A23K1-00, G06F17-18, A23K1-14, A23K1-17
【公開號】CN104823924
【申請?zhí)枴緾N201510231533
【發(fā)明人】李國平, 金銀利, 田彩紅, 黃建榮, 封洪強(qiáng), 邱峰
【申請人】河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月8日