一種石斛培育新方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及石斛的培養(yǎng)方法，特別是涉及一種石斛培育新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 石斛，又名萬丈須、吊蘭、林蘭、金釵華等。莖直立，肉質(zhì)狀肥厚，稍扁的圓柱形，長 10-60厘米，粗達1.3厘米。藥用植物，性味甘淡微咸，寒，歸胃、腎，肺經(jīng)。益胃生津，滋陰清 熱。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明。石斛花姿優(yōu)雅，玲瓏可愛，花 色鮮艷，氣味芳香，被喻為"四大觀賞洋花"之一。石斛喜在溫暖、潮濕、半陰半陽的環(huán)境中 生長，以年降雨量1000毫米以上、空氣濕度大于80%、1月平均氣溫高于8°C的亞熱帶深山 老林中生長為佳，對土肥要求不甚嚴格，野生多在疏松且厚的樹皮或樹干上生長，有的也生 長于石縫中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提供了一種石斛培育新方法，包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖段培養(yǎng)。
[0004] 一種石斛培育新方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖 段培養(yǎng)，每種培養(yǎng)的方法如下：
[0005] (1)胚培養(yǎng)：取人工授粉的石斛果實，用體積分數(shù)為70-75%的酒精表面消毒 25-30s，再用質(zhì)量分數(shù)為0. 1%的升采消毒8-10min，無菌水沖洗4-6次后在無菌條件下把 果實切成小方塊，之后接種到胚體培養(yǎng)基中，每瓶3-5塊；
[0006] (2)莖尖培養(yǎng)：取石斛當年萌發(fā)的嫩芽尖，用質(zhì)量分數(shù)為10-12%的次氯酸鈉消毒 10-15min，之后用無菌水沖洗4-6次，之后接入莖尖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-35d，待長出白色顆 粒狀愈傷組織后再培養(yǎng)18-20d，形成不定芽后，將愈傷組織和不定芽切割開，在上述培養(yǎng) 基中繼續(xù)繼代培養(yǎng)，之后將不定芽移到生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，30-35d發(fā)育成完整植 株；
[0007] (3)幼嫩莖段培養(yǎng)：剪取石斛嫩莖段，滅菌后切成2-3cm的切段，每段必須有一個 莖節(jié)，將其接種到芽增值培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-50d后長出新芽，將新芽切下，接入上述培養(yǎng) 基，培養(yǎng)30-35d生成叢生芽，切割后轉(zhuǎn)入無激素的MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，40-50d后可 發(fā)育成完整株。
[0008] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中胚體培養(yǎng)基為N6培養(yǎng)基，附加0. 2 = 0. 5mg/L NAA和質(zhì) 量分數(shù)為2-5 %的蔗糖。
[0009] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中培養(yǎng)溫度控制在25-28度，光照強度為1600-20001X。
[0010] 優(yōu)選的，所述步驟（2)中莖尖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 2-0. 3mg/L的NAA 和 0· 5-0. 7mg/L 的 6-BA。
[0011] 優(yōu)選的，所述步驟（3)中芽增值培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 1-0. 5mg/L的NAA 和 0· 5-2mg/L 的 6-BA。
[0012] 優(yōu)選的，所述步驟（3)中芽增值培養(yǎng)基中需要加入5%的生長調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑 為 0· lmg/L 的 2, 4-D 和 lmg/L 的 ZT 組成。
[0013] 有益效果：本發(fā)明提供了一種石斛培育新方法，包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖段 培養(yǎng)，本發(fā)明屬于石斛的組織塊繁殖技術(shù)，通過石斛的胚體、芽幼嫩莖段進行大規(guī)模培養(yǎng)， 通過培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)基的優(yōu)化，可以實現(xiàn)石斛的工業(yè)化生產(chǎn)，可以有效的推動我國石斛 植物資源的開發(fā)和利用，同時將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益。
【具體實施方式】
[0014] 為使本發(fā)明實現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合
【具體實施方式】，進一步闡述本發(fā)明。
[0015] 實施例1 :
[0016] -種石斛培育新方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖 段培養(yǎng)，每種培養(yǎng)的方法如下：
[0017] (1)胚培養(yǎng)：取人工授粉的石斛果實，用體積分數(shù)為70%的酒精表面消毒25s，再 用質(zhì)量分數(shù)為〇. 1 %的升汞消毒8min，無菌水沖洗4次后在無菌條件下把果實切成小方塊， 之后接種到胚體培養(yǎng)基中，每瓶3塊；
[0018] (2)莖尖培養(yǎng)：取石斛當年萌發(fā)的嫩芽尖，用質(zhì)量分數(shù)為10%的次氯酸鈉消毒 lOmin，之后用無菌水沖洗4次，之后接入莖尖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d，待長出白色顆粒狀愈傷組 織后再培養(yǎng)18d，形成不定芽后，將愈傷組織和不定芽切割開，在上述培養(yǎng)基中繼續(xù)繼代培 養(yǎng)，之后將不定芽移到生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，30d發(fā)育成完整植株；
[0019] (3)幼嫩莖段培養(yǎng)：剪取石斛嫩莖段，滅菌后切成2cm的切段，每段必須有一個莖 節(jié)，將其接種到芽增值培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30d后長出新芽，將新芽切下，接入上述培養(yǎng)基，培養(yǎng) 30d生成叢生芽，切割后轉(zhuǎn)入無激素的MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，40d后可發(fā)育成完整株。
[0020] 其中，所述步驟（1)中胚體培養(yǎng)基為N6培養(yǎng)基，附加0. 2mg/L NAA和質(zhì)量分數(shù)為 2%的蔗糖，所述步驟（1)中培養(yǎng)溫度控制在25度，光照強度為16001x，所述步驟（2)中莖 尖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 2mg/L的NAA和0. 5mg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽增 值培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. lmg/L的NAA和0. 5-2mg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽 增值培養(yǎng)基中需要加入5 %的生長調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑為0. lmg/L的2, 4-D和lmg/L的ZT 組成。
[0021] 實施例2:
[0022] 一種石斛培育新方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖 段培養(yǎng)，每種培養(yǎng)的方法如下：
[0023] (1)胚培養(yǎng)：取人工授粉的石斛果實，用體積分數(shù)為72%的酒精表面消毒28s，再 用質(zhì)量分數(shù)為〇. 1 %的升汞消毒9min，無菌水沖洗5次后在無菌條件下把果實切成小方塊， 之后接種到胚體培養(yǎng)基中，每瓶4塊；
[0024] (2)莖尖培養(yǎng)：取石斛當年萌發(fā)的嫩芽尖，用質(zhì)量分數(shù)為11 %的次氯酸鈉消毒 12min，之后用無菌水沖5次，之后接入莖尖培養(yǎng)基中培養(yǎng)32d，待長出白色顆粒狀愈傷組織 后再培養(yǎng)19d，形成不定芽后，將愈傷組織和不定芽切割開，在上述培養(yǎng)基中繼續(xù)繼代培養(yǎng)， 之后將不定芽移到生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，32d發(fā)育成完整植株；
[0025] (3)幼嫩莖段培養(yǎng)：剪取石斛嫩莖段，滅菌后切成2cm的切段，每段必須有一個莖 節(jié)，將其接種到芽增值培養(yǎng)基中，培養(yǎng)40d后長出新芽，將新芽切下，接入上述培養(yǎng)基，培養(yǎng) 32d生成叢生芽，切割后轉(zhuǎn)入無激素的MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，45d后可發(fā)育成完整株。
[0026] 其中，所述步驟（1)中胚體培養(yǎng)基為N6培養(yǎng)基，附加0. 3mg/L NAA和質(zhì)量分數(shù)為 3%的蔗糖，所述步驟（1)中培養(yǎng)溫度控制在27度，光照強度為18001x，所述步驟（2)中莖 尖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 2mg/L的NAA和0. 6mg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽增 值培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 3mg/L的NAA和lmg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽增值 培養(yǎng)基中需要加入5%的生長調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑為0. lmg/L的2, 4-D和lmg/L的ZT組成。
[0027] 實施例3 :
[0028] 一種石斛培育新方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖 段培養(yǎng)，每種培養(yǎng)的方法如下：
[0029] (1)胚培養(yǎng)：取人工授粉的石斛果實，用體積分數(shù)為75%的酒精表面消毒30s，再 用質(zhì)量分數(shù)為〇. 1 %的升汞消毒l〇min，無菌水沖洗6次后在無菌條件下把果實切成小方 塊，之后接種到胚體培養(yǎng)基中，每瓶5塊；
[0030] (2)莖尖培養(yǎng)：取石斛當年萌發(fā)的嫩芽尖，用質(zhì)量分數(shù)為12%的次氯酸鈉消毒 15min，之后用無菌水沖洗6次，之后接入莖尖培養(yǎng)基中培養(yǎng)35d，待長出白色顆粒狀愈傷組 織后再培養(yǎng)20d，形成不定芽后，將愈傷組織和不定芽切割開，在上述培養(yǎng)基中繼續(xù)繼代培 養(yǎng)，之后將不定芽移到生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，35d發(fā)育成完整植株；
[0031] (3)幼嫩莖段培養(yǎng)：剪取石斛嫩莖段，滅菌后切成3cm的切段，每段必須有一個莖 節(jié)，將其接種到芽增值培養(yǎng)基中，培養(yǎng)50d后長出新芽，將新芽切下，接入上述培養(yǎng)基，培養(yǎng) 35d生成叢生芽，切割后轉(zhuǎn)入無激素的MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，50d后可發(fā)育成完整株。
[0032] 其中，所述步驟（1)中胚體培養(yǎng)基為N6培養(yǎng)基，附加0. 5mg/L NAA和質(zhì)量分數(shù)為 5%的蔗糖，所述步驟（1)中培養(yǎng)溫度控制在28度，光照強度為20001x，所述步驟（2)中莖 尖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 3mg/L的NAA和0. 7mg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽增 值培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，其中加入0. 5mg/L的NAA和2mg/L的6-BA，所述步驟（3)中芽增值 培養(yǎng)基中需要加入5%的生長調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑為0. lmg/L的2, 4-D和lmg/L的ZT組成。
[0033]
【主權(quán)項】
1. 一種石斛培育新方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖段 培養(yǎng)，每種培養(yǎng)的方法如下： (1) 胚培養(yǎng)：取人工授粉的石斛果實，用體積分數(shù)為70-75%的酒精表面消毒25-30S，再 用質(zhì)量分數(shù)為〇. 1%的升汞消毒8-10min，無菌水沖洗4-6次后在無菌條件下把果實切成小 方塊，之后接種到胚體培養(yǎng)基中，每瓶3-5塊； (2) 莖尖培養(yǎng)：取石斛當年萌發(fā)的嫩芽尖，用質(zhì)量分數(shù)為10-12%的次氯酸鈉消毒 10-15min，之后用無菌水沖洗4-6次，之后接入莖尖培養(yǎng)基中培養(yǎng)30-35d，待長出白色顆粒 狀愈傷組織后再培養(yǎng)18-20d，形成不定芽后，將愈傷組織和不定芽切割開，在上述培養(yǎng)基中 繼續(xù)繼代培養(yǎng)，之后將不定芽移到生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，30-35d發(fā)育成完整植株； (3) 幼嫩莖段培養(yǎng)：剪取石斛嫩莖段，滅菌后切成2-3cm的切段，每段必須有一個莖節(jié)， 將其接種到芽增值培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-50d后長出新芽，將新芽切下，接入上述培養(yǎng)基，培養(yǎng) 30-35d生成叢生芽，切割后轉(zhuǎn)入無激素的MS培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，40-50d后可發(fā)育成完 整株。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛培育新方法，其特征在于，所述步驟（1)中胚體培養(yǎng)基為 N6培養(yǎng)基，附加0. 2-0. 5mg/L NAA和質(zhì)量分數(shù)為2-5%的蔗糖。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛培育新方法，其特征在于，所述步驟（1)中培養(yǎng)溫度控 制在25-28度，光照強度為1600-20001x。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛培育新方法，其特征在于，所述步驟（2)中莖尖培養(yǎng)基 為MS培養(yǎng)基，其中加入0? 2-0. 3mg/L的NAA和0? 5-0. 7mg/L的6-BA。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛培育新方法，其特征在于，所述步驟（3)中芽增值培養(yǎng) 基為MS培養(yǎng)基，其中加入0? 1-0. 5mg/L的NAA和0? 5-2mg/L的6-BA。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛培育新方法，其特征在于，所述步驟（3)中芽增值培養(yǎng) 基中需要加入5%的生長調(diào)節(jié)劑，所述調(diào)節(jié)劑為0. lmg/L的2, 4-D和lmg/L的ZT組成。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種石斛培育新方法，包括胚培養(yǎng)、莖尖培養(yǎng)和幼嫩莖段培養(yǎng)，本發(fā)明屬于石斛的組織塊繁殖技術(shù)，通過石斛的胚體、芽幼嫩莖段進行大規(guī)模培養(yǎng)，通過培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)基的優(yōu)化，可以實現(xiàn)石斛的工業(yè)化生產(chǎn)，可以有效的推動我國石斛植物資源的開發(fā)和利用，同時將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104855282
【申請?zhí)枴緾N201510169337
【發(fā)明人】吳功利
【申請人】霍山縣眾康堂中藥材開發(fā)有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年4月10日