雞冠滇丁香的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物的組培快繁方法，尤其是一種雞冠滇丁香的組培快繁方法， 屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雞冠漬丁香（Luculiayunnanensis)系茜草科（Rubiaceae)漬丁香屬（Luculia)， 以小枝頂端、萼管及果密被柔毛而顯著區(qū)別于本屬其它的無(wú)毛種類。此外，雞冠滇丁香為滇 丁香屬中唯一的我國(guó)特有植物，主要分布于云南的怒江、臨滄和思茅等地。該植物葉片翠 綠、株型優(yōu)美，枝頂簇生傘房狀聚傘花序，氣味芬芳且花期較長(zhǎng)，具有極高的觀賞價(jià)值和廣 闊的應(yīng)用前景，為極具云南特色的珍貴野生花丼資源，然而雞冠滇丁香分布區(qū)域十分有限， 加之分布地遭到人為干擾和破壞嚴(yán)重，其野生資源現(xiàn)已稀少。因此，亟需對(duì)雞冠滇丁香的繁 殖技術(shù)進(jìn)行研宄總結(jié)，但目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)相關(guān)的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為實(shí)現(xiàn)雞冠滇丁香的快速繁殖，本發(fā)明提供一種雞冠滇丁香的組培快繁方法，該 方法取材容易、繁殖系數(shù)高，容易獲得大量無(wú)病雞冠滇丁香植株。
[0004] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種雞冠滇丁香的組培快繁方法，其特征在于經(jīng) 過(guò)下列步驟：
[0005] A、將消毒滅菌的種子接入下列初代培養(yǎng)基中：
[0006] MS
[0007] 鹿糖 25 ~35g/L，
[0008]在溫度為20~30°C、光照時(shí)間為8~12h/d、光照強(qiáng)度為35~45ymol/m2 ?s的 條件下進(jìn)行培養(yǎng)直至小苗高2~3cm;在此條件下培育至10天左右種子開(kāi)始萌發(fā)，至50~ 60天小苗即可長(zhǎng)高2~3cm;
[0009] B、將步驟A培養(yǎng)出的小苗剪下，切成帶腋芽的莖段接種于下列增殖培養(yǎng)基中：
[0010] MS
[0011] 6-BA 0.5~1.5mg/L NAA 0.05~(),15mg/L 鹿糖 25~35g/L，
[0012] 在溫度為20~30°C、光照時(shí)間為8~12h/d、光照強(qiáng)度為35~45ymol/m2 ?s的 條件下進(jìn)行增殖培養(yǎng)30~40天，再轉(zhuǎn)入新的與上述增殖培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中，按相同培 養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)一次，得叢生芽；
[0013] C、將步驟B所得叢生芽剪下，接種于下列生根培養(yǎng)基中：
[0014] 1/4MS
[0015] I BA 0?4 ~1. 2mg/L
[0016]鹿糖15~25g/L，
[0017] 在溫度為20~30°C、光照時(shí)間為8~12h/d、光照強(qiáng)度為35~45ymo/m2?s的 條件下進(jìn)行培養(yǎng)15~25天，得生根苗；
[0018]D、將步驟C所得生根苗移至濕度為70~85%的條件下進(jìn)行煉苗3~5天，取出生 根苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)800~900倍甲基托布津消毒的營(yíng)養(yǎng)袋中，于濕度為70~ 85%的同樣條件下培養(yǎng)，1周后逐步降低濕度，即得雞冠滇丁香的移栽苗。
[0019] 所述步驟A的消毒滅菌的種子是將野生的雞冠滇丁香蒴果用水洗凈后，在無(wú)菌條 件下用體積濃度為75%酒精浸泡30s，迅速用無(wú)菌水沖洗3~5次，再用質(zhì)量濃度為0. 1~ 1. 〇%的升汞溶液浸泡10~20分鐘，以無(wú)菌水沖洗5~8次，然后用無(wú)菌濾紙吸干表面水 分，用解剖刀切開(kāi)蒴果取種子。
[0020] 所述步驟D中1周后逐步降低濕度是1周后分多次逐步增加光照強(qiáng)度用以降低濕 度，到1個(gè)月時(shí)完全裸露于陽(yáng)光下。
[0021] 本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果：本發(fā)明以雞冠滇丁香的種子為擴(kuò)繁材料，不僅在短 期內(nèi)能用較少的材料繁殖大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，具有用材少、取材容易、周期短、速度快、繁殖系數(shù) 高等特點(diǎn)，而且不受季節(jié)和地區(qū)的限制，重復(fù)性好。將所得雞冠滇丁香的移栽苗移栽后成活 率達(dá)90%以上，完全能夠滿足市場(chǎng)對(duì)雞冠滇丁香的需求量。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。
[0023] 實(shí)施例1
[0024]A、將野生的雞冠滇丁香蒴果用水洗凈后，移至超凈工作臺(tái)中，在無(wú)菌條件下用體 積濃度為75%酒精浸泡30s，迅速用無(wú)菌水沖洗3次，再用質(zhì)量濃度為0. 1 %的升汞溶液浸 泡20分鐘，以無(wú)菌水沖洗5次，然后用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，用解剖刀切開(kāi)蒴果取種子， 再將種子接入下列初代培養(yǎng)基中：
[0025]MS
[0026] 蔗糖 30g/L，
[0027] 在溫度為25°C、光照時(shí)間為12h/d、光照強(qiáng)度為40ymol/m2 *s的條件下進(jìn)行培養(yǎng)； 在此條件下培育至10天左右種子開(kāi)始萌發(fā)，至50天小苗平均高2. 25cm;
[0028]B、將步驟A培養(yǎng)出的小苗剪下，切成帶腋芽的莖段接種于下列增殖培養(yǎng)基中：
[0029] MS 6-BA lnVL NAA 0.1 mg/L 鹿糖 25g/L，
[0030] 在溫度為25°C、光照時(shí)間為12h/d、光照強(qiáng)度為40ymol/m2 ?s的條件下進(jìn)行增 殖培養(yǎng)30天，再轉(zhuǎn)入新的與上述增殖培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中，按相同培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)一 次，得叢生芽；平均每個(gè)外植體得叢生芽4. 3個(gè)，芽長(zhǎng)3. 07cm;
[0031] C、將步驟B所得叢生芽剪下，接種于下列生根培養(yǎng)基中：
[0032] 1/4MS
[0033] IBA 0. 4mg/L
[0034]蔗糖 15g/L，
[0035] 在溫度為25°C、光照時(shí)間為12h/d、光照強(qiáng)度為40ymo/m2 ?s的條件下進(jìn)行培養(yǎng) 20天，得生根苗；20天生根率達(dá)93. 33 %，平均生根7. 8條，根長(zhǎng)0.89cm;
[0036]D、將步驟C所得生根苗移至濕度為75%的煉苗棚中，揭蓋煉苗3天，取出生根苗， 洗去根部培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)800倍甲基托布津消毒的營(yíng)養(yǎng)袋中，于濕度為75%的同樣條件 下培養(yǎng)，1周后分多次除去遮陰物逐步增加光照強(qiáng)度用以降低濕度，到1個(gè)月時(shí)完全去除遮 陰物裸露于陽(yáng)光下，即得雞冠滇丁香的移栽苗。
[0037] 實(shí)施例2
[0038] A、將野生的雞冠滇丁香蒴果用水洗凈后，移至超凈工作臺(tái)中，在無(wú)菌條件下用體 積濃度為75%酒精浸泡30s，迅速用無(wú)菌水沖洗5次，再用質(zhì)量濃度為1. 0%的升汞溶液浸 泡10分鐘，以無(wú)菌水沖洗8次，然后用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，用解剖刀切開(kāi)蒴果取種子， 再將種子接入下列初代培養(yǎng)基中：
[0039]MS
[0040]蔗糖25g/L，
[0041] 在溫度為20°C、光照時(shí)間為8h/d、光照強(qiáng)度為35ymol/m2 ?s的條件下進(jìn)行培養(yǎng)； 在此條件下培育至10天左右種子開(kāi)始萌發(fā)，至60天小苗長(zhǎng)高至2. 96cm;
[0042]B、將步驟A培養(yǎng)出的小苗剪下，切成帶腋芽的莖段接種于下列增殖培養(yǎng)基中：
[0043] MS 6-BA 0.5mg/L NAA 0.05mg/L 蔗糖 30g/L，
[0044]在溫度為20°C、光照時(shí)間為8h/d、光照強(qiáng)度為35ymol/m2 ?s的條件下進(jìn)行增殖培 養(yǎng)35天，再轉(zhuǎn)入新的與上述增殖培養(yǎng)基相同的培養(yǎng)基中，按相同培養(yǎng)條件繼續(xù)培養(yǎng)一次， 得叢生芽；平均每個(gè)外植體得叢生芽3. 6個(gè)，芽長(zhǎng)3. 25cm;
[0045] C、將步驟B所得叢生芽剪下，接種于下列生根培養(yǎng)基中：
[0046] 1/4MS
[0047] IBA 0. 8mg/L
[0048]蔗糖 25g/L，