氣濾器a'連接，第二薄膜空氣濾器a'的另一端一般采用硅膠管或與其他規(guī)格管線和連接部件連接到空氣壓縮機的分氣口上。
[0023]利用上述裝置培養(yǎng)培養(yǎng)人參不定根的方法，包括如下步驟:
[0024]—、將人參不定根以Icm左右的段的形式，繼代在含有3%蔗糖、0.3% IBA,0.3%gelrite、5.8-6.0pH 值的 mms 培養(yǎng)基中。
[0025]二、將繼代18?23天，處于生長旺盛期的人參不定根直接接種于培養(yǎng)基裝量為反應器總體積的65-75%的反應器中進行暗培養(yǎng)(光照周期為0/24h)。定期取材測定不定根鮮重和干重、生長量，確定其生長周期以及最佳收獲時間。
[0026]1、確定最適宜人參不定根生長的溫濕度及光照度。
[0027]將固體培養(yǎng)基里繼代培養(yǎng)的人參不定根，在其生長階段，置于溫度梯度為21°C、25°C、29°C的培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)，最終確定其最適宜溫度為25±1°C，再取生長階段的不定根置于濕度梯度為30 %、60 %、90 %的培養(yǎng)環(huán)境下進行培養(yǎng)，最終確定最適宜濕度為60-70%。
[0028]2、確定小型生物反應器培養(yǎng)人參不定根的培養(yǎng)基中的蔗糖濃度及IBA濃度。
[0029]將在最適宜環(huán)境下培養(yǎng)的處于生長旺盛期的人參不定根取出，置于有液體培養(yǎng)基的三角瓶中振蕩培養(yǎng)，進行蔗糖濃度的梯度試驗。培養(yǎng)基以mms為基礎(chǔ)，IBA含0.33%,蔗糖梯度為2%，3%，5%，7%。最終確定最適宜的蔗糖濃度為5 %。同樣設(shè)置IBA梯度為0.3%，
0.5%，0.7%。最終確定最適宜IBA濃度為0.5%。
[0030]3、確定小型生物反應器培養(yǎng)人參不定根的生長周期。
[0031]將I中生長旺盛期的人參不定根置于有以2為標準的液體培養(yǎng)基的5L生物反應器中培養(yǎng)。進行確定最佳生長周期的實驗。分別于4周、5周、6周、7周、8周、9周收獲，繪制生長曲線。經(jīng)重復試驗確定最佳生長周期為6-7周。
[0032]4、比較原始反應器與新型反應器的優(yōu)缺點。
[0033](I)原始生物反應器上口處只是橡膠塞蓋在上面，瓶口光滑，很難保證從包裝，高溫濕熱滅菌，轉(zhuǎn)入超凈臺，接種與培養(yǎng)整個過程中的密閉無菌狀態(tài)，它的密閉只依附于接種后，用封口膜，保鮮膜，或者膠帶等的捆綁式密封，安全系數(shù)較差，操作困難。而且在培養(yǎng)過程中，有很多時候，會因為罐體內(nèi)氣壓過大，導致膠塞脫落，整個培養(yǎng)就此終止。本發(fā)明提供的新型反應器螺紋蓋的鋁材螺紋與硅膠塞的完美融合，徹底克服了上述原始反應器的缺點，是反應器培養(yǎng)人參不定根技術(shù)上的一次進步，也是人參不定根邁向中式和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)支持與鋪墊。
[0034](2)原始生物反應器底部和罐體是一體的，并且內(nèi)徑較大，使得人參不定根在培養(yǎng)期間因為氣體的作用，會不斷撞擊下面的玻璃砂氣體分布器，對培養(yǎng)材料產(chǎn)生過大的剪切力，抑制人參不定根的生長和其中的藥用活性物質(zhì)的累積。而且因為罐體較大，最底部連接硅膠管處細小，在清洗、滅菌和接種的過程中容易造成破碎或折斷，另外，玻璃砂氣體分布器由于氣孔細密，比較容易堵塞，其位置又處于罐體的最底部，難于處理及清洗，堵塞嚴重時，整個罐體就會失去使用價值。單一方面的破損，而整個反應器被淘汰，無疑是一種很大的浪費。而且整體的反應氣不容易清洗。本發(fā)明提供的新型反應器的設(shè)計就一一戰(zhàn)勝了上述缺點。水紋口的連接方式方便、緊密、可調(diào)、易清洗、節(jié)約成本、易于保管。
[0035](3)綜合(I)和(2)，本發(fā)明提供的新型反應器的設(shè)計具有操作簡便、氣密性好、節(jié)約時間、節(jié)約成本、可調(diào)換、易清洗、成活率高、產(chǎn)品品質(zhì)好、產(chǎn)量高、周期短等諸多優(yōu)點，很好地促進了人參不定根的生長和其中的藥用活性物質(zhì)的累積，為擴大生產(chǎn)提供技術(shù)支持和保障。
【主權(quán)項】
1.一種高效培養(yǎng)人參不定根的反應器，其特征在于所述反應器由第一薄膜空氣濾器、第二薄膜空氣濾器、可換膜針筒式過濾器、玻璃三通、螺紋瓶蓋、反應器罐體、水紋接口、氣源體和雙層玻璃砂氣體分布器構(gòu)成，第一薄膜空氣濾器和可換膜針筒式過濾器通過硅膠管連接在玻璃三通上，玻璃三通的另一端插入到螺紋瓶蓋以下，反應器罐體的瓶口與螺紋瓶蓋以螺紋旋口的方式進行連接，反應器罐體與氣源體以水紋接口外部卡扣方式進行連接，氣源體的末端口通過硅膠管與第二薄膜空氣濾器連接，氣源體內(nèi)自上而下平行設(shè)置雙層玻璃砂氣體分布器。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效培養(yǎng)人參不定根的反應器，其特征在于所述雙層玻璃砂氣體分布器采用孔徑0.3?0.5 μπι玻砂壓制而成。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效培養(yǎng)人參不定根的反應器，其特征在于所述螺紋瓶蓋由螺紋蓋和硅膠塞構(gòu)成，硅膠塞固定在螺紋蓋的里面。4.一種利用權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的高效培養(yǎng)人參不定根的反應器培養(yǎng)人參不定根的方法，其特征在于所述方法步驟如下: (1)將人參不定根以0.8-1.5cm段的形式，繼代在含有20-50g/L蔗糖、0.1-0.5mg/LIBA、3-5g/Lgelrite、5.8-6.0pH值的mms培養(yǎng)基中進行種苗的固體培養(yǎng)基暗培養(yǎng)； (2)將繼代18?23天，處于生長旺盛期的人參不定根以l_5g/L的接種量直接接種于培養(yǎng)基裝量為反應器總體積的65-75%的反應器中進行氣升式液體培養(yǎng)基發(fā)酵暗培養(yǎng)，控制溫度為21-29°C，濕度為30-90%，生長周期為6_7周。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用高效培養(yǎng)人參不定根的反應器培養(yǎng)人參不定根的方法，其特征在于所述步驟(2)中，培養(yǎng)基為:以mms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入20-50g/L鹿糖，0.3-0.7mg/LIBA、pH 值 5.8-6.0。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用高效培養(yǎng)人參不定根的反應器培養(yǎng)人參不定根的方法，其特征在于所述步驟(2)中，培養(yǎng)溫度為25 ± I °C。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用高效培養(yǎng)人參不定根的反應器培養(yǎng)人參不定根的方法，其特征在于所述步驟(2)中，濕度為60-70%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效培養(yǎng)人參不定根的反應器，所述反應器包括第一薄膜空氣濾器、第二薄膜空氣濾器、可換膜針筒式過濾器、玻璃三通、螺紋瓶蓋、反應器罐體、水紋接口、氣源體、雙層玻璃砂氣體分布器。第一薄膜空氣濾器和可換膜針筒式過濾器通過硅膠管連接在玻璃三通上，玻璃三通的另一端插入到螺紋瓶蓋以下，反應器罐體的瓶口與螺紋瓶蓋以螺紋旋口的方式進行連接，反應器罐體與氣源體以水紋接口外部卡扣方式進行連接，氣源體的末端口通過硅膠管與第二薄膜空氣濾器連接，氣源體內(nèi)自上而下平行設(shè)置雙層玻璃砂氣體分布器。該反應器具有操作簡便、氣密性好、節(jié)約時間、節(jié)約成本、可調(diào)換、易清洗、成活率高、產(chǎn)品品質(zhì)好、產(chǎn)量高、周期短等諸多優(yōu)點。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN104996303
【申請?zhí)枴緾N201510515215
【發(fā)明人】劉云成, 張 杰, 常園園, 孫潤生, 宋海艷, 畢首超, 李艷坤
【申請人】固元本草漢方生物科技股份有限公司
【公開日】2015年10月28日
【申請日】2015年8月20日