一種殺蟲活性物質(zhì)及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物防治植物害蟲領域，尤其涉及一種殺蟲活性物質(zhì)，具體地，涉及一 種從長枝木霉菌的次級代謝產(chǎn)物中制備得到的殺蟲活性物質(zhì)，以及這種殺蟲活性物質(zhì)的制 備方法及其在生物防治植物害蟲方面的應用，尤其是在煙粉虱和草莓紅蜘蛛防治方面的應 用。
【背景技術】
[0002] 煙粉虱[Bemisia tabaci (Gennadius)]，俗稱小白蛾，是一種世界性的害蟲。原發(fā) 于熱帶和亞熱帶區(qū)，借助花卉及其它經(jīng)濟作物的苗木迅速擴散，在世界各地廣泛傳播并暴 發(fā)成災，近年來也已成為我國新發(fā)生的一種蟲害，危害番茄、黃瓜、辣椒等蔬菜及棉花等眾 多作物。煙粉虱直接刺吸植物汁液，導致植株衰弱，若蟲和成蟲還可以分泌蜜露，誘發(fā)煤污 病的產(chǎn)生，密度高時，葉片呈現(xiàn)黑色，嚴重影響光合作用。另外，煙粉虱還可以在30種作物 上傳播70種以上的病毒病，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了嚴重的損失。煙粉虱具有寄主廣泛、體被蠟 質(zhì)、世代重疊、繁殖速度快、傳播擴散途徑多等特點，防治極為困難。
[0003] 草莓紅蜘蛛，學名朱砂葉螨（Tetranychuscinnabarinus Boisduval)，是草莓的重 要害蟲，草莓在生長中、后期，經(jīng)常遭受紅蜘蛛的暴發(fā)危害，被害植株矮化早衰，葉片呈紅褐 色干枯。在開花期受害，則果實縮小，畸形果增多，嚴重影響草莓鮮果的產(chǎn)量。
[0004] 長期以來人們一直使用化學農(nóng)藥控制病蟲害，但是化學農(nóng)藥的毒性較大且殘留量 也較高，特別像草莓這類鮮食水果，長時間使用化學農(nóng)藥，對環(huán)境及人們的健康都會產(chǎn)生嚴 重影響，還會破壞生態(tài)平衡。所以需要進一步篩選和開發(fā)出，有效防治煙粉虱和紅蜘蛛的高 效、低毒的生物農(nóng)藥，用以減少和取代化學農(nóng)藥的使用量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于上述的【背景技術】，本發(fā)明提供了一種從長枝木霉菌的次級代謝產(chǎn)物中制備得 到的殺蟲活性物質(zhì)，以及這種殺蟲活性物質(zhì)的制備方法及其在生物防治植物害蟲方面的應 用。本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，長枝木霉菌的代謝產(chǎn)物中含有對煙粉虱和草莓紅蜘蛛有滅殺作 用的有效成分。本發(fā)明申請人上海萬力華生物科技有限公司于2014年1月14日將該菌 株提交給中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No.8723〇
[0006] 本發(fā)明的第一方面的主題是一種從長枝木霉菌的次級代謝產(chǎn)物中制備殺蟲活性 物質(zhì)的方法，其特征在于，包括：
[0007] 步驟1 :對能產(chǎn)生殺蟲活性物質(zhì)的長枝木霉菌進行液體發(fā)酵，得到含有殺蟲活性 代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液；
[0008] 步驟2 :將得到的含有殺蟲活性代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液進行粗提取操作，得到殺蟲活 性物質(zhì)的粗提物。
[0009] 進一步地，所述方法還包括將所述殺蟲活性物質(zhì)的粗提物進一步加工制得一種殺 蟲劑的步驟3,具體包括：使用本技術領域已知的農(nóng)藥所通用的固相液相及乳化劑分散潤 濕劑等各種載體，配制成任意劑型的殺蟲劑，優(yōu)選自乳油、水分散粒劑、可濕性粉劑、懸浮 劑、懸乳劑、泡騰片劑中的任意一種，更優(yōu)選地，進一步適當添加包括分散劑，潤濕劑，乳化 劑，滲透劑，粘著劑，消泡劑，發(fā)泡劑，增稠劑，穩(wěn)定劑中的任意一種或幾種的助劑。
[0010] 在本發(fā)明的實施例中，所述步驟1，具體包括將能產(chǎn)生殺蟲活性物質(zhì)的長枝木霉菌 菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0011] 優(yōu)選地，所述長枝木霉菌菌株為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)保藏，保藏號為CGMCC No. 8723的菌株。
[0012] 優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基的組分包括：5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，2g/L牛肉膏，0. 25g/L 硫酸鎂，〇.5g/L磷酸二氫鉀；其中，所述蛋白胨、蔗糖、牛肉膏、硫酸鎂和磷酸二氫鉀的濃度 所對應的體積為培養(yǎng)基的體積。
[0013] 優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的溫度為25~30 °C。
[0014] 優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的方式是：200-500rpm的轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)5~7天，優(yōu)選為300rpm 的轉(zhuǎn)速。
[0015] 進一步地，所述步驟1中由該菌株發(fā)酵上述培養(yǎng)基得到的發(fā)酵制品也屬于本產(chǎn)品 的保護范圍。
[0016] 在本發(fā)明的實施例中，所述粗提取操作優(yōu)選為將得到的含有殺蟲活性代謝產(chǎn)物的 培養(yǎng)液進行離心過濾，分離上清液和菌絲體，然后分別對上清液和菌絲體進行殺蟲活性物 質(zhì)的分離提取，合并提取液并濃縮，得到所述粗提物。
[0017] 優(yōu)選地，所述上清液的分離提取方法為：將20BV的上清液，以4BV/h流速通HZ806 大孔吸附樹脂吸附后，用2倍柱體積20%的酒精水溶液，2BV/h流速洗脫去除雜質(zhì)，再用 2.58￥的50%酒精水溶液28￥/11洗脫，收集洗脫液。
[0018] 優(yōu)選地，所述菌絲體的分離提取方法為：將菌絲體用70%的酒精浸泡24小時后過 濾，收集濾液，該過程重復兩次，然后將濾液濃縮去除酒精，再用等體積正丁醇萃取兩遍，收 集并合并有機相提取液。
[0019] 優(yōu)選地，所述濃縮的方法為：于55°C，-0.1 Mpa真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至恒重。
[0020] 本發(fā)明的第二方面的主題是一種上述所述制備方法制備得到的殺蟲活性物質(zhì)。
[0021] 進一步地，所述殺蟲活性物質(zhì)可以進一步制備得到一種殺蟲劑。
[0022] 本發(fā)明的第三方面的主題是一種上述所述殺蟲活性物質(zhì)的應用，包括在煙粉虱和 草莓紅蜘蛛防治方面的應用。
[0023] 本發(fā)明所涉及的一種長枝木霉菌的次級代謝產(chǎn)物所含有的殺蟲活性物質(zhì)，對人畜 無毒性，并符合生態(tài)環(huán)保使用要求。經(jīng)測試，本發(fā)明所涉及的殺蟲活性物質(zhì)在使用時靶標性 強，將制備的8%的初提物乳油制劑稀釋500倍，對煙粉虱和草莓紅蜘蛛的滅殺率達90%以 上。同時，該初提物在常溫下保存兩年，仍具有滅殺活性。本發(fā)明中具有殺蟲活性的粗提物 的化學穩(wěn)定性強，在pH = 2. 0~11. 0、溫度為10~100°C條件下均對煙粉虱和草莓紅蜘蛛 有殺滅作用。
[0024] 可見，本發(fā)明的優(yōu)點在于使用所述菌株進行白粉虱和草莓紅蜘蛛的防治安全可 靠，不產(chǎn)生藥害，不危害人類健康，不污染環(huán)境。
【附圖說明】
[0025] 圖1為在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述粗提取操作的線路示意圖。
【具體實施方式】
[0026] 本發(fā)明提供了一種從長枝木霉菌的次級代謝產(chǎn)物中制備殺蟲活性物質(zhì)的方法，其 特征在于，包括：
[0027] 步驟1 :對能產(chǎn)生殺蟲活性物質(zhì)的長枝木霉菌進行液體發(fā)酵，得到含有殺蟲活性 代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液；
[0028] 步驟2 :將得到的含有殺蟲活性代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液進行粗提取操作，得到殺蟲活 性物質(zhì)的粗提物。
[0029] 進一步地，所述方法還包括將所述殺蟲活性物質(zhì)的粗提物進一步加工制得一種殺 蟲劑的步驟3,具體包括：使用本技術領域已知的農(nóng)藥所通用的固相液相及乳化劑分散潤 濕劑等各種載體，配制成任意劑型的殺蟲劑，優(yōu)選自乳油、水分散粒劑、可濕性粉劑、懸浮 劑、懸乳劑、泡騰片劑中的任意一種，更優(yōu)選地，進一步適當添加包括分散劑，潤濕劑，乳化 劑，滲透劑，粘著劑，消泡劑，發(fā)泡劑，增稠劑，穩(wěn)定劑中的任意一種或幾種的助劑。
[0030] 在本發(fā)明的實施例中，所述步驟1，具體包括將能產(chǎn)生殺蟲活性物質(zhì)的長枝木霉菌 菌株接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0031] 所述長枝木霉菌菌株為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC) 保藏，保藏號為CGMCC No. 8723的菌株。
[0032] 所述培養(yǎng)基的組分包括：5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，2g/L牛肉膏，0· 25g/L硫酸鎂， 〇.5g/L磷酸二氫鉀；其中，所述蛋白胨、蔗糖、牛肉膏、硫酸鎂和磷酸二氫鉀的濃度所對應 的體積為培養(yǎng)基的體積。
[0033] 所述培養(yǎng)的溫度為25~30 °C。
[0034] 所述培養(yǎng)的方式是：200-500rpm的轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)5~7天，優(yōu)選為300rpm的轉(zhuǎn)速。
[0035] 進一步地，所述步驟1中由該菌株發(fā)酵上述培養(yǎng)基得到的發(fā)酵制品也屬于本產(chǎn)品 的保護范圍。
[0036] 在本發(fā)明的實施例中，所述粗提取操作優(yōu)選為將得到的含有殺蟲活性代謝產(chǎn)物的 培養(yǎng)液進行離心過濾，分離上清液和菌絲體，然后分別對上清液和菌絲體進行殺蟲活性物 質(zhì)的分離提取，合并提取液并濃縮，得到所述粗提物。
[0037] 所述上清液的分離提取方法為：將20BV的上清液，以4BV/h流速通HZ806大孔吸 附樹脂吸附后，用2倍柱體積20 %的酒精水溶液，2BV/h流速洗脫去除雜質(zhì)，再用2. 5BV的 50 %酒精水溶液2BV/h洗脫，收集洗脫液。
[0038] 所述菌絲體的分離提取方法為：將菌絲體用70%的酒精浸泡24小時后過濾，收集 濾液，該過程重復兩次，然后將濾液濃縮去除酒精，再用等體積正丁醇萃取兩遍，收集并合 并有機相提取液。
[0039] 所述濃縮的方法為：于55°C，-0.1 Mpa真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至恒重。
[0040] 本發(fā)明還提供了一種上述所述制備方法制備得到的殺蟲活性物質(zhì)。
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