一種紅細胞保存液的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術材料，具體涉及一種紅細胞保存液。
【背景技術】
[0002] 紅細胞膜表面有很多種抗原，如ABH抗原、Rh抗原等。這些抗原能夠特異性地與 抗體結合，所以紅細胞被廣泛地應用于血型血清學試驗。目前，紅細胞都是從人血細胞中獲 得，無法用其他來源的物質代替，這使得紅細胞的獲得和保存受到極大的限制。若是將新鮮 的紅細胞放入生理鹽水中，1~2天便會發(fā)生溶血，無法使用。因而紅細胞的保存方法一直 是相關研究者關注的問題。尤其是一些稀有血型，由于來源稀少、保存時間不長，極大的阻 礙了血型血清學試驗的順利進行。
[0003]最常見的紅細胞保存方法是將紅細胞懸浮于紅細胞保存液中，4?！鉉冷藏，這樣保 存的優(yōu)點在于可以減緩紅細胞的代謝速度，保護紅細胞在體外保存時結構和功能的完整 性，從而延長其保存時間，減少紅細胞的浪費，如將紅細胞保存于GM紅細胞保存液中。但 GM紅細胞保存液的保存期僅為42天，其保存的紅細胞在第4周左右就會發(fā)生長菌，保存效 果受到很大的影響。
[0004] 中國專利CN02148958. 0公開了 一種紅細胞保存液，可以較長時間地保存和穩(wěn)定 紅細胞，其保存期限為2個月。
[0005]為了滿足更長的保存時間要求，需要提出新的紅細胞保存方法和保存液。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種紅細胞保存液，能夠更長時間更好效果地保存紅細胞。
[0007]為實現上述目的，本發(fā)明提供的技術方案是，一種紅細胞保存液，所述紅細胞保存 液的組成和含量如下：
[0008]
[0014] 本發(fā)明還提供一種試劑紅細胞，所述試劑紅細胞是將洗滌紅細胞保存于上述紅細 胞保存液中，保存期限不少于14周。
[0015] 所述洗滌紅細胞是指將保存期內的全血、懸浮紅細胞用大量等滲溶液洗滌，去除 80%以上的白細胞和99%以上的血漿成分和部分非紅細胞成分的紅細胞成分血。
[0016] 本發(fā)明以葡萄糖、腺嘌呤、肌苷等構成紅細胞的營養(yǎng)體系，紅細胞的長期保存需要 不斷地為新陳代謝提供能量，而紅細胞中沒有細胞核、線粒體等細胞器，因此這種能量主要 來自于糖酵解。紅細胞通過糖酵解獲得生長所需能量，糖酵解產生的ATP是細胞生命活動 所需能量的直接來源，可增強細胞代謝活性，而糖酵解以葡萄糖為底物。腺嘌呤是三磷酸腺 苷來源，可以提高ATP的活性水平。肌苷是腺嘌呤的前體，能直接透過細胞膜進入紅細胞， 參與能量代謝。
[0017] 氧化鈉注射液是細胞的等滲溶液，因此添加氧化鈉后，不僅可以維持紅細胞的滲 透壓，保護細胞膜結構的完整性，還可以保持紅細胞內外的離子平衡。
[0018] 本發(fā)明添加硫酸新霉素和氧霉素，有效地防止了微生物的侵襲，保護了紅細胞的 正常代謝。
[0019] 相較于現有技術，本發(fā)明的有益效果在于：
[0020] 1、保存時間長。在第十四周時，本發(fā)明保存的紅細胞懸液的游離血紅蛋白濃度仍 符合國家標準（洗滌紅細胞在儲存末期溶血率小于紅細胞總量的〇. 8% )。
[0021 ] 2、在保存期內，本發(fā)明保存的紅細胞懸液保持了較高的抗原效價。
【附圖說明】
[0022] 圖1是游離血紅蛋白濃度測定結果對比。其中，1是實施例1的測定結果，2是實 施例2的測定結果，3是實施例3的測定結果。
[0023] 圖2是紅細胞懸液的抗原效價測定結果對比。其中，其中，1是實施例1的測定結 果，2是實施例2的測定結果，3是實施例3的測定結果，4是市售紅細胞懸液的測定結果。
【具體實施方式】
[0024] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的內容之后，本領域技術人員可 以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本發(fā)明所限定的范圍。
[0025] 洗滌紅細胞的制備：
[0026] 將5份新鮮的A型健康人的紅細胞吸出血清后混合，加入2~3倍體積的氧化鈉 注射液，吹打混勻，置于離心機中3000rpm離心5min，將離心好的A型紅細胞試管取出，吸 去上清液及附著在紅細胞表層的白細胞、血小板等成分，再加入2~3倍體積的氧化鈉注射 液，混勻后在離心機中3000rpm離心5min，并重復兩遍。在第4次離心后，吸出絕大多數上 清液，留下壓積紅細胞備用。將洗好的紅細胞吸出100y1到已加入9. 9mL紅細胞保存液的 滴管瓶中，配制出IOmL1%的不同保存液保存的紅細胞懸液各2瓶，其中一瓶用于檢測，另 一瓶靜置觀察，均放于4°C冰箱冷藏保存。
[0027] 對于B型健康人紅細胞也進行上述過程制得洗滌紅細胞懸液。
[0028] 1)實施例1
[0029] 按以下成分和含量配制紅細胞保存液：
[0030]
[0031] 將實施例1的紅細胞保存液與洗滌紅細胞一同配制為1 %紅細胞懸液。
[0032] 2)實施例2
[0033] 按以下成分和含量配制紅細胞保存液：
[0034]
[0035] 將實施例2的紅細胞保存液與洗滌紅細胞一同配制為I%紅細胞懸液。
[0036] 3)實施例3
[0037] GMA紅細胞保存液：
[0040] 將實施例3的GM紅細胞保存液與洗滌紅細胞一同配制為1 %紅細胞懸液。
[0041] 將實施例1~3的紅細胞懸液，檢測紅細胞懸液中的游離血紅蛋白濃度。將實施 例1~3的紅細胞懸液和市售紅細胞懸液一起，檢測紅細胞懸液的抗原效價。
[0042] 1、游離血紅蛋白濃度測定
[0043] 紅細胞主要由紅細胞膜和大量的血紅蛋白組成，當紅細胞膜破裂時，膜表面抗原 被破壞，血紅蛋白逸出，發(fā)生溶血現象。所以游離血紅蛋白濃度可以作為紅細胞體外保存效 果的質量指標之一。
[0044] 血紅蛋白具有過氧化酶作用，可以使過氧化氫分解產生新生態(tài)氧，新生態(tài)氧氧化 聯(lián)苯胺為藍色或綠色的衍生物，在酸性條件下顏色變?yōu)辄S綠色，吸收峰在435nm處。根據吸 光度與已知濃度的血紅蛋白的吸光度進行比較，可求得其濃度。
[0045] 用30mL冰乙酸溶解鄰甲聯(lián)苯胺0.lg，加蒸餾水至50mL，配制為0. 2%的鄰甲聯(lián)苯 胺溶液，4°C保存；吸取3. 67mL