紅景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的應(yīng)用
【專利說明】紅景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的應(yīng) 用
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?01410069489. 8、申請日為2014年02月27日、發(fā)明創(chuàng)造名稱 為"紅景天提取物及其制備方法與應(yīng)用"的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及紅景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003] 植物病原真菌廣泛分布于世界各地，引起農(nóng)作物、林木、蔬菜、經(jīng)濟(jì)作物、觀賞作物 病害，常造成植物早期失綠、葉枯、落葉、枯萎和腐爛，嚴(yán)重影響植物生長發(fā)育、產(chǎn)量及品質(zhì)， 給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和人民生活帶來嚴(yán)重?fù)p失。目前植物真菌病害防治仍以有機(jī)合成的化學(xué)藥劑防 治為主，但大量化學(xué)農(nóng)藥的使用，帶來了很大的負(fù)面生態(tài)影響，且容易使植物產(chǎn)生藥害和 抗藥性，嚴(yán)重影響抗植物病原真菌制劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用。近年來，隨著日光溫室、塑料 大棚、地膜覆蓋等保護(hù)措施的改進(jìn)，果蔬的真菌病害嚴(yán)重，已經(jīng)成為制約我國水果和蔬菜高 效、安全生產(chǎn)的主要原因，常使國家經(jīng)濟(jì)和人民生活遭受嚴(yán)重?fù)p失。隨著無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn) 規(guī)模的逐步擴(kuò)大和化學(xué)農(nóng)藥使用產(chǎn)生的抗藥性、農(nóng)藥殘留等問題的日益嚴(yán)重，尋找和使用 無毒，高效的新型植物源農(nóng)藥越來越受到人們的重視。
[0004] 景天科（Crassulaceae)紅景天屬（Rhodiola)植物，全世界約有90種，主要分布 于北半球高寒地帶。多分布于喜馬拉雅地區(qū)、亞洲西部至北部，經(jīng)朝鮮、日本至北美洲，中國 為紅景天屬植物的分布中心，約70余種。紅景天屬植物為多年生具根狀莖草本，根狀莖上 有鱗片；花單性異株或雜性，排成傘房花序，通常4數(shù)，雄花有退化的雌蕊，雌花無退化的雄 蕊，花瓣很小或完全消失。藥理作用研究表明，紅景天具有抗腫瘤、抗氧化、抗疲勞、抗輻射 等功能，為航空、航天、軍事醫(yī)學(xué)、運(yùn)動醫(yī)學(xué)和衛(wèi)生保健的重要藥材。其中目前研究比較清楚 也是大家較為認(rèn)同的主要生理活性物質(zhì)是紅景天苷（salidroside)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供紅景天提取物及其制備方法與應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供了三種紅景天提取物。
[0007] 本發(fā)明所提供的第一種紅景天提取物為紅景天95%乙醇提取物，其制備方法包 括：用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅景 天95%乙醇提取物；所述紅景天95%乙醇提取物為第一種紅景天提取物；所述紅景天為大 花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。
[0008] 本發(fā)明所提供的第二種紅景天提取物為紅景天乙酸乙酯萃取物，其制備方法包 括：1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅 景天95 %乙醇提取物；
[0009] 2)將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液， 收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯 即得到紅景天乙酸乙酯萃取物；所述紅景天乙酸乙酯萃取物為第二種紅景天提取物；
[0010] 所述紅景天為大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。
[0011] 本發(fā)明所提供的第三種紅景天提取物為紅景天乙酸乙酯洗脫物，其制備方法包 括：
[0012] 1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得 到紅景天95 %乙醇提取物；
[0013] 2)將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液， 收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯 即得到紅景天乙酸乙酯萃取物；
[0014] 3)將步驟2)的紅景天乙酸乙酯萃取物進(jìn)行硅膠柱層析得到紅景天乙酸乙酯洗脫 物；所述硅膠柱層析的洗脫是先用乙酸乙酯-石油醚進(jìn)行洗脫，然后用乙酸乙酯進(jìn)行洗脫， 收集用乙酸乙酯洗脫得到的洗脫液，得到紅景天乙酸乙酯洗脫物；所述乙酸乙酯-石油醚 是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的體積比混合得到的混合物；所述紅景天乙酸乙酯洗脫物為 第三種紅景天提取物；
[0015] 所述紅景天為大花紅景天。
[0016] 實驗證明，大花紅景天95 %乙醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番前灰霉病病菌的 抑菌率達(dá)到0. 523,對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 490 ;小花紅景天95%乙醇提取物在 濃度為lmg/ml時，對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 404,對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到 0. 449 ;高山紅景天95%乙醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到 0. 510,對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 337。大花紅景天乙酸乙酯萃取物在濃度為0.Img/ ml時對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 580,大花紅景天乙酸乙酯洗脫物在濃度為0.Img/ ml時對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 690 ;大花紅景天乙酸乙酯萃取物在濃度為0.Img/ ml時對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 406,大花紅景天乙酸乙酯洗脫物在濃度為0.lmg/ml 時對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到〇. 376。說明大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天可 用于制備番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制劑。
[0017] 上述第一種紅景天提取物、第二種紅景天提取物和第二種紅景天提取物在制備番 茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制劑中的應(yīng)用，大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅 景天在制備番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制劑中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。
[0018] 以上述紅景天提取物為活性成分的植物病原真菌抑制劑也屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍；所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二種或一種。
[0019] 上文中，所述95 %乙醇水溶液是乙醇體積百分含量為95 %的水溶液。
[0020] 本發(fā)明以中草藥紅景天為原料開發(fā)了一種環(huán)境友好、高效、低毒的潛在新型和諧 農(nóng)藥，對生態(tài)長遠(yuǎn)發(fā)展、人類的健康和病害的綜合治理都具有深遠(yuǎn)的意義。與傳統(tǒng)的農(nóng)藥相 比，本發(fā)明具有以下的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：1、本發(fā)明的紅景天提取物，對番茄灰霉病病菌和白菜黑 斑病菌具有明顯的抑制作用，可作為一種植物源農(nóng)藥開發(fā)。2、本發(fā)明的紅景天提取物與紅 景天中保健成分紅景天苷所在極性部位并不重疊（邰韌輝，高純度紅景天苷的制備工藝研 究，現(xiàn)代中藥研究與實踐，2004，18(4)，58-59.)不影響紅景天藥效成分的使用，可以成為 很好的開發(fā)資源。
【附圖說明】
[0021] 圖1為大花紅景天、小花紅景天和高山紅景天的95%乙醇提取物對白菜黑斑病菌 的抑制作用。
[0022] 圖中，左側(cè)1號圖片為對照培養(yǎng)基平板，左側(cè)2號圖片為大花紅景天95%乙醇提 取物的含量為lmg/mL的帶藥培養(yǎng)基平板，3號圖片為小花紅景天95%乙醇提取物的含量為 111^/1]11的帶藥培養(yǎng)基平板，4號圖片為高山紅景天95%乙醇提取物的含量為111^/1]11的帶藥 培養(yǎng)基平板。
[0023] 圖2為大花紅景天、小花紅景天和高山紅景天的95%乙醇提取物對番前灰霉病菌 的抑制作用。
[0024] 圖中，左側(cè)1號圖片為對照培養(yǎng)基平板，左側(cè)2號圖片為大花紅景天95%乙醇提 取物的含量為lmg/mL的帶藥培養(yǎng)基平板，3號圖片為小花紅景天95%乙醇提取物的含量為 111^/1]11的帶藥培養(yǎng)基平板，4號圖片為高山紅景天95%乙醇提取物的含量為111^/1]11的帶藥 培養(yǎng)基平板。
【具體實施方式】
[0025] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為 常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0026] 下述實施例中的番前灰霉病菌（Botrytiscinerea)(朱建蘭.番前灰霉病菌的生 物學(xué)特性研究，甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1995, 30 (1)，73-78.)，公眾可從野外采集，也可從北京 農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作為其它用途使用。本申請 中簡稱番前灰霉病菌。
[0027] 下述實施例中的桃褐腐病菌（Moniliniafructicola)(胡海文，楊海清，王 朋，劉素花，趙曉燕，劉正坪.桃褐腐病菌拮抗細(xì)菌的分離篩選與鑒定，中國農(nóng)學(xué)通報， 2009, 25 (12) : 195-200)，公眾可從野外采集，也可從北京農(nóng)學(xué)院獲得，該生物材料只為重復(fù) 本發(fā)明的相關(guān)實驗所用，不可作為其它用途使用。本申請中簡稱桃褐腐病菌。
[0028] 下述實施例中的李干腐病菌（Polvporushirsutus)(任娜敏，馬煥普，劉志民.詰 抗放線菌F1發(fā)酵液抑菌譜及穩(wěn)定性分析，北京農(nóng)學(xué)院