一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑及制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生防菌劑領(lǐng)域，具體講是一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑及制備方法 和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 生防芽孢桿菌種類多、分布廣、抑菌譜廣，抗病增產(chǎn)作用明顯，優(yōu)于其他拮抗微生 物，目前國(guó)內(nèi)外已有將其成功用于植物病害防治的報(bào)道。我國(guó)已登記注冊(cè)的防治土傳病害 的微生物農(nóng)藥有14種，其中以芽孢桿菌作為生防菌的有6種，主要用于水稻和小麥紋枯病 的防治，近幾年已迅速推廣應(yīng)用到番茄青枯病、棉花黃萎病、辣椒枯萎病、西瓜枯萎病、煙草 黑脛病、水稻稻瘟病、甘藍(lán)黑腐病等各種農(nóng)作物和/或果蔬病害。國(guó)外應(yīng)用枯草芽孢桿菌防 治植物病害較成功的實(shí)例有美國(guó)Agraquest公司用QST713菌株和QST2808菌株分別開(kāi)發(fā) 成功活菌殺菌劑SerenadeTM和Sonata AS，并于2000年登記，用于防治蔬菜、櫻桃、葡萄、萌 蘆和胡桃等多種作物的白粉病、霜霉病、疫病、灰霉病等，其他國(guó)家也有用于防治馬鈴薯、玉 米、蔬菜類和觀賞植物的真菌病害的芽孢桿菌菌劑。可見(jiàn)，芽孢桿菌用于生物防治已深受認(rèn) 可。
[0003] 根腐病作為一種嚴(yán)重的土傳病害，對(duì)中藥材和蔬菜的品質(zhì)及產(chǎn)量都造成了很大的 影響。根腐病危害嚴(yán)重制約了蔬菜和丹參等根莖類中藥材種植產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，由于其致病菌 可以在土壤中存活多年，并且隨雨水和灌溉傳播迅速，輪作倒茬很難消除，同時(shí)缺乏有效的 抗病品種和安全無(wú)殘留的防治藥物，從而導(dǎo)致根腐病危害越來(lái)越嚴(yán)重。一直以來(lái)，人們對(duì)根 腐病的防治大都依賴化學(xué)藥劑及一些合理的耕作管理方法，但根腐病一旦病發(fā)，就需施用 大量藥物，一方面造
[0004] 成了環(huán)境污染，另一方面還影響了中藥材和蔬菜的出口貿(mào)易；此外，傳統(tǒng)的生防菌 劑粉劑常以硅藻土和碳酸鈣等為載體，多次使用溶液造成土壤板結(jié)。由此可見(jiàn)，生物農(nóng)藥的 推廣是我國(guó)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的迫切需求。生物防治具有環(huán)保無(wú)污染的特點(diǎn)，因此將生防菌 劑應(yīng)用到中藥材和蔬菜根腐病的防治中意義重大。目前用于防治中藥材根腐病的生防菌劑 在國(guó)內(nèi)外還較為少見(jiàn)，國(guó)內(nèi)登記的微生物農(nóng)藥主要用于小麥全蝕病，水稻和小麥紋枯病及 果蔬枯萎病，其中有兩種生防菌劑用于防治根腐病，分別為"百抗"和"根腐消"，且都是用 于三七根腐病，但針對(duì)中藥材丹參、天南星等根腐病的生防菌劑還很少報(bào)道，故值得深入研 究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服以上缺陷，本發(fā)明將海藻渣與芽孢桿菌發(fā)酵液制成復(fù)合生防菌劑，提供了 一種既營(yíng)養(yǎng)又防病的新型含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，該生防菌劑兼具海藻營(yíng)養(yǎng)及生物菌 劑的活體調(diào)節(jié)功能，能有效的防治中藥材和蔬菜作物根腐病并提高中藥材和蔬菜作物的品 質(zhì)和產(chǎn)量。實(shí)現(xiàn)了促進(jìn)植物生長(zhǎng)，防治根腐病害的雙重目的。
[0006] 本發(fā)明目的是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，該生防菌劑包括海藻渣、枯草芽孢桿菌2-1、解 淀粉芽孢桿菌9-2,其中海藻渣與芽孢桿菌發(fā)酵液的用量比例為2~8:1 (w/v)，枯草芽孢桿 菌2-1與解淀粉芽孢桿菌9-2的用量比例為1:1~5。
[0008] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，海藻渣與芽孢桿菌發(fā)酵液的用量比 例為4~5:1 (w/v)，枯草芽孢桿菌2-1與解淀粉芽孢桿菌9-2的用量比例為1:2~4。
[0009] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，芽孢桿菌發(fā)酵液中活菌數(shù)多1 X 108cfu/mL〇
[0010] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，菌劑基質(zhì)載體為滅菌的新鮮或腐熟 的海藻渣，所含成分及含量為：粗蛋白15~25%、粗纖維45~55%、灰分2~4%、余量為 水分。
[0011] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑，海藻基質(zhì)可以為褐藻、藍(lán)藻、衣藻、綠 藻中的至少一種，且并不限于上述藻類。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑的制備方法，制備過(guò)程包括以下 步驟：
[0013] 1)接種發(fā)酵
[0014] 在無(wú)菌操作條件下，用移液槍將甘油管保存的生防菌株2-1和生防菌株9-2各 0.lmL分別接種到裝有第一培養(yǎng)基的玻璃器平皿上，37°C培養(yǎng)18h進(jìn)行菌種活化；
[0015] 將活化后的菌株分別接種到裝有第二培養(yǎng)基的三角培養(yǎng)瓶中，發(fā)酵得種子液，其 中接種量為1~5%，發(fā)酵時(shí)間為16~24h，轉(zhuǎn)速為120~200r/min，發(fā)酵溫度為37°C ;
[0016]將種子液分別移入裝第三培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，接種量為1~3%，發(fā)酵時(shí)間為22~ 26h，轉(zhuǎn)速為120~200r/min，溫度為37°C，通氣量200L/h;
[0017] 2)含海藻基質(zhì)的生防菌劑制備
[0018] 將發(fā)酵成熟的菌液與海藻渣混合均勻，采用濕法造粒技術(shù)制成顆粒劑；
[0019] 3)干燥；
[0020] 4)包裝備用。
[0021] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的復(fù)合生防菌劑的制備方法，第一培養(yǎng)基配方為：蛋白 胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化鈉10g/L，瓊脂20g/L，pH值為7. 5 ;
[0022] 第二培養(yǎng)基配方為：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5/L，氯化鈉10g/L，pH值為7. 5。
[0023] 第三培養(yǎng)基配方為：酵母膏5~10g/L、可溶性淀粉8~16g/L、葡萄糖4~8g/L、 黃豆餅粉8~16 8/1、牛肉膏6~128/1、玉米粉8~168/1，？11值為6.5~8.0。
[0024] 進(jìn)一步的，一種含海藻基質(zhì)的生防菌劑的制備方法，干燥的工藝條件為：用干燥設(shè) 備在溫度為40~50°C條件下干燥至顆粒含水量為6~18%。
[0025] 本發(fā)明還提供了 一種含海藻基質(zhì)的生防菌劑的用途，該菌劑對(duì)中藥材丹參腐 皮鐮刀菌（Fusarium solani)、天南星根腐病菌（Mucor circinelloides)、北沙參立枯 菌（Rhizoctonia solani)、桔?？菸【‵usarium oxysporum)以及蔬菜作物黃瓜尖 孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum)、黃瓜立枯絲核菌（Rhizoctonia solani)、棉花尖孢鐮 刀菌（Fusarium oxysporum)、禾谷鏡抱菌（Fusarium graminearum)和棉花立枯絲核菌 (Rhizoctonia solani)等病原真菌有較強(qiáng)抑菌作用。
[0026]本發(fā)明的有益效果：
[0027] 大部分固體生防菌劑的載體為娃藻土和碳酸媽等，娃藻土和碳酸媽等容易造成土 壤板結(jié)，而液體生防菌劑儲(chǔ)存和運(yùn)輸不方便。本發(fā)明的復(fù)合生防菌劑載體海藻渣中不但含 粗蛋白、粗纖維、中微量元素、灰分等，海藻渣中還含特有的有效活性成分，不僅使其成為生 防菌的載體應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，還可以作為優(yōu)良的有機(jī)肥。本發(fā)明的一種含有海藻基質(zhì)的 復(fù)合生防菌劑的制備方法利用生物方法和制劑技術(shù)制備出的生防菌劑，兼具海藻營(yíng)養(yǎng)及生 物菌劑的活體調(diào)節(jié)功能，實(shí)現(xiàn)了促進(jìn)植物生長(zhǎng)，防治根腐病害的雙重目的。2-1菌株主要對(duì) 中藥材根腐病原菌如毛霉、腐皮鐮刀菌等具有較強(qiáng)的抑制作用，其主要抑菌機(jī)理為菌株產(chǎn) 生的脂肽類抑菌物質(zhì)，9-2菌株除對(duì)中藥材根腐病原菌具有較強(qiáng)抑制作用外，還對(duì)蔬菜作 物根腐病，如黃瓜枯萎病菌、立枯絲核菌、茄交鐮刀菌等具有較強(qiáng)的抑制作用，其主要抑菌 機(jī)理為菌株產(chǎn)生的脂肽類抑菌物質(zhì)和表面活性素。因此利用本方法制備的復(fù)合生防菌劑不 僅對(duì)丹參、天南星等多種中藥材的根腐病原菌具有較強(qiáng)的抑制作用，而且對(duì)蔬菜作物根腐 病也有較好的防治效果，抑菌效果優(yōu)于單株菌。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí) 施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制 權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0029] 本發(fā)明按照農(nóng)用微生物菌劑國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 20287-2006)對(duì)菌劑技術(shù)指標(biāo)和無(wú)害 化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，包括pH值、有效活菌數(shù)、霉菌雜菌數(shù)、雜菌率、水分、粒度等。
[0030] pH值的測(cè)定：按照方法6. 3. 7. 3進(jìn)行測(cè)定。
[0031] 有效活菌數(shù)的測(cè)定：按照方法6.