一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其制 備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在藍(lán)莓組織培養(yǎng)快繁的過程中，最重要的是第一步，初代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)的成功與 否直接決定后期組培苗的快繁。而初代培養(yǎng)中培養(yǎng)基配方是至關(guān)重要的，直接關(guān)系到影響 初代苗木的成活率以及藍(lán)莓植株的繁殖系數(shù)以及繁殖的速度。目前針對不同的藍(lán)莓品種， 已經(jīng)報(bào)道的初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基有許多種。但是目前已經(jīng)公開發(fā)表的培養(yǎng)基的配方都是針對 不同的品種而言的，并不是一種培養(yǎng)基配方就適合所有的藍(lán)莓初代培養(yǎng)。因此每一個(gè)不同 的藍(lán)莓品種都需要針對其品種特點(diǎn)有不同的培養(yǎng)基配方。與此同時(shí)，藍(lán)莓生根非常難，無論 是組培苗還是大田植株，生根都比較困難，因此在初代培養(yǎng)階段的培養(yǎng)基也要有利于藍(lán)莓 的生根才能夠使藍(lán)莓更好的的成活增殖。
[0003] 美登（Blomidon)，矮叢藍(lán)莓品種。加拿大農(nóng)業(yè)部肯特維爾研究中心從野生矮叢藍(lán) 莓品種Augusta與451雜交育成，中熟種。果實(shí)圓形、淡藍(lán)色，果粉多，有香味，風(fēng)味好。樹 勢強(qiáng)，豐產(chǎn)。株產(chǎn)l_2kg?？购O強(qiáng)，在我國東北大小興安嶺和長白山區(qū)可安全露地越冬。 為高寒山區(qū)發(fā)展藍(lán)莓的首推品種。目前已發(fā)表的關(guān)于美登藍(lán)莓的相關(guān)文獻(xiàn)資料中，還沒有 專門針對美登的組織培養(yǎng)快繁而試驗(yàn)的培養(yǎng)基配方。因此美登的組織培養(yǎng)快繁培養(yǎng)基配方 目前還屬空白。本發(fā)明通過多次試驗(yàn)，研究出最適合藍(lán)莓'美登'的初代培養(yǎng)基配方。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是提供了一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的 培養(yǎng)基。本發(fā)明經(jīng)過試驗(yàn)獲得藍(lán)莓'美登'的初代培養(yǎng)快培養(yǎng)基配方，解決生產(chǎn)上藍(lán)莓'美 登'苗木的快速繁殖問題，為藍(lán)莓'美登'提供更多優(yōu)質(zhì)苗木，創(chuàng)造更大經(jīng)濟(jì)效益。
[0005] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供了一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基的 制備方法。
[0006] 本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問題是提供了一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基在 培養(yǎng)藍(lán)莓美登方面的應(yīng)用。
[0007] 技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種藍(lán)莓美登 初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基，按照質(zhì)量百分比由以下組分組成：改良WPM培養(yǎng)基12. 724%、玉米素 0. 01 %、吲哚丁酸0. 002%、葡萄糖74. 79%、植物凝膠12. 474%。
[0008] 其中，改良WPM培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比包括大量元素74. 1%~74. 9%、微量元素 1. 27%~1. 39%、鐵鹽 0? 35%~0? 425%、鈣鹽 19. 5%~19. 71 %、有機(jī)物 3. 76 ~4. 57%。 本發(fā)明經(jīng)過多次試驗(yàn)，篩選出最適合藍(lán)莓'美登'初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。改良WPM培養(yǎng)基， 是根據(jù)已經(jīng)報(bào)道的WPM培養(yǎng)基配方的基礎(chǔ)上，根據(jù)藍(lán)莓生長的特殊需要改進(jìn)得到的。
[0009] 其中，所述大量元素包括KN03900 ~1100mg/L、（NH4)2S042 70 ~330mg/L、 MgS04?7H20360~440mg/L和KH2P04180~220mg/L。優(yōu)選地，本發(fā)明的大量元素（謂03硝 酸鉀1000mg/L、（NH4)2S04硫酸銨300mg/L、MgS0 4?7H20七水合硫酸鎂40〇!^/1、腿2卩04磷酸 二氫鉀200mg/L);和原來的WPM培養(yǎng)基相比較，原來的培養(yǎng)基大量元素（KN03硝酸鉀400mg/ L、MgS04，7H20七水合硫酸鎂370mg/L、KH2P04磷酸二氫鉀170mg/L、K 2S04硫酸鉀900mg/L)， 四種藥品營養(yǎng)不均衡，尤其是N元素含量低，不利于藍(lán)莓生長，因此改良后添加（NH4)2S04 硫酸銨300mg/L，而去掉K2S04硫酸鉀，因?yàn)殁浽卦贙N03硝酸鉀中能夠充分提供。
[0010]其中，所述微量元素包括KI1. 0~1.lmg/L、MnS04?4H2018~22mg/L、 ZnS04?7H206~10mg/L、H3B034~6mg/L。（優(yōu)選地，KI碘化鉀1.lmg/L、MnS04. 4H20四水 合硫酸錳20mg/L、ZnS04. 7H20七水合硫酸鋅8mg/L、H3B03硼酸5mg/L);原有的微量元素 (1.lmg/L、MnS04.H20水合硫酸錳22. 3mg/L、ZnS04. 7H20七水合硫酸鋅8. 6mg/L、H3B03硼 酸6. 2mg/L、CuS04. 5H20五水合硫酸銅0? 025mg/L，NaMo04鉬酸鈉0? 25mg/L)這個(gè)配方?jīng)]有 常用的微量元素KI碘化鉀，根據(jù)我們的試驗(yàn)，添加碘化鉀對植物生長有好處，因此添加了 碘化鉀，五水合硫酸銅0. 〇25mg/L，NaMo04鉬酸鈉0. 25mg/L這兩個(gè)物質(zhì)在培養(yǎng)基中用的量 非常少，去掉這兩個(gè)物質(zhì)發(fā)現(xiàn)植株生長沒有變化，因此為了配置母液更加便利，去掉了這兩 個(gè)物質(zhì)。
[0011] 其中，所述鐵鹽為乙二胺鄰二羥基乙酸鐵。（原有的配方需要硫酸亞鐵27. 8mg/ L和乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L配置，過程繁瑣，而且乙二胺四乙酸二鈉不溶于水，配制時(shí) 時(shí)間較長），新的培養(yǎng)基直接使用Fe-EDDHA乙二胺鄰二羥基乙酸鐵10mg/L，配置過程簡單， 植物生長效果更好。
[0012] 其中，所述鈣鹽為二水合氯化鈣。原有培養(yǎng)基用氯化鈣150mg/L和硝酸鈣556mg/L 配置，改進(jìn)后直接用CaC12. 2H20二水合氯化鈣500mg/L就能夠滿足植物對鈣元素的需求， 而且配制更方便）；
[0013] 其中，所述有機(jī)物為肌醇80~120mg/L、煙酸0? 8~1. 2mg/L、維生素B1 0? 4~ 0. 6mg/L、維生素B6 0. 8~1.2mg/L、維生素C 4~6mg/L。有機(jī)元素和原有的配方比較，增 加了維生素C元素，維生素C的增加，能夠延緩植株莖段衰老，并且抑制莖段的褐化，在培養(yǎng) 過程中極大提高莖段的成活率。
[0014]ZT:玉米素（Zeatin)是存在于高等植物的一種天然植物細(xì)胞分裂素不僅促進(jìn)側(cè) 芽生長，刺激細(xì)胞分化（側(cè)端優(yōu)勢），促進(jìn)愈傷組織和種子發(fā)芽，還能防止葉片衰老，逆轉(zhuǎn)芽 部受到的毒素傷害和抑制過度根部形成。高濃度的玉米素還能產(chǎn)生不定芽分化。
[0015] IBA:B引哚丁酸，是組織培養(yǎng)中常用的植物生長調(diào)節(jié)劑。能夠刺進(jìn)植物生根本。試 驗(yàn)中配制成lmg/mL的母液供配制培養(yǎng)基使用。
[0016] 不同于以往試驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)中用葡萄糖代替蔗糖，藍(lán)莓植株生長更健壯。
[0017] 植物凝膠Phytagel從假單胞菌分泌而來的一種瓊脂的替代物，是葡萄糖醛酸、鼠 李糖和葡萄糖的混合物，具有無色、透亮和高韌性的特點(diǎn)，用于藍(lán)莓的組織培養(yǎng)中能夠使培 養(yǎng)基的酸堿度更加穩(wěn)定，藍(lán)莓植株更好生長。
[0018] 培養(yǎng)基PH值：藍(lán)莓'美登'組織培養(yǎng)對PH值的要求比較嚴(yán)格，過高或者過低都會 造成植株生長不好，或者死亡，因此一定要精準(zhǔn)調(diào)節(jié)PH值。
[0019] 其中，所述培養(yǎng)基的pH值為5. 4~5. 6。
[0020] 上述的一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：將上述的組 分按照要求的量加入每種材料，煮沸使所有材料充分混勻溶解，調(diào)培養(yǎng)基PH到5. 4~5. 6， 分裝在需要的容器中進(jìn)行高溫高壓滅菌20分鐘。
[0021] 上述的一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基在培養(yǎng)藍(lán)莓美登方面的應(yīng)用。
[0022] 有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的特色及優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明的培養(yǎng)基中 的激素配比合理，將初代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)合為一步，初代培養(yǎng)的過程中莖段就能夠生根，簡 化培養(yǎng)流程，縮短培養(yǎng)時(shí)間；使用此初代培養(yǎng)基提高初代培養(yǎng)植株的萌芽數(shù)，植株生長健 壯，有利于下一步繼代擴(kuò)繁。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明，應(yīng)當(dāng)指出，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干變型和改進(jìn)，這些也應(yīng)視為屬于 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024] 實(shí)施例1一種藍(lán)莓美登初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基
[0025]改良WPM培養(yǎng)基12. 724 %、玉米素0. 01 %、吲哚丁酸0. 002 %、葡萄糖74. 79 %、植 物凝膠12. 474%。所述的改良WPM培養(yǎng)基按照質(zhì)量百分比包括大量元素、微量元素、鐵鹽、 鈣鹽、有機(jī)物。其中，大量元素占全部WPM培養(yǎng)基質(zhì)量的74. 9%，包括KN03硝酸鉀lOOOmg/ L、（NH4)2S04硫酸銨 300mg/L、MgS04，7H20 七水合硫酸鎂 400mg/L、KH2P04磷酸二氫鉀 200mg/ L;微量元素占