一種人工催芽方法及白芨育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)科技技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種人工催芽方法及白芨育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]白發(fā)，即Bletilla sfriata(Thunb.)Reiehb.f.，為陸生型蘭科植物，其主要藥用部分為干燥的白芨塊莖，主含白芨膠，其含量高達(dá)50%。首先，白芨膠對皮膚無毒無刺激作用，是綠色安全產(chǎn)品；其次，白芨膠具有止血補(bǔ)肺、生肌止痛等功效，用于治療內(nèi)外傷出血，瘡瘍腫毒，促進(jìn)皮膚修復(fù)具有奇效，是云南白藥、葵花胃康靈、創(chuàng)口貼等藥物的主要原料；再者，白芨膠還具有清除體內(nèi)自由基、延緩皮膚衰老的功效，在化妝品行業(yè)具有廣泛用途；最后，白芨膠具有很高的粘稠特性，可做為增稠劑、懸浮劑、助乳化劑等作用，在食品行業(yè)具有廣泛的用途。全國每年需求白芨干品約2000-3000噸，而每年現(xiàn)實(shí)供應(yīng)量僅有300噸左右，缺口巨大，導(dǎo)致白芨價(jià)格年年攀升，現(xiàn)在白芨干品接近800元/kg。
[0003]白芨及其它蘭科植物的種子構(gòu)造簡單，成熟時(shí)為原胚階段，非常細(xì)小且無胚乳，多數(shù)種子無萌發(fā)所需的營養(yǎng)貯存組織，自然狀態(tài)下很難萌芽成苗，只有當(dāng)白芨種子落在陰暗、潮濕且含有共生菌環(huán)境才能順利萌芽成苗。隨著白芨價(jià)格高企，野生資源逐漸被采挖而接近枯竭，這反過來又助長了白芨價(jià)格的進(jìn)一步攀升。目前白芨種植業(yè)面臨的最大難關(guān)在于種苗嚴(yán)重短缺。
[0004]白芨的自然繁殖是以分株繁殖為主，種植兩年生的假鱗莖只能長I個(gè)新的假鱗莖，第三年增長2個(gè)，第四年再增長4個(gè)，其繁殖周期長，繁殖效率低，很難滿足大量栽培的需要。同時(shí)由于連續(xù)分芽繁殖3代后，第I代的母球莖就很難再萌芽，這給以傳統(tǒng)分株的育苗方式帶來較大困難，實(shí)際生產(chǎn)中有些母球莖不能萌芽生長。
[0005]通過組培方式以白芨種子為基礎(chǔ)育出的無菌苗是目前能大量供白芨苗的主要方式。但組培無菌苗最大難關(guān)在于種苗根部攜帶的瓊脂固體培養(yǎng)基無法洗干凈，導(dǎo)致人工馴化過程中受病菌感染的死亡率很高，白芨苗的成活率低，難以滿足白芨產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要。因此，加強(qiáng)白芨高質(zhì)量種苗的培育至關(guān)重要。
[0006]也有實(shí)驗(yàn)做直播育苗的，但直播苗的條件要求相當(dāng)苛刻，需要共生菌接種，以及合適的溫度、濕度和PH值。直播苗缺陷在于萌芽率低于10%，且萌芽所需時(shí)間長，約需3-4個(gè)月才能萌芽分化出芽，長成5-lOcm的苗需要I年半時(shí)間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]有鑒于此，本發(fā)明提供了一種人工催芽方法及白芨育苗方法，該人工催芽方法解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，且育苗方法的成活率高，育苗時(shí)間短。
[0008]本發(fā)明第一方面提供了一種人工催芽方法，包括以下步驟:
[0009](I)將種子接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包含質(zhì)量百分比為0.1-2.0%的刺槐豆膠；
[0010](2)將解木聚糖類芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基上，降解培養(yǎng)基，所述解木聚糖類芽孢桿菌于2009年I月8日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M209014，命名為解木聚糖類芽抱桿菌 Paenibacillus xylanilyticus YUPP-10[0011 ] 解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1的菌學(xué)特性:
[0012]革蘭氏染色陽性或陰性，桿狀，大小為0.3-0.8 X 3-5 μ m，適宜生長溫度為20-30°C，兼性厭氧，產(chǎn)橢圓形芽孢，芽孢端生。鹽離子濃度高于I %不利于其生長繁殖。其在肉湯固體培養(yǎng)基表面菌落污白色，表面濕潤光滑。
[0013]本發(fā)明第二方面提供了應(yīng)用了上述人工催芽方法的白芨育苗方法，包括以下步驟:
[0014](I)采用上述人工催芽方法對白芨進(jìn)行催芽；
[0015](2)在地面上鋪基質(zhì)，再在廂面上撒白芨共生菌即得苗床，將白芨芽播種至苗床上培養(yǎng)育苗；所述白芨共生菌的獲得方法包括如下步驟:將消毒的白芨塊莖在培養(yǎng)基上于23-27°C下培養(yǎng)3-5天，將菌絲定殖于白芨塊莖內(nèi)，選取不會導(dǎo)致白芨無菌苗死亡的菌絲，即為白芨共生菌。
[0016]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供的人工催芽方法通過在催芽的培養(yǎng)基中添加刺槐豆膠，并在催芽完成后添加解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1使該特殊培養(yǎng)基可以完全液化，解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，顯著提高苗的成活率；將該人工催芽方法用于白芨并進(jìn)一步進(jìn)行規(guī)模化快速育苗，克服了組培方式育苗的移栽成活率不高的缺陷，使成活率由50%以下提高至95%以上，效果明顯，移栽大田無死苗現(xiàn)象及緩苗期，同時(shí)明顯縮短直播苗的育苗時(shí)間，可提前4-6個(gè)月左右成苗，且操作簡單、適合規(guī)?；a(chǎn)、降低了育苗成本、提高了育苗速度與效率，對蘭科藥用植物的人工大規(guī)模種植具有重要的指導(dǎo)意義。
【具體實(shí)施方式】
[0017]本發(fā)明第一方面提供了一種人工催芽方法，包括以下步驟:
[0018](I)將種子接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包含質(zhì)量百分比為0.1-2.0%的刺槐豆膠；
[0019](2)將解木聚糖類芽孢桿菌接種于培養(yǎng)基上，降解培養(yǎng)基，所述解木聚糖類芽孢桿菌于2009年I月8日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:M209014，命名為解木聚糖類芽抱桿菌 Paenibacillus xylanilyticus YUPP-10
[0020]通過在催芽的培養(yǎng)基中添加適量的刺槐豆膠，并在催芽完成后添加解木聚糖類芽孢桿菌YUPP-1使該特殊培養(yǎng)基可以完全液化，解決了種苗根部攜帶的固體培養(yǎng)基無法洗凈的問題，顯著提高苗的成活率。
[0021]優(yōu)選的，步驟⑴所述培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基中添加土豆泥、活性炭、瓊脂、NAA、6-BA及刺槐豆膠，使土豆泥的濃度為10-100g/L，活性炭的濃度為0.l_2g/L，瓊脂的質(zhì)量百分比為0.1-1 %，NAA的濃度為1.0-1.2mg/L，6-BA的濃度為0.5-1.0mg/L，刺槐豆膠的質(zhì)量百分比為0.1-2.0%。該培養(yǎng)基配方提供種子萌發(fā)所需的營養(yǎng)物質(zhì)，在該培養(yǎng)基下進(jìn)行催芽處理的種子在萌發(fā)率及幼苗生長狀態(tài)上表現(xiàn)最佳。
[0022]進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟(I)所述培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.0。該pH值下有利于種子萌發(fā)。
[0023]優(yōu)選的，步驟⑴所述種子為蘭科植物種子。
[0024]本發(fā)明第二方面提供了應(yīng)用了上述人工催芽方法的白芨育苗方法，包括以下步驟:
[0025](I)采用上述人工催芽方法對白芨進(jìn)行催芽；
[0026](2)在地面上鋪基質(zhì)，再在廂面上撒白芨共生菌即得苗床，將白芨芽播種至苗床上培養(yǎng)育苗；所述白芨共生菌的獲得方法包括如下步驟:將消毒的白芨塊莖在培養(yǎng)基上于23-27°C下培養(yǎng)3-5天，將菌絲定殖于白芨塊莖內(nèi)，選取不會導(dǎo)致白芨無菌苗死亡的菌絲，即為白芨共生菌。
[0027]優(yōu)選的，步驟(2)所述培養(yǎng)基的配制方法包括:將白芨塊莖在水中煮透后過濾得到濾液，向?qū)DA培養(yǎng)基中添加所得濾液、瓊脂，使濾液質(zhì)量百分比為0.1-0.3%，瓊脂質(zhì)量百分比為1.0-1.4%，滅菌后冷卻到40-50°C時(shí)，在培養(yǎng)基中添加卡拉霉素和氨芐青霉素，使其終濃度分別為20-30 μ g/mL和95-105 μ g/mL，混勻，凝固。采用該配方的培養(yǎng)為具有選擇性的培養(yǎng)基，可以避免雜菌的生長，利于得到較純的菌絲。
[0028]進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟(2)所述在廂面上撒白芨共生菌為使每克基質(zhì)中菌含量達(dá)18-1O9個(gè)孢子。
[0029]進(jìn)一步優(yōu)選的，步驟⑵所述消毒的方法包括如下步驟:將白芨塊莖洗凈后浸泡于酒精中漂洗，將白芨切塊后轉(zhuǎn)入4%的次氯酸鈉溶液中，消毒8-15min后用無菌水漂洗。
[0030]優(yōu)選的，步驟(2)所述基質(zhì)中氮含量為L 0-2.0g/kg，磷含量為0.5-2.0g/kg，鉀含量為0.5-2.0g/kg，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量百分比為40-70%。
[0031]下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的一種人工催芽方法及白芨育苗方法予以進(jìn)一步說明。
[0032]實(shí)施例1
[0033]地點(diǎn)選在湖北省鐘祥市官莊湖農(nóng)場內(nèi)完成本實(shí)施例，該農(nóng)場位于北瑋30°左右，海拔約為200m，地勢相對平坦，建有標(biāo)準(zhǔn)化的可控溫