利用七葉一枝花根莖快速繁殖育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥用植物育苗工程領(lǐng)域，具體地說是針對七葉一枝花根莖進(jìn)行分割快速誘導(dǎo)出幼苗的繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]七葉一枝花是多年生草本植物，別名獨(dú)腳蓮、一枝箭、草河車等。野生七葉一枝花分布在湖南、云南、四川、貴州等省份，主產(chǎn)區(qū)為湖南的湘西、云南的滇中、滇西和滇西北地區(qū)，生長在海拔為1400?3100m，年平均氣溫為10?13°C，年降雨量850?1200mm的冷涼山區(qū)，多生于常綠闊葉林、針闊混交林、山坡陰濕處及灌木叢山地。七葉一枝花從種子萌發(fā)生長發(fā)育5?6年后，才進(jìn)入生殖生長期。由于生長緩慢，多年的大量采挖使野生七葉一枝花資源面臨枯竭。
[0003]七葉一枝花以根莖入藥，秋季采收。其性微寒味苦，有小毒，歸肝經(jīng)，具有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚等功效，主治疔瘡癰腫，咽喉腫痛，毒蛇咬傷，跌打傷痛，驚風(fēng)抽搐等癥?，F(xiàn)代藥理研究證明，七葉一枝花有止血、祛痰和抑菌、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗早孕殺滅精子、抗細(xì)胞毒等作用，臨床用于治療功能性子宮出血、神經(jīng)性皮炎、外科炎癥以及腫瘤等，具有顯著的療效。國內(nèi)以七葉一枝花為主要原料的產(chǎn)品有云南白藥系列、宮血寧、熱毒清、抗病毒顆粒、季德勝蛇藥片、七葉一枝花解毒酊等，產(chǎn)值40億元。
[0004]由于制藥企業(yè)對七葉一枝花原料大量的需求，使得七葉一枝花野生資源長期過度無序地采挖，野生藥材的供應(yīng)量不斷減少，已不能滿足國內(nèi)以七葉一枝花為原料的制藥企業(yè)的生產(chǎn)需求。七葉一枝花從播種到收獲利用需八年以上的時間，制藥企業(yè)為獲取更多原料，大幅度提高七葉一枝花收購價格，現(xiàn)在好的產(chǎn)品收購價格已達(dá)700元/kg以上，是五年前的16?30倍。收購價格上漲再刺激農(nóng)民過度的采挖，采挖速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了野生資源繁殖生長的速度，導(dǎo)致七葉一枝花成為稀缺資源。七葉一枝花的稀缺已成為制約相關(guān)制藥企業(yè)規(guī)模生產(chǎn)和可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。進(jìn)行七葉一枝花人工栽培，保證藥材有效供應(yīng)，滿足制藥企業(yè)需求，造福人類健康，已勢在必行。但人工栽培七葉一枝花存在一些急待攻克的關(guān)鍵技術(shù)。
[0005]七葉一枝花種子休眠程度高、萌發(fā)緩慢、出苗率低等生物學(xué)特征限制，種子種苗繁殖難度大；根莖繁殖不僅因使用營養(yǎng)體繁殖，七葉一枝花根莖需求量大，使野生資源銳減，而且會使種質(zhì)退化，抗逆性下降；至今為止，對七葉一枝花的組織培養(yǎng)方面尚未取得令人滿意的結(jié)果。缺乏高效的種苗繁殖技術(shù)和完善的種苗繁育標(biāo)準(zhǔn)體系，缺乏七葉一枝花優(yōu)質(zhì)種苗供給是制約七葉一枝花栽培快速發(fā)展的關(guān)鍵因素。
[0006]為了解決市場供需矛盾，進(jìn)行七葉一枝花人工馴化，發(fā)展人工栽培，一些學(xué)者開展了七葉一枝花種苗繁育的研究。
[0007]孟繁蘊(yùn)等(2006)研究發(fā)現(xiàn)七葉一枝花種子休眠和發(fā)育過程中種子內(nèi)源激素ABA含量顯著下降，與休眠解除有較大的相關(guān)性，GA3，IAA, ZR含量逐漸升高，變化趨勢與七葉一枝花分化和發(fā)育一致。黃瑋等(2008)進(jìn)一步探討七葉一枝花種子休眠機(jī)理，研究結(jié)果表明七葉一枝花種子不存在吸水障礙，與休眠無關(guān)，內(nèi)源激素ABA和GA3在七葉一枝花種子休眠與萌發(fā)中發(fā)揮重要作用。陳翠等研究不同溫度、不同播種方式(播種時間、覆土厚度、地膜覆蓋)等因素對七葉一枝花種子萌發(fā)和出苗的影響，結(jié)果表明，七葉一枝花種子胚后熟和萌發(fā)的最適溫度在18?20°C，在此溫度下處理3?4個月以后，轉(zhuǎn)至O?10°C低溫處理2?4個月，可在翌年4月出苗；適宜的播種時間是4月份以前，育苗土覆蓋厚度為Icm左右，播種后用黑色地膜進(jìn)行覆蓋，可提高出苗率。
[0008]陳翠等在相同種植條件下，對來源于云南省23份七葉一枝花種源進(jìn)行了物候期、形態(tài)特征及經(jīng)濟(jì)性狀的觀察、分析與評價。結(jié)果表明，不同地理種源的七葉一枝花生長物候期、形態(tài)特征及經(jīng)濟(jì)性狀園地理來源不同有一定的差異。
[0009]榮林姚對七葉一枝花的無性繁殖技術(shù)進(jìn)行研究，以培養(yǎng)種苗。方法采用根莖分割法繁殖。結(jié)果根莖分割法繁殖出苗率高(98%)。結(jié)論根莖分割法可縮短七葉一枝花的生長周期，其應(yīng)用可為七葉一枝花規(guī)?；N植提供良好的種源。陳翠等研究七葉一枝花種苗繁育技術(shù)。在對七葉一枝花種苗繁育技術(shù)多年試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，總結(jié)了七葉一枝花有性和無性繁育技術(shù)。通過種子胚后熟催芽處理，當(dāng)年出苗率達(dá)到30%以上，種子育苗5年開花結(jié)果可移栽作種苗，根莖單重達(dá)到8?15g ;帶頂芽的切段當(dāng)年可移栽，成苗率達(dá)到90%以上，不帶頂芽的切段第3年開花結(jié)果成苗，成苗率達(dá)到78%以上，根莖單重達(dá)到7?12g。
[0010]通過此技術(shù)可實(shí)現(xiàn)七葉一枝花種苗的規(guī)范化快速生產(chǎn)，促進(jìn)七葉一枝花的產(chǎn)業(yè)化栽培和發(fā)展。李群等以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加不同種類和濃度的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，對不同器官，不同取材時期的七葉一枝花外植體進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)研究。結(jié)果表明:
6-BA和IAA有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；生長期的幼芽組織是較適宜的培養(yǎng)器官，其愈傷組織的誘導(dǎo)頻率達(dá)26.7%。至今為止，對七葉一枝花的組織培養(yǎng)方面尚未取得令人滿意的結(jié)果。
[0011]公開號為CN102726144A的中國專利介紹了一種打破重樓種子休眠期的方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案具體步驟如下:(I)首先保證重樓種子的環(huán)境溫度在15-25°C，濕度在60-70% ; (2)將重樓種子置于35°C溫水中浸泡36小時；(3)將處理后的重樓種子，置于培養(yǎng)皿中，45萬伏高壓環(huán)境中，每天5-7次，每次持續(xù)2小時；(4)45天種子開始萌發(fā)，60天后苗高3-5cm，約90天，可移栽至暖棚管理。本發(fā)明打破自然條件下重樓種子I年多的休眠期，使其能在短短的兩個月內(nèi)萌發(fā)，減短了重樓的生長周期，對作為國家瀕危野生藥用植物的重樓繁殖生長具有巨大的促進(jìn)意義。
[0012]公開號為CN104686133A的中國專利介紹了一種滇重樓快速育苗方法，其特征在于，包括如下步驟:在種子成熟前30天準(zhǔn)備苗床，選擇腐殖質(zhì)較多的土地，先清除雜草，然后深翻20?25cm，暴曬10天以上，之后施入腐熟的堆肥或圈肥1500Kg/畝，在打細(xì)土塊時混入土中；用塑料薄膜搭建拱棚，拱棚寬3米，高1.5米，塑料薄膜外再蓋90%遮陽網(wǎng)，然后將拱棚周圍棚布用土壓實(shí)；在拱棚的中間和兩側(cè)各留寬30cm的通道，理兩個高10cm、寬1.2米的畦；種子完全成熟，果皮完全裂開，種皮變紅時才采收果實(shí)，保證種子中的胚發(fā)育成熟，將果實(shí)整個剪下，裝入干凈清潔的盛具中，集中后戴滅過菌的塑膠手套剝下種子，放于干凈器皿中；在大棚內(nèi)的畦面上用手或條鋤勾出深6cm的小溝，溝距1cm ;然后直接將剛剝出的新鮮種子播種于溝內(nèi)，株距5cm，然后撒少許多菌靈或百菌清于畦面；再將畦面抹平，保持種子的深度為3cm ;最后再在畦面蓋一薄層干松針，以松針蓋住土面為宜；蓋好松針后，用噴壺或有噴頭的水管澆一次透水，澆水控制水壓防止沖出種子或者使表土板結(jié)，澆完水后，將拱棚嚴(yán)實(shí)封閉，之后視土壤的濕度每隔10?15天澆一次水，土壤潮濕為止，育苗期除底肥外，不施肥或僅取少量復(fù)合肥溶解于噴壺中澆水時噴施；每隔5天檢視一次，有雜草盡早拔除，在早晨10點(diǎn)以前或下午4點(diǎn)以后進(jìn)棚，其間始終保持拱棚處于密封狀態(tài)，一般播種后15天種皮就會自然褪去，30天種子即開始萌動，60天種子的根就能長到3?5cm，90天后部分種子長出地上部分，約80%的種子在次年4月之前出苗，另有20%第三年出苗。
[0013]公開號為CN104255216A的中國專利介紹了一種重樓種子育苗的方法，其特征在于包含如下步驟:翻耕苗床，翻耕深度1cm?15cm左右，并將土塊碾碎至I?2cm，并撿去石塊和雜草，平整作畦。畦面寬110cm，溝寬25cm，溝深20cm。苗床上搭3?4層遮蔭網(wǎng)。選飽滿，成熟，無病害、霉變和損傷的千粒重為40?70克的重樓種子，將其與干凈的細(xì)砂以重量比2: I混合，搓擦除去外種皮，洗凈，用代森錳鋅80%可濕性粉劑500倍液(wt/wt)對種子進(jìn)行傷口消毒，后用70mg/kg生根粉溶液浸種子I小時，埋入濕砂中，25°C?35°C處理24h?72h后，等重樓種子生根后播種，在此期間要注意保濕。處理種子以重量比3:1播入腐殖土和細(xì)砂播種。種子上覆蓋1.5?2cm薄土層，再蓋一層細(xì)碎草以保水分。
[0014](4)苗期管理:苗期保持育