地被銀樺組織培養(yǎng)的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的方法，具體涉及一種地被銀樺組織培養(yǎng)的方法。
【背景技術】
[0002] 銀樺（Grevillea)是山龍眼科（Proteaceae)能綻放大型花序的植物，原產(chǎn)于澳大 利亞、新幾內(nèi)亞、新喀里多尼亞島和印度尼西亞中部的蘇拉威西島。銀樺是澳大利亞本土植 物中近次于相思和桉樹的第三大樹種，分布范圍廣，從年降雨3000mm的熱帶雨林到年降雨 200_的沙漠地區(qū)，從高山到沿海和干旱的內(nèi)陸都有分布?；蛐投喾N多樣，大約360種，品 種變化從小于0. 5m的地被銀樺到1~5m灌木和高達35m的喬木。銀樺容易實現(xiàn)種間雜交 和自然變異，因此自然產(chǎn)生或人為培育了上百種栽培變種和雜交種。
[0003] 地被銀樺是有名的耐干旱樹種，大多分布于澳大利亞中、西部沙漠地區(qū)，該地區(qū)常 年干旱少雨，因此地被銀樺的很多品種具有很強的抗旱能力。地被銀樺根系結(jié)構(gòu)中有許多 細小密集的須根，這也是長期生存在貧瘠立地下的進化結(jié)果，這樣的結(jié)構(gòu)有利于吸收貧瘠 土壤中的養(yǎng)分，因此地被銀樺也是耐瘠薄樹種。栽種地被銀樺只需要施低肥效的緩釋肥，或 者不施肥。因此，地被銀樺具有管護成本低的特點。
[0004] 地被銀樺花為總狀花序，其花型奇特，大多呈毛刷狀或蜘蛛狀，花形大，花色多，從 紅橙黃色到乳黃、乳白甚至綠色都有，花期長，有的品種全年開花，地被銀樺葉形豐富，從針 狀，葉片淺裂和深裂，葉色多為深綠、灰綠，在園藝上具有很高的觀賞價值。地被銀樺適合強 度修剪，可塑造出形態(tài)各異的園藝樹形。地被銀樺嫁接到灌木銀樺和喬木銀樺的砧木上成 活率高，可培育出新型的垂枝銀樺，因此地被銀樺已被澳大利亞廣泛應用于庭院綠化和景 觀工程中。地被銀樺花含豐富的花蜜，能為人類和鳥類、蜂類提供食物，因此地被銀樺是有 名的招鳥和養(yǎng)鳥的樹種。
[0005] 我國目前大量生產(chǎn)地被銀樺苗木的技術還不成熟，難以做到經(jīng)營的集約化，生產(chǎn) 的高效性，也無法滿足市場對地被銀樺種苗的大量需求。建立方法簡單、生根率高、成活率 高的地被銀樺組織培養(yǎng)方法，將對地被銀樺的推廣應用起到重要的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決上述存在的問題，本發(fā)明在引進項目"地被銀樺新品種及繁育技術引進" 的支撐下開展了地被銀樺組織培養(yǎng)研究，建立了成熟的地被銀樺組織培養(yǎng)技術平臺及工廠 化育苗的工藝流程，并已經(jīng)成功繁殖了 3萬株地被銀樺組培苗。
[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種地被銀樺組織培養(yǎng)的方法。
[0008] 本發(fā)明所采取的技術方案是：
[0009] 一種地被銀樺組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：
[0010] 1)外植體的采集；
[0011] 2)外植體的消毒；
[0012] 3)叢芽誘導培養(yǎng)：將上步消毒后的外植體接種至叢芽誘導培養(yǎng)基中，誘導培養(yǎng) 3~5個月，期間需轉(zhuǎn)接至新叢芽誘導培養(yǎng)基3~5次，外植體即可被誘導出多個叢芽；
[0013] 4)繼代增殖培養(yǎng)：將上步誘導出叢芽的地被銀樺組培苗接種到繼代增殖培養(yǎng)基 中，每培養(yǎng)28~32天將地被銀樺增殖苗轉(zhuǎn)接至新的繼代增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；
[0014] 5)生根誘導培養(yǎng)：將增殖培養(yǎng)中高度達2cm以上的單芽切下接入生根培養(yǎng)基中， 培養(yǎng)10~15天；
[0015] 6)煉苗：當至少60%的增殖苗開始生根后進入煉苗階段，將獲得的地被銀樺生根 組培苗在光強3000~6000Lx、溫度26~30°C條件下煉苗15~20天；
[0016] 7)移植及管理：將煉苗后的苗木移植到移植介質(zhì)中，進行田間栽培管理。
[0017] 進一步的，步驟1)中外植體采集的時間為6~9月，采集新萌條頂梢的25~30cm 部分，并剪去葉片。
[0018] 進一步的，步驟2)中外植體消毒處理的具體方法為：將采集的枝條清洗干凈，剪 切成3~4cm長、帶1~2個葉腋的莖段，在無菌環(huán)境中用0.08~0. 12% v/v的取(：12浸 泡消毒3~7min，期間不斷搖動確保消毒液與枝條充分接觸，然后用無菌水清洗干凈，最后 將莖段兩端各切去〇. 4~0. 6cm，留下中間含葉腋莖段作為無菌外植體。
[0019] 進一步的，步驟3)中叢芽誘導培養(yǎng)基的配方為：412~413mg/L NH4N03、1898~ 1902mg/L ΚΝ03、84·5 ~85.5mg/L KH2P04、369 ~371mg/L MgS04,7H02、131 ~133mg/ L CaCl2*2H02、22 ~22.5mg/L MnS04*4H02、8.4 ~8.8mg/L ZnS04*7H02、6 ~6.4mg/ L H3B03、0. 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 · 2H02、27. 5 ~28mg/L FeSO4 · 7H02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA · 2H02、0. 8 ~0· 85mg/L KI、0. 023 ~0· 027mg/L CuSO4 · 5H02、0. 023 ~0· 027mg/ L CoCl2 · 6H02、I. 8 ~2. 2mg/L 甘氨酸、0· 08 ~0· 12mg/L 鹽酸硫胺素、0· 48 ~0· 52mg/L 鹽 酸吡哆醇、〇· 48 ~0· 52mg/L 煙酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 8 ~I. 2g/L PVP、0. 48 ~0· 52mg/ L 6-ΒΑ、0· 048 ~0· 052mg/L IBA、27 ~32g/L 蔗糖、7 ~8g/L 卡拉膠，ρΗ5· 75 ~5· 85。
[0020] 進一步的，步驟4)中繼代增殖培養(yǎng)基的配方為：412~413mg/L ΝΗ4Ν03、1898~ 1902mg/L ΚΝ03、84·5 ~85.5mg/L ΚΗ2Ρ04、369 ~371mg/L MgS04,7H02、131 ~133mg/ L CaCl2*2H02、22 ~22.5mg/L MnS04*4H02、8.4 ~8.8mg/L ZnS04*7H02、6 ~6.4mg/ L H3B03、0. 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 · 2H02、27. 5 ~28mg/L FeSO4 · 7H02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA · 2H02、0. 8 ~0· 85mg/L KI、0. 023 ~0· 027mg/L CuSO4 · 5H02、0. 023 ~0· 027mg/ L CoCl2 · 6H02、I. 8 ~2. 2mg/L 甘氨酸、0· 08 ~0· 12mg/L 鹽酸硫胺素、0· 48 ~0· 52mg/L 鹽 酸吡哆醇、〇· 48 ~0· 52mg/L 煙酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 8 ~I. 2g/L PVP、0. 2 ~0· 3mg/L 6-ΒΑ、0· 048 ~0· 052mg/L IBA、27 ~32g/L 蔗糖、7 ~8g/L 卡拉膠，ρΗ5· 75 ~5· 85。
[0021] 進一步的，步驟5)中生根誘導培養(yǎng)基的配方為：412~413mg/LNH4N0 3、473~ 477mg/L KN03、42 ~43mg/L KH2P04、92 ~93mg/L MgSO4 ·7Η02、108 ~112mg/L CaCl2 ·2Η02、 11 ~11. 5mg/L MnSO4 · 4H02、4 ~4. 5mg/L ZnSO4 · 7Η02、2· 8 ~3. 4mg/L Η3Β03、0· 12 ~ 0· 13mg/L Na2MoO4 ·2Η02、13. 5 ~14. 5mg/L FeSO4 ·7Η02、18. 3 ~18. 9mg/L Na2 .EDTA ·2Η02、 0· 41 ~0· 42mg/L ΚΙ、0· 012 ~0· 013mg/L CuSO4 · 5Η02、0· 012 ~0· 013mg/L CoCl2 · 6H02、 I. 8~2. 2mg/L甘氨酸、0· 08~0· 12mg/L鹽酸硫胺素、0· 45~0· 55mg/L鹽酸吡咳醇、 0· 45 ~0· 55mg/L 煙酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 65 ~0· 75mg/L NAA、18 ~22g/L 蔗糖、7 ~ 8g/L 卡拉膠，ρΗ5· 75 ~5. 85。
[0022] 進一步的，步驟3)和步驟4)中叢芽誘導和繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均為：溫度 23~27°C、光照9~Ilh ·(! \光照強度2200~2700Lx ;步驟5)中生根誘導培養(yǎng)的培養(yǎng)條 件為：溫度24~26°C、光照8~IOh · d \光照強度2200~2700Lx。
[0023] 進一步的，步驟7)中所述移植介質(zhì)含有45~55 %黃泥和45~55 %泥炭土基質(zhì)。
[0024] 進一步的，步驟7)中所述田間栽培管理的具體方法為：移植后先在遮陽率為90~ 95 %，相對濕度為85 %~90 %，溫度為25~33 °C的條件下培養(yǎng)7~8天；然后將苗木置于 遮陽率為75 %~80 %，濕度為75 %~80 %，溫度為25~33 °C的條件下培養(yǎng)8~20天；以 后按常規(guī)育苗進行遮陽及淋水管理。
[0025] 進一步的，步驟7)中移植的時間為3~6月或9~11月。
[0026] 本發(fā)明的有益效果是：
[0027] 本發(fā)明建立了一種能夠獲得大量地被銀樺無性系苗木的組織培養(yǎng)方法，其中，本 發(fā)明通過研究改善地被銀樺的叢芽誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，尤其是體現(xiàn)在 對這三種培養(yǎng)基中的激素種類、濃度的選擇，微量及大量元素濃度的改良，才確保了地被銀 樺無性系苗木的高產(chǎn)率，生長快，且苗木健壯的理想結(jié)果。
[0028] 本發(fā)明方法獲得地被銀樺無性系苗木的產(chǎn)率高，時間快，且所獲得的苗木健壯，這 些苗木解決了種植行業(yè)地被銀樺苗木缺乏的問題。
[0029] 本發(fā)明方法是通過組織培養(yǎng)這種無性繁殖的方法獲得大量優(yōu)質(zhì)健康的地被銀樺 苗木，這種無性繁殖的方法能確保苗木完全繼承并保持原有母株一切的優(yōu)良品質(zhì)。
【附圖說明】
[0030] 圖1為含不同濃度大量元素的生根培養(yǎng)基對地被銀樺組培苗生根的影響；
[0031] 圖2為含不同濃度微量元素的生根培養(yǎng)基對地被銀樺組培苗生根的影響；
[0032] 圖3為不同NAA濃度（mg/L)對地被銀樺組培苗生根的影響。
【具體實施方式】
[0033] 一種地被銀樺組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：
[0034] 1)外植體的采集；
[0035] 2)外植體的消毒；<