紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明專利涉及植物組培快速繁殖技術(shù)，特別地，涉及一種紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在現(xiàn)有技術(shù)中，紫馬鈴薯的大面積開發(fā)種植一般通過組培苗的快繁與移栽實現(xiàn)。一般認(rèn)為莖尖分生組織中(包括原套、原體等)，維管系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，病毒僅能通過剛形成的少量的胞間連絲進行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，且多數(shù)病毒還需借助運動蛋白對胞間連絲進行修飾方能容病毒核酸通過。因此莖尖分生區(qū)的病毒傳播速度很慢，組培后獲得無毒苗的幾率也較大。但是，莖尖脫毒過程中存在莖尖剝離困難等問題。
[0003]因此，在紫馬鈴薯的組培苗的快繁和移栽過程中，發(fā)現(xiàn)存在以下問題:
[0004]—、紫馬鈴薯組培苗培養(yǎng)效率低:目前，現(xiàn)有技術(shù)主要采用以紫馬鈴薯的莖尖為外植體進行組培苗快繁，該技術(shù)存在操作難度大、工作效率低(在顯微鏡下，用手術(shù)工具連續(xù)剝離十余層包裹于莖尖外的莖片)，導(dǎo)致難以徹底剝離與消毒，一般組培苗污染率高達(dá)60%左右；同時還存在外植體分化速度和脫毒試管苗繁殖速度較慢，微型薯長勢弱及移植大田生產(chǎn)薯畝產(chǎn)偏低等問題；此外，在組培苗的培養(yǎng)過程中，其根系沒有得到有效利用；
[0005]二、紫馬鈴薯組培苗病毒發(fā)病率高:紫馬鈴薯病毒病是由18種病毒復(fù)合侵染所致，其中，9種是專門寄生于馬鈴薯的病毒，另9種是來自其它寄主植物的病毒，其中的馬鈴薯Y病毒、馬鈴薯卷葉病毒、馬鈴薯X病毒及馬鈴薯S病毒，這4種是危害馬鈴薯(包括紫馬鈴薯)最嚴(yán)重的病毒，同時這些病毒又均具有難以分離、純化的特點；但是目前紫馬鈴薯組培苗培養(yǎng)過程中僅僅簡單用化學(xué)物質(zhì)在培養(yǎng)誘導(dǎo)階段及生根階段防止病毒感染，有可能造成微型薯移栽大面積染毒的情況。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法中紫馬鈴薯組培苗培養(yǎng)效率低及病毒發(fā)病率高的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種工作效率高、培養(yǎng)成本低、病毒感染少及繁殖速度快的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法。
[0007]本發(fā)明提供了一種紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0008]步驟一、種薯根尖誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0009]將紫馬鈴薯種薯埋入滅菌沙土進行培育及待其長出根系；
[0010]切取根系中長主根的根尖并進行消毒滅菌；
[0011 ] 根尖剝離及根尖初代抗污染培養(yǎng)，形成根尖苗；
[0012]步驟二、試管苗誘導(dǎo)培養(yǎng)及脫毒:
[0013]根尖苗繼代抗污染培養(yǎng)；
[0014]試管苗進行脫毒檢測并篩選出健康的脫毒苗；
[0015]步驟三、微型薯誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0016]脫毒苗的液體快速繁殖抗污染培養(yǎng)，形成微型薯；
[0017]微型薯移栽。
[0018]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，所述種薯為外觀優(yōu)良、圓潤飽滿及色澤亮麗的紫馬鈴薯；所述滅菌沙土的環(huán)境為:溫度15?17°C，濕度61?65% ;所述根尖切取的長度為I?2cm ;所述消毒滅菌的流程為:先用無菌水沖洗3?5次，再用75%的乙醇浸泡20?30s，再放入0.1 %汞液搖動消毒8?lOmin，再用無菌水沖洗3?5次，放置在無菌的濾紙吸干水分。
[0019]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，在步驟一中，所述根尖剝離及根尖初代抗污染培養(yǎng)的流程為:在顯微鏡下將前端根尖進行剝離，剝?nèi)?.2?0.3mm的根尖，接種到根尖組織培養(yǎng)基進行根尖初代培養(yǎng)，根尖初代培養(yǎng)周期為14?18周，形成根尖苗；所述根尖組織培養(yǎng)基的配方為:MS+0?0.09mg/L NAA+400mg/L NH4NO3;所述根尖組織培養(yǎng)基還加入濃度為20?25 μ g/ml的苯甲酸鈉。
[0020]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，在步驟二中，所述根尖苗繼代抗污染培養(yǎng)的流程為:將根尖苗先接種到繼代培養(yǎng)基上，在20?25°C，光強2000?30001ux、光照16h/d下培養(yǎng)成5?8cm小苗，再將小苗接種到生根培養(yǎng)基上，在20?25°C，光強2000?30001ux、光照16h/d下進行培養(yǎng)，獲得完整的試管苗；所述繼代培養(yǎng)基配方為:MS+500mg/LKN03+0.lmg/LNAA+0.2 ?0.5mg/L BA+100mg/L KH2P04+400mg/LNH4N03+lg/L水解乳蛋白+20g/L蔗糖；所述生根培養(yǎng)基配方為:MS+500mg/L KN03+400mg/LΝΗ4Ν03+0.1?0.5mg/L NAA+50mg/L KH2PO4+1g/L水解乳蛋白+20g/L蔗糖；所述繼代培養(yǎng)基和所述生根培養(yǎng)基中均加入濃度為20?25 μ g/ml的苯甲酸鈉。
[0021]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，所述脫毒苗為不含馬鈴薯Y病毒、馬鈴薯卷葉病毒、馬鈴薯X病毒、馬鈴薯S病毒及馬鈴薯A病毒中任意一種病毒的試管苗。
[0022]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，在步驟三中，所述脫毒苗的液體快速繁殖抗污染培養(yǎng)的流程為:提供經(jīng)過滅菌的具開口的玻璃容器、濾紙及液體培養(yǎng)基；先將濾紙放入玻璃容器中，再將配好的液體培養(yǎng)基分裝到玻璃容器中，液體培養(yǎng)基剛沒過濾紙為宜；將脫毒苗剪成1.0?1.8cm的小段，接種至玻璃容器內(nèi)的濾紙上，進行快繁培養(yǎng)，形成微型薯；所述液體培養(yǎng)基為增殖培養(yǎng)基，其配方為:MS+0.05-0.lmg/L NAA+1.0-1.5mg/L6-BA+30_40g/L 蔗糖，PH 5.6-5.8 ;所述增殖培養(yǎng)基中加入濃度為20?25 μ g/ml的四環(huán)素。
[0023]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，在步驟三中，所述滅菌的條件為:0.1-0.15Mpa壓力下，121°C滅菌15_20min。
[0024]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，所述脫毒苗的液體快速繁殖抗污染培養(yǎng)的周期為:1 -15 d，培養(yǎng)條件為:2 5 ± 2 °C，光照時間是12-16h/d，光照強度 2000-30001ux。
[0025]在本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的一種較佳實施例中，所述微型薯移栽的流程為:將微型薯移栽到帶基質(zhì)的苗床進行培養(yǎng)，其中苗間距為8cm行距，株距5cm ;苗床基質(zhì)為:以1.2:1:1的質(zhì)量比混合泥炭、珍珠巖、蛭石，對其進行消毒處理后，在基質(zhì)中混入微肥，然后澆水至基質(zhì)含水飽和。
[0026]相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法具有以下有益效果:
[0027]—、通過種薯根尖誘導(dǎo)培養(yǎng)，使得根尖得到有效利用，而且根尖相較于莖尖更具優(yōu)勢，因紫馬鈐薯的“莖尖”是由外圍十余層莖片包裹中心的莖尖而組成，以往在顯微鏡下，用手術(shù)工具連續(xù)剝除十余層莖片是一項難度較大而效率很低的工作；而紫馬鈐薯的“根尖”直接暴露在外，在顯微鏡下，切取其根尖的尖端就顯得十分容易，效率可提高幾十倍至上百倍；
[0028]二、通過對紫馬鈴薯苗各階段誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入抗污染的化學(xué)物質(zhì)，使得紫馬鈴薯培養(yǎng)過程中抗污染的工作得到大大減輕，并且取得了良好的抗污染效果，提高了良苗率，降低了整體培養(yǎng)成本；
[0029]三、通過對紫馬鈴薯試管苗進行病毒檢測，使得組培苗的病毒能夠有效避免，在微型薯批量繁殖及微型薯莖段大面積插接過程中，減少病毒的侵染與傳播，提高產(chǎn)量，顯著提升經(jīng)濟效益；
[0030]四、以根尖取材進行培養(yǎng)，不僅成功培育出了紫馬鈴薯組培苗，并通過試驗后明確，根尖組培苗比莖尖組培苗在外植體分化速度、植株再生速度、試管苗繁殖速度及微型薯產(chǎn)量上均有提高。
【附圖說明】
[0031]為了更清楚地說明本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中:
[0032]圖1是本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的步驟流程圖。
【具體實施方式】
[0033]下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發(fā)明的一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0034]請參閱圖1，是本發(fā)明提供的紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法的步驟流程圖。所述紫馬鈴薯微型薯的快速繁殖方法可以適用于紫馬鈴薯的脫毒組培，其包括如下步驟:
[0035]S1、種薯根尖誘導(dǎo)培養(yǎng)，包括如下步驟:
[0036]S11、將紫馬鈴薯種薯埋入滅菌沙土進行培育及待其長出根系；
[0037]具體地，所述種薯為外觀優(yōu)良、圓潤飽滿及色澤亮麗的紫馬鈴薯；滅菌沙土環(huán)境為:溫度15?17°C，濕度61?65% ;根尖長度為I?2cm。
[0038]S12、切取根系中長主根的根尖并進行消毒滅菌；
[0039]具體地，所述消毒滅菌流程為:先用無菌水沖洗3?5次，再用75%的乙醇浸泡20?30s，再放入0.1 %萊液搖動消毒8?lOmin，再用無菌水沖洗3?5次，放置在無菌的濾紙吸干水分。
[0040]S13、根尖剝離及根尖初代抗污染培養(yǎng)。
[0041]具體地，在顯微鏡下將前端根尖進行剝離，剝?nèi)?.2?0.3mm的根尖