多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多花指甲蘭組織培養(yǎng)的繁殖方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]多花指甲蘭(Aerides rosea Lodd.ex Lindl.et Paxt.)為蘭科的附生蘭，其總狀花序-30cm密生許多花，花白色而帶紫色斑點十分艷麗，是園藝上重點觀賞植物。自然條件下只有老死時才能從中下部長出1-2個小苗，種子繁殖由于胚發(fā)育不完全，自然條件不很難萌發(fā)。加之人工采挖的壓力，生存環(huán)境的惡化，野生資源日益減少，多花指甲蘭以被列入國家重點保護野生植物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點。
[0004]本發(fā)明還有一個目的是提供一種多花指甲蘭組織培養(yǎng)快繁方法，能夠快速有效地提高多花指甲蘭種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)多花指甲蘭優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。
[0005]為了實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點，提供了一種多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0006](1)培育無菌試管苗
[0007]將經(jīng)過預處理的多花指甲果實切開，取出種子接種到第一 MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強度1300-16001ux，光照時間8_10小時/天，培養(yǎng)時間55-65天，得無菌試管苗，其中，第一 MS培養(yǎng)基的初始pH值為5.5-6.0，其包含:MS、0.4-0.6mg/L的6-芐基腺嘌呤、1.8-2.2mg/L的萘乙酸、1.8-2.2g/L的活性炭、25_35g/L的蔗糖以及4_6g/L的瓊脂；
[0008](2)無菌試管苗快速繁殖培養(yǎng)
[0009]將步驟(1)中得到的無菌試管苗置于第二 MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強度1400-16001ux，光照時間為8-10小時/天，培養(yǎng)時間55-65天，得試管苗叢生芽，其中第二 MS培養(yǎng)基的初始pH值為5.8，其包含:MS、0.5-2.0mg/L的噻苯隆、0.2-1.5mg/L的2.4二氯苯氧乙酸、1.8-2.2mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25_35g/L的蔗糖和4_6g/L的瓊脂。
[0010]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述步驟(1)中的預處理包括:選取多花指甲果實，用體積分數(shù)為1-3%的洗潔精水溶液浸泡4-6min，并用流水沖洗15-30min，再用氯化萊消毒10_15min，無菌水沖洗3_5次，除去表面水分，得到處理后的多花指甲果實，其中每100ml氯化汞加入2-3滴吐溫-20。
[0011]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述預處理中，除去表面水分，具體為采用消毒濾紙除去表面水分。
[0012]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述活性炭為AC活性炭。
[0013]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水。
[0014]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述預處理中，在除去表面水分后，還包括:將除去水分后的多花指甲果實用波長為200nm的紫外線照射處理lOmin。
[0015]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，萘乙酸的濃度為2.0mg/L。
[0016]優(yōu)選的是，所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述步驟(1)中，取出種子接種到第一 MS培養(yǎng)基中，具體為:
[0017]步驟A、向組培瓶底部由下至上依次鋪設厚度為1_的火山泥層、厚度為2_的海底泥層以及厚度為1_的火山泥層形成的層狀結(jié)構(gòu)，在所述海底泥層表面覆蓋一層防水透氣膜，再向組培瓶中投入第一 MS培養(yǎng)基，此處的組培瓶為圓柱狀的口徑較大的組培瓶；
[0018]步驟B、在所述第一 MS培養(yǎng)基表面放置水平設置的網(wǎng)板，按壓所述網(wǎng)板至接觸所述火山泥層，所述網(wǎng)板的網(wǎng)格均為邊長為8_的正方形，所述網(wǎng)板表面均勻涂覆厚度為1_的聚丙烯酰胺層，并在聚丙烯酰胺層表面覆蓋一層濾布，所述網(wǎng)板高度略低于所述第一 MS培養(yǎng)基的深度，以使得所述網(wǎng)板淹沒在所述第一 MS培養(yǎng)基內(nèi)；
[0019]步驟C、在所述網(wǎng)板的每個網(wǎng)格靠近中間的位置，豎直設置一個直徑為2mm的管體，使其卡設在所述層狀結(jié)構(gòu)上，其中，所述管體的高度高于所述第一 MS培養(yǎng)基的深度，所述管體位于所述第一 MS培養(yǎng)基的部分均勻間隔開設多個直徑為0.8mm的通孔；
[0020]步驟D、向所述第一 MS培養(yǎng)基中均勻投放種子。
[0021]本發(fā)明至少包括以下有益效果:
[0022](1)采用生物技術(shù)對多花指甲蘭進行組織培養(yǎng)快速繁殖，能夠在短時間內(nèi)培育出大量適合栽培種植的多花指甲蘭幼苗，保障多花指甲蘭種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0023](2)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的多花指甲蘭叢生芽增殖系數(shù)達到8-10倍，叢生芽健壯，接種到生根培養(yǎng)基后容易生根。
[0024](3)本發(fā)明所采用的培養(yǎng)基選用新型高效的細胞分裂素-噻苯隆，其可以高效促進細胞分裂，用于組織培養(yǎng)，可以更好的促進植物的芽分化，對人畜低毒；而且培養(yǎng)基中還添加了 2，4-二氯苯氧乙酸，其作為一種生長素類似物，具有很好的調(diào)節(jié)植物生長的作用。
[0025](4)本發(fā)明在培養(yǎng)基中架設網(wǎng)板，并在網(wǎng)板上涂覆聚丙烯酰胺層，聚丙烯酰胺具有很好的保水作用，剛開始可以吸收培養(yǎng)基的水分進行保存，隨著培養(yǎng)的進行，培養(yǎng)基中的水分逐漸減少，聚丙烯酰胺將釋放其之前吸收的水分，為后期種子的發(fā)育提供更好的條件，而且在網(wǎng)格中間卡設一管體，管體開設多個通孔，每隔一段時間，可以往管體內(nèi)輸送空氣，即為培養(yǎng)基內(nèi)輸送空氣，提高培養(yǎng)基內(nèi)的含氧量，為種子發(fā)芽的提高條件；并在組培瓶底部鋪設海底泥和火山泥，其中含有大量的礦物元素，亦有利于種子發(fā)芽。
[0026]本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實踐而為本領域的技術(shù)人員所理解。
【具體實施方式】
[0027]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實施。
[0028]應當理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語并不配出一個或多個其它元件或其組合的存在或添加。
[0029]<實施例1>
[0030]一種多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0031](1)培育無菌試管苗
[0032]將經(jīng)過預處理的多花指甲果實切開，取出種子接種到第一 MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度23°C，光照強度13001ux，光照時間8小時/天，培養(yǎng)時間55天，得無菌試管苗，其中，第一MS培養(yǎng)基的初始pH值為5.5，其包含:MS、0.4mg/L的6-芐基腺嘌呤、1.8mg/L的萘乙酸、
1.8g/L的活性炭、25g/L的蔗糖以及4g/L的瓊脂；
[0033](2)無菌試管苗快速繁殖培養(yǎng)
[0034]將步驟(1)中得到的無菌試管苗置于第二MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強度14001ux，光照時間為8小時/天，培養(yǎng)時間55天，得試管苗叢生芽，其中第二 MS培養(yǎng)基的初始pH值為5.8，其包含:MS、0.5mg/L的噻苯隆、0.2mg/L的2.4 二氯苯氧乙酸、1.8mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L的蔗糖和4-6g/L的瓊脂。
[0035]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述步驟(1)中的預處理包括:選取多花指甲果實，用體積分數(shù)為1%的洗潔精水溶液浸泡4min，并用流水沖洗15min，再用氯化汞消毒lOmin，無菌水沖洗3次，除去表面水分，得到處理后的多花指甲果實，其中每100ml氯化汞加入2滴吐溫-20。
[0036]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述預處理中，除去表面水分，具體為采用消毒濾紙除去表面水分。
[0037]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述活性炭為AC活性炭。
[0038]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水。
[0039]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述預處理中，在除去表面水分后，還包括:將除去水分后的多花指甲果實用波長為200nm的紫外線照射處理lOmin。
[0040]所述的多花指甲蘭組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所述步驟(1)中，取出種子接種到第一 MS培養(yǎng)基中，具體為:
[0041]步驟A、向組培瓶底部由下至上依次鋪設厚度為1_的火山泥層、厚度為2_的海底泥層以及厚度為1_的火山泥層形成的層狀結(jié)構(gòu)，在所述海底泥層表面覆蓋一層防水透氣膜，再向組培瓶中投入第一 MS培養(yǎng)基；
[0042]步驟B、在所述第一 MS培養(yǎng)基表面放置水平設