一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]傘房花耳草，拉丁學名Oldenlandia corymbosa L.，又名蛇舌草、水線草，為茜草科耳草屬植物，分布于我國南方各省，產(chǎn)量較大，其干燥全草入藥，藥材中含有多種三萜類化合物，其中烏索酸含量最高，為其主要活性成分。藥理研究發(fā)現(xiàn)，烏索酸具有抗腫瘤、抗肝炎、抗病毒、抑菌等多種藥理作用，具有重要的開發(fā)應(yīng)用價值。目前傘房花耳草藥材及種苗主要來源于野生資源，還沒有人工繁育及人工種植技術(shù)的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法，它能夠提高傘房花耳草種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)傘房花耳草優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。
[0004]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達到上述目的:一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0005](1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0-3.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸IBA、0.1-1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0006](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5-2.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L 的吲哚乙酸 ΙΑΑ、0.1-1.0mg/L 的激動素 KT、30g/L 蔗糖和 3.4g/L 的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0007](3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入0.1-1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.3mg/L吲哚乙酸ΙΑΑ、0.1-0.3mg/L的生根粉ΑΒΤ、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
[0008]本發(fā)明的突出優(yōu)點在于:
[0009](1)采用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育傘房花耳草種苗具有繁殖速度快、種苗質(zhì)量均一，且不受時間、空間、季節(jié)限制的突出優(yōu)點，縮短了種苗繁育周期，提高了種苗質(zhì)量。
[0010](2)通過幼嫩莖段為外植體誘導分化獲得大量的叢生芽，為傘房花耳草組培苗的獲得提供了新的途徑。
[0011](3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的傘房花耳草叢生芽增殖系數(shù)達到25-30倍，叢生芽健壯，接種到生根培養(yǎng)基后容易生根，生根率可達98%以上，煉苗后移栽苗床成活率達到90% ;快速、便捷、高效地進行傘房花耳草組織培養(yǎng)，實現(xiàn)傘房花耳草組培種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進一步說明。
[0013]實施例1
[0014]本發(fā)明所述的傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法的一個實例，包括以下步驟:
[0015](1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、0.lmg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數(shù)為26.9。
[0016](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。壯苗培養(yǎng)增殖系數(shù)為26.2。
[0017](3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入0.lmg/L的萘乙酸NAA、0.lmg/L吲哚乙酸IAA、0.2mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。生根率為97.0%。
[0018]實施例2
[0019]本發(fā)明所述的傘房花耳草葉片成苗的快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0020](1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入2.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚丁酸IBA、0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數(shù)為27.2。
[0021](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。壯苗培養(yǎng)增殖系數(shù)為26.4。
[0022](3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入0.lmg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L吲哚乙酸IAA、0.2mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。生根率為97.0%。
[0023]實施例3
[0024]本發(fā)明所述的傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0025](1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入3.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚丁酸IBA、0.lmg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數(shù)為28.1。
[0026](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入2.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。壯苗培養(yǎng)增殖系數(shù)為27.3。
[0027](3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.2mg/L吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。生根率為98.0%。
[0028]實施例4
[0029]本發(fā)明所述的傘房花耳草葉片成苗的快速繁殖方法的另一個實例，包括以下步驟:
[0030](1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚丁酸IBA、1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊月旨，培養(yǎng)基的pH值為5.8。叢生芽增殖系數(shù)為27.6。
[0031](2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。壯苗培養(yǎng)增殖系數(shù)為25.9。
[0032](3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.3mg/L吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。生根率為97.4%。
【主權(quán)項】
1.一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)莖段分化繁殖獲得叢生芽:取傘房花耳草無菌試管苗的幼嫩莖段，平鋪在MS繁殖培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度lOOOlux，光照時間為6_8小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入1.0-3.0mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸ΙΒΑ、0.1-1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和.3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (2)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(1)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯叢生芽，其中MS壯苗培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基中加入0.5-2.5mg/L的芐基腺嘌呤6-BA、.0.l-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (3)叢生芽生根培養(yǎng):將步驟(2)中得到的健壯叢生芽切成帶頂芽或葉芽的莖段，置于.1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強度15001ux，光照時間為12-14小時/天的條件下培養(yǎng)30天得到帶根的完整植株，其中1/2MS生根培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基中加入 0.1-1.0mg/L 的萘乙酸 NAA、0.1-0.3mg/L 吲哚乙酸 ΙΑΑ、0.1-0.3mg/L 的生根粉 ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8。
【專利摘要】一種傘房花耳草莖段成苗的快速繁殖方法，包括如下步驟：(1)取傘房花耳草無菌試管苗的莖段，置于MS繁殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導愈傷形成，并分化獲得叢生芽；(2)將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；(3)將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗。采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的傘房花耳草叢生芽增殖系數(shù)達到25-30倍，獲得的組培苗生根率在98％以上，移栽苗床成活率在90％以上，有效解決了傘房花耳草的規(guī)?；鐔栴}。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105284624
【申請?zhí)枴緾N201510785322
【發(fā)明人】蔡錦源, 熊建文, 韋劍鋒, 張佳艷, 盧杰, 覃仲欣, 李正陽
【申請人】廣西科技大學鹿山學院
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月16日