?；撬嵊糜谥苽湄i精液保存用稀釋液的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，涉及動物精液的常溫保存稀釋液，特別涉及一種豬精 液常溫保存的稀釋液及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 隨著豬的人工授精技術在集約化養(yǎng)豬場中的推廣與應用，精液的保存技術越來越 受到重視，并日益顯示出其在降低公豬飼養(yǎng)量和飼養(yǎng)成本、加快低產豬群品種改良、減少疾 病傳播等多方面的優(yōu)勢。與冷凍精液相比，常溫液態(tài)保存精液人工授精后具有母豬繁殖成 績好（受胎率、分娩率和窩產仔數(shù)高）、所需費用低、操作程序簡單等優(yōu)點；從精液的保存效 果考慮，常溫液態(tài)保存的精液更有利于豬的繁殖，能夠產生更大的經(jīng)濟效益。因此，目前的 生產實踐中豬的人工授精主要采用常溫保存的精液。
[0003] 豬精液常溫保存是將采集的精液保存在具有一定變動范圍的室溫下，利用一定范 圍的酸性環(huán)境抑制精子的活動，減少其自身的能量消耗，使精子保持在可逆的狀態(tài)而不喪 失其受精能力。在精液常溫保存中，精液的保存效果受保存溫度、PH、滲透壓、稀釋倍數(shù)、活 性氧等多方面因素的影響，精液稀釋液不僅能為精子提供代謝所需的能量，調整PH和滲透 壓，還可以抑制精液中微生物的繁殖，起到保護精子的作用。因此，稀釋液是影響豬精液常 溫保存效果的關鍵因素，與母豬的受胎效果息息相關。
[0004] 另外，目前國內外豬精液稀釋保存配方種類很多，由于抗生素的大量使用，致使精 液中大部分細菌產生耐藥性，表現(xiàn)出應用效果不穩(wěn)定、成本過高等缺點，給生產場和基層品 種改良站及專業(yè)戶帶來很多不便。
【發(fā)明內容】
[0005] 針對現(xiàn)有技術的缺陷或不足，本發(fā)明提供了?；撬嵊糜谥苽湄i精液保存用稀釋液 的應用。
[0006] 進一步，?；撬崤浜峡咕幬镉糜谥苽湄i精液保存用稀釋液的應用。
[0007] 可選的，本發(fā)明的抗菌藥物為復方新諾明和慶大霉素。
[0008] 本發(fā)明同時還提供了一種豬精液保存用稀釋液，所提供的豬精液保存用稀釋液包 括牛磺酸、葡萄糖和抑菌物質。
[0009] 本發(fā)明同時還提供了一種豬精液保存用稀釋液，所提供的豬精液保存用稀釋液包 括?；撬帷⑵咸烟?、緩沖物質、螯合劑、復方新諾明、慶大霉素和離子平衡物質。
[0010] 優(yōu)選的，本發(fā)明的所提供的豬精液保存用稀釋液包括：葡萄糖、碳酸氫鈉、檸檬酸 鈉、EDTA、檸檬酸、氯化鉀、復方新諾明、慶大霉素和?；撬?。
[0011] 可選的，本發(fā)明的所提供的豬精液保存用稀釋液包括的組分及組分間用量關系 為：每IL水溶液中含有下列物質：葡萄糖：35. 0~40. 0g，碳酸氫鈉：0. 5~I. 0g，檸檬酸 鈉：6. 0~L 0g，EDTA : L 0~L 5g，檸檬酸：0· 1~0· 5g，氯化鉀：0· 5~L 0g，慶大霉素： 2 X IO5IU,復方新諾明：2. 5 X IO4IU,?；撬幔?mmol。
[0012] 可選的，本發(fā)明的所提供的豬精液保存用稀釋液的pH為6. 80±0. 05、滲透壓為 300± lOmOsm。
[0013] 復方新諾明、慶大霉素與牛磺酸聯(lián)合使用具有協(xié)同作用，可延長精液保存時間。本 發(fā)明試驗結果表明，在豬精液保存稀釋粉中添加復方新諾明、慶大霉素與?；撬?，保存5天 后，精子活率、質膜完整率、頂體完整率、T-AOC含量高于單一使用復方新諾明、慶大霉素及 單一使用?；撬岬脑囼灲M，而MDA濃度低于單一使用復方新諾明、慶大霉素及單一使用牛 磺酸的試驗組，其中精子活率、頂體完整率、MDA濃度效果顯著。
[0014] 本發(fā)明的豬精液保存用稀釋液，保存效果良好且可靠，能夠為豬人工授精提供高 質量的優(yōu)質常溫保存精液，于17°C下保存，5天后精子活力在0. 6以上。
【附圖說明】
[0015] 圖1是單一 Tau及配合Tau的濃度對精液中T-AOC的影響；
[0016] 圖2是單一 Tau及配合Tau的濃度對精液中MDA濃度的影響。
[0017] 下面結合附圖和發(fā)明人給的具體試驗和使用方法，對本發(fā)明作進一步的詳細說 明。
【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明的用于豬精液常溫保存的稀釋液，應現(xiàn)用現(xiàn)配，可以是在精液稀釋前至少2 小時進行配制。
[0019] 在以下的實施例中，豬精液常溫保存的稀釋液需現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0020] 實施例：
[0021](一）豬精液常溫保存的稀釋液配制
[0022] 本實施例給出的用于豬精液常溫保存的稀釋液為水溶液，每IL水溶液中含有下 列物質：
[0023] 葡萄糖：35. 0~40. 0g，碳酸氫鈉：0· 5~I. 0g，梓檬酸鈉：6. 0~7. 0g，EDTA : 1. 0~I. 5g，檸檬酸：0. 1~0. 5g，氯化鉀：0. 5~I. 0g，慶大霉素：2 X IO5IU,復方新諾明： 2. 5X 104IU，Tau :5mmol。
[0024] 制備方法包括下列步驟：
[0025] (1)按配方稱取葡萄糖、碳酸氫鈉、檸檬酸鈉、EDTA、檸檬酸、氯化鉀、復方新諾明、 慶大霉素、Tau備用；
[0026] (2)將葡萄糖、碳酸氫鈉、梓檬酸鈉、EDTA、梓檬酸、氯化鉀用IL雙蒸水配制成水溶 液；
[0027] (3)待水溶液中的各成分充分溶解后，加入配方量的慶大霉素、復方新諾明和?；?酸（Tau)，得到用于豬精液常溫保存的稀釋液。
[0028] 為了確定Tau在豬精液常溫保存稀釋液中的最適添加濃度及與兩種抗菌藥物的 聯(lián)合使用效果，本試驗設置了以下方案：
[0029] 1、對照組①：單一抗菌藥物豬精液保存稀釋液（稀釋液中含有下列物質：葡萄糖： 36. 0g，碳酸氫鈉：0. 6g，檸檬酸鈉：6. 2g，EDTA :1. 2g，檸檬酸：0. 2g，氯化鉀：0. 6g，慶大霉 素：2父10511]，復方新諾明：2.5\10 411]，不含了311)。
[0030] 2、對照組②：單一 Tau豬精液保存稀釋液（稀釋液中含有下列物質：葡萄糖： 36. 0g，碳酸氫鈉：0· 6g，梓檬酸鈉：6. 2g，EDTA :L 2g，梓檬酸：0· 2g，氯化鉀：0· 6g，Tau :分 另 1J為 〇· 5mmol/L、lmmol/L、5mmol/L 和 10mmol /1,)。
[0031] 3、試驗組：Tau配合抗菌藥物豬精液保存稀釋液（稀釋液中含有下列物質：葡萄 糖：36. Og，碳酸氫鈉：0. 6g，檸檬酸鈉：6. 2g，EDTA :1. 2g，檸檬酸：0. 2g，氯化鉀：0. 6g，慶 大霉素：2X105IU，復方新諾明：2. 5X104IU，Tau :分別為 0. 5mmol/L、lmmol/L、5mmol/L 和 10mmol/L)〇
[0032] 用電子分析天平準確稱上述組分溶解于IL雙蒸水中，用磁力攪拌器攪拌均勻，即 制成豬精液常溫保存的稀釋液，放入37°C水浴鍋中備用。
[0033](二）精液的采集
[0034] 用手握法采精，收集中段濃縮部分，經(jīng)過濾后保存于保溫杯中帶回實驗室。立即在 37. 5°C下鏡檢，觀察精子活率，并用分光光度計在550nm處進行比色，計算精子密度。選擇 色澤和氣味正常，精子活率在0. 8以上，密度為3 X IO8~5 X 10 8個/mL的精液用于常溫保