一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物的栽培方法，具體涉及一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]百香果學(xué)名西番蓮，又名雞蛋果，原產(chǎn)南美洲，屬百香果科熱帶、亞熱帶多年生常綠藤本植物，其果實(shí)為典型的熱帶、亞熱帶漿果。果汁香味獨(dú)特，味道鮮美，富含各種營(yíng)養(yǎng)成分，是理想的高級(jí)飲料，且根、莖、葉、花還可入藥。近年來(lái)，國(guó)際市場(chǎng)對(duì)百香果果汁的需求以每年15%?20%的速度增長(zhǎng)，大有供不應(yīng)求之勢(shì)。
[0003]百香果屬蔓徑性果樹(shù)，適宜于溫暖、全年無(wú)凍害天氣的北瑋24度以南的地區(qū)種植。百香果的繁殖方法主要有2種，一是用種子直接播種繁殖，二是用蔓條扦插繁殖。用種子直接播種繁殖易引起雜種分離，存在著品質(zhì)偏酸、甜度不夠、產(chǎn)量不高的問(wèn)題；而不加選擇地隨意扦插繁殖，加快了品種的退化，病害增加，特別容易感染莖腐病，產(chǎn)量大大降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，通過(guò)脫毒離體培養(yǎng)可快速繁殖育苗，成批生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種苗。
[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
[0006]一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，包括以下步驟:
[0007](1)基本培養(yǎng)基的配制
[0008]在MS培養(yǎng)基中加入3%?5%的蔗糖和0.1%?0.9%的瓊脂，用NaOH溶液調(diào)pH至5.8?6.0得到基本培養(yǎng)基，將基本培養(yǎng)基分裝到200mL的培養(yǎng)瓶中，在120?122°C、
0.1?0.15MPa壓力下滅菌20min后備用；
[0009](2)外植體的消毒
[0010]在健壯無(wú)病害的植株上剪取5?8cm小段外植體，在洗衣液中浸泡3?5min，再用自來(lái)水流水沖洗lh，在無(wú)菌條件下，用酒精洗滌30s，再使用0.1%的升汞溶液滅菌10?12min，用無(wú)菌水沖洗3?5次，備用；
[0011](3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0012]將消毒后的外植體接種到基本培養(yǎng)基中，并在基本培養(yǎng)基中加入濃度為1.5?
2.0mg/L的6-芐基嘌呤，每瓶基本培養(yǎng)基接種2?3個(gè)外植體，將接種好的培養(yǎng)瓶放在光照20001x、溫度25°C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)；
[0013](4)繼代增殖培養(yǎng)
[0014]把初代培養(yǎng)形成的叢生芽從基部切下，轉(zhuǎn)接入基本培養(yǎng)基中，附加1?1.5mg/L的6-芐基嘌呤和0.1?0.2mg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行增殖培養(yǎng)；
[0015](5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0016]待不定芽長(zhǎng)至2?3cm高時(shí)，將其從基部切下，接種到基本培養(yǎng)基中，附加0.1?
0.2mg/L的萘乙酸和0.1?0.2mg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行生根誘導(dǎo)；
[0017](6)移栽定植
[0018]當(dāng)植株根長(zhǎng)至2?3cm時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，先將瓶口打開(kāi)，鍛煉2?3d，然后取出植株，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，10?15d后可移栽到果園，按常規(guī)種植管理。
[0019]優(yōu)選的，所述的NaOH溶液的濃度為lmol/L。
[0020]優(yōu)選的，所述的酒精濃度為75%。
[0021]優(yōu)選的，所述的外植體為百香果的莖段。
[0022]本發(fā)明的有益效果:
[0023]本發(fā)明通過(guò)脫毒離體培養(yǎng)和快速繁殖工廠化育苗可提供生產(chǎn)成批的優(yōu)質(zhì)種苗，避免由于扦插繁殖引起病害的蔓延；另外，通過(guò)組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，可保持百香果雜種優(yōu)勢(shì)，避免由于種子繁殖引起雜種分離。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說(shuō)明。
[0025]實(shí)施例1:
[0026](1)基本培養(yǎng)基的配制
[0027]稱取9g瓊脂、30g蔗糖，放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀；然后再將MS培養(yǎng)基加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1000mL，攪拌均勻，用lmol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，調(diào)pH至5.8，得到基本培養(yǎng)基；將基本培養(yǎng)基分裝到200mL的培養(yǎng)瓶中，在12CTC、0.IMPa壓力下滅菌20min，備用。
[0028](2)外植體的消毒
[0029]在晴好天氣的中午或下午在健壯無(wú)病害的植株上剪取5cm小段幼嫩的莖段，每個(gè)莖段含2個(gè)節(jié)，去掉基端節(jié)上的葉片，留上節(jié)的1片葉，在攪勻的洗衣液中浸泡3min，再用自來(lái)水流水沖洗lh，在無(wú)菌條件下，用75%的酒精洗滌30s，再使用0.1%的升汞溶液滅菌lOmin，用無(wú)菌水沖洗3次，備用。
[0030](3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0031]將準(zhǔn)備好的材料莖段接種到基本培養(yǎng)基中，并在基本培養(yǎng)基中加入濃度為1.5mg/L的6-芐基嘌呤，每瓶培養(yǎng)基接種2?3個(gè)莖段，將接種好的培養(yǎng)瓶放在光照20001x、溫度25 °C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
[0032](4)繼代增殖培養(yǎng)
[0033]將誘導(dǎo)獲得的叢生芽從其基部切下，接種在基本培養(yǎng)基中，在基本培養(yǎng)基中加入lmg/L的6-芐基嘌呤和0.lmg/L的吲哚丁酸通過(guò)芽生芽途徑進(jìn)行增殖，接種后5?7d，基部膨大，15d長(zhǎng)出一些細(xì)小的叢生芽，25d左右小芽長(zhǎng)大，變成一簇叢生芽。
[0034](5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0035]待不定芽長(zhǎng)至2cm高時(shí)，把叢生狀的幼苗切割成單株小苗，接入基本培養(yǎng)基中，附加0.2mg/L的萘乙酸和0.lmg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行生根誘導(dǎo)。
[0036](6)移栽定植
[0037]當(dāng)植株根長(zhǎng)至3cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室移入溫室，打開(kāi)蓋子，在自然光下鍛練2?3d ;經(jīng)過(guò)鍛練的幼苗用鑷子取出，放入清水中洗去附著于根部的培養(yǎng)基，栽入帶營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)缽中；栽植好后，澆足定根水，放置于帶有遮陽(yáng)網(wǎng)的塑料大棚內(nèi)，注意遮蔭、保濕、通氣；10?15d后就可長(zhǎng)出新根與新葉，移栽到果園，按常規(guī)種植管理，移栽成活率可達(dá)95%以上。
[0038]實(shí)施例2:
[0039](1)基本培養(yǎng)基的配制
[0040]稱取7g瓊脂、50g蔗糖，放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀；然后再將MS培養(yǎng)基加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1000mL，攪拌均勻，用lmol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，調(diào)pH至6，得到基本培養(yǎng)基，將基本培養(yǎng)基分裝到200mL的培養(yǎng)瓶中，在122°C、0.15MPa壓力下滅菌20min，備用。
[0041](2)外植體的消毒
[0042]在晴好天氣的中午或下午在健壯無(wú)病害的植株上剪取8cm小段幼嫩的莖段，每個(gè)莖段含2個(gè)節(jié)，去掉基端節(jié)上的葉片，留上節(jié)的1片葉，在攪勻的洗衣液中浸泡5min，再用自來(lái)水流水沖洗lh，在無(wú)菌條件下，用75%的酒精洗滌30s，再使用0.1%的升汞溶液滅菌12min，用無(wú)菌水沖洗5次，備用。
[0043](3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0044]將準(zhǔn)備好的材料莖段接種到基本培養(yǎng)基中，并在基本培養(yǎng)基中加入濃度為2.0mg/L的6-芐基嘌呤，每瓶培養(yǎng)基接種2?3個(gè)莖段，將接種好的培養(yǎng)瓶放在光照20001x、溫度25 °C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
[0045](4)繼代增殖培養(yǎng)
[0046]將誘導(dǎo)獲得的叢生芽從其基部切下，接種在基本培養(yǎng)基中，在基本培養(yǎng)基中加入
1.5mg/L的6-芐基嘌呤和0.2mg/L的吲哚丁酸通過(guò)芽生芽途徑進(jìn)行增殖，接種后5?7d，基部膨大，15d長(zhǎng)出一些細(xì)小的叢生芽，25d左右小芽長(zhǎng)大，變成一簇叢生芽。
[0047](5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0048]待不定芽長(zhǎng)至3cm高時(shí)，把叢生狀的幼苗切割成單株小苗，接入基本培養(yǎng)基中，附加0.lmg/L的萘乙酸和0.2mg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行生根誘導(dǎo)。
[0049](6)移栽定植
[0050]當(dāng)植株根長(zhǎng)至2cm時(shí)，將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室移入溫室，打開(kāi)蓋子，在自然光下鍛練2?3d ;經(jīng)過(guò)鍛練的幼苗用鑷子取出，放入清水中洗去附著于根部的培養(yǎng)基，栽入帶營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)缽中；栽植好后，澆足定根水，放置于帶有遮陽(yáng)網(wǎng)的塑料大棚內(nèi)，注意遮蔭、保濕、通氣；10?15d后就可長(zhǎng)出新根與新葉，移栽到果園，按常規(guī)種植管理，移栽成活率可達(dá)95%以上。
[0051]以上所述，僅是本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明的技術(shù)范圍作任何限制，故凡是依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何細(xì)微修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)基本培養(yǎng)基的配制 在MS培養(yǎng)基中加入3 %?5 %的蔗糖和0.7 %?0.9 %的瓊脂，用NaOH溶液調(diào)pH至5.8?6.0得到基本培養(yǎng)基，將基本培養(yǎng)基分裝到200mL的培養(yǎng)瓶中，在120?122°C、0.1?0.15MPa壓力下滅菌20min后備用； (2)外植體的消毒 在健壯無(wú)病害的植株上剪取5?8cm小段外植體，在洗衣液中浸泡3?5min，再用自來(lái)水流水沖洗lh，在無(wú)菌條件下，用酒精洗滌30s，再使用0.1%的升汞溶液滅菌10?12min，用無(wú)菌水沖洗3?5次，備用； (3)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 將消毒后的外植體接種到基本培養(yǎng)基中，并在基本培養(yǎng)基中加入濃度為1.5?2.0mg/L的6-芐基嘌呤，每瓶培養(yǎng)基接種2?3個(gè)外植體，將接種好的培養(yǎng)瓶放在光照20001x、溫度25 °C的培養(yǎng)室中培養(yǎng)； (4)繼代增殖培養(yǎng) 把初代培養(yǎng)形成的叢生芽從基部切下，轉(zhuǎn)接入基本培養(yǎng)基中，附加1?1.5mg/L的6-芐基嘌呤和0.1?0.2mg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行增殖培養(yǎng)； (5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng) 待不定芽長(zhǎng)至2?3cm高時(shí)，將其從基部切下，接種到基本培養(yǎng)基中，附加0.1?0.2mg/L的萘乙酸和0.1?0.2mg/L的吲哚丁酸，進(jìn)行生根誘導(dǎo)； (6)移栽定植 當(dāng)植株根長(zhǎng)至2?3cm時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，先將瓶口打開(kāi)，鍛煉2?3d，然后取出植株，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽于營(yíng)養(yǎng)缽中，10?15d后可移栽到果園，按常規(guī)種植管理。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于:在步驟(1)所述的基本培養(yǎng)基的配制中，所述的NaOH溶液的濃度為lmol/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于:在步驟(2)所述的外植體的消毒中，所述的酒精濃度為75%。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其特征在于:在步驟(2)所述的外植體的消毒中，所述的外植體為百香果的莖段。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其包括：基本培養(yǎng)基的配制、外植體的消毒、叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)培養(yǎng)以及移栽定植。本發(fā)明通過(guò)脫毒離體培養(yǎng)和快速繁殖工廠化育苗可提供生產(chǎn)成批的優(yōu)質(zhì)種苗，避免由于扦插繁殖引起病害的蔓延；另外，通過(guò)組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，可保持百香果雜種優(yōu)勢(shì)，避免由于種子繁殖引起雜種分離。
【IPC分類】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105340744
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510793541
【發(fā)明人】周天盛
【申請(qǐng)人】浦北南國(guó)水果種植農(nóng)民專業(yè)合作社
【公開(kāi)日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年11月17日