一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種貝類的雜交制種方法，特別涉及一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法。
【背景技術(shù)】
[0002]利用遺傳改良技術(shù)，為貝類養(yǎng)殖業(yè)培育優(yōu)良品種，具有深遠(yuǎn)的理論意義和廣闊的應(yīng)用前景。雜交育種技術(shù)屬于遺傳改良技術(shù)，雜交一般是指品種或品系以上的兩個(gè)不同類型的親本之間的交配，分類地位在種以上的兩個(gè)親本之間的交配稱為種間雜交。通過雜交育種所培育的雜交種個(gè)體在生長(zhǎng)勢(shì)、存活率和抗病性上將具有較高的雜種優(yōu)勢(shì)，能迅速和顯著地提高雜交種的產(chǎn)量和成活率。
[0003]鮑是海洋貝類的一種，被譽(yù)為海產(chǎn)八珍之首，素有“軟黃金”之稱，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。皺紋盤鮑(Hal1tis discus hannnai)屬冷水種，在我國(guó)主要分布在遼東半島和山東半島一帶，系我國(guó)北方沿海地區(qū)主要養(yǎng)殖鮑種，由于海洋環(huán)境污染、累代養(yǎng)殖和近親繁殖，造成皺紋盤鮑種質(zhì)退化嚴(yán)重、生長(zhǎng)速度慢、抗逆性差等，亟需新的優(yōu)良品種改善鮑養(yǎng)殖品種單一的現(xiàn)狀。黑足鮑(Hal1tis iris)分布于新西蘭周邊海域，是世界大型經(jīng)濟(jì)鮑種，該種具有個(gè)體大、生長(zhǎng)速度快和抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)，但該種在我國(guó)海區(qū)無自然分布。山東大學(xué)于2007年從新西蘭引進(jìn)了黑足鮑，并開展了黑足鮑與皺紋盤鮑雜交育種工作。研究結(jié)果表明，二者在性狀方面具有一定的互補(bǔ)性，通過雜交途徑，可以集兩種鮑的優(yōu)良性狀于一體，培育出適溫范圍廣、生長(zhǎng)迅速的雜交鮑種，雜交后代可供選擇的幅度廣泛，容易獲得優(yōu)良的新品種。
[0004]據(jù)《山東大學(xué)學(xué)報(bào):理學(xué)版》(2013年第48期)“皺紋盤鮑(Hal1tis discushannai)與黑足鮑(Hal1tis iris)雜交育苗的初步研究”報(bào)道，在雜交受精過程中，皺紋盤鮑早X黑足鮑7受精率和孵化率僅為23.45%和32.87%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于皺紋盤鮑自交受精率和孵化率(79.83%和76.86%)。目前皺紋盤鮑與黑足鮑雜交技術(shù)存在以下不足:1.雜交用的黑足鮑種鮑多數(shù)未經(jīng)過挑選，對(duì)雜交用親本的綜合性狀情況不了解;2.傳統(tǒng)的雜交技術(shù)只是簡(jiǎn)單地把不同種的精子和卵子混合，沒有考慮到雜交時(shí)受精條件的影響，因此受精率和孵化率往往較低，無法大規(guī)模培育雜交苗種。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有雜交技術(shù)所存在的受精率和孵化率較低等問題，提供一種受精率和孵化率較高的黑足鮑與皺紋盤鮑種間雜交制種方法。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目標(biāo)，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
本發(fā)明通過優(yōu)化雜交受精條件，使受精卵在合適的受精環(huán)境中進(jìn)行胚胎發(fā)育，雜交受精率和孵化率均有顯著提高，能滿足大規(guī)模培育雜交苗種的需要。
[0007]本發(fā)明的具體步驟如下:
I)種鮑的選擇:取皺紋盤鮑作為母本種鮑，取黑足鮑作為父本種鮑； 2)種鮑的同步促熟:將種鮑按照雌雄分別放置在不同的親鮑培育池中進(jìn)行培育；
3)人工催產(chǎn):將性腺發(fā)育成熟的皺紋盤鮑雌鮑采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，將性腺發(fā)育成熟的新西蘭黑足鮑雄鮑采用陰干結(jié)合過氧化氫海水浸泡法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止；
4)皺紋盤鮑早X黑足鮑^雜交種受精卵的獲得:分別取皺紋盤鮑的卵子和黑足鮑的精子混合，調(diào)節(jié)受精溫度，待受精卵分裂至二細(xì)胞期后洗卵；
5)按照常規(guī)的孵化及后期培育方法即可獲得皺紋盤鮑與黑足鮑雜交種苗。
[0008]在步驟I)中，所述的種鮑的選擇，取殼長(zhǎng)范圍為8-12cm，個(gè)體活力良好、肌肉無損傷的皺紋盤鮑作為母本種鮑;取殼長(zhǎng)范圍為14-16cm，個(gè)體活力良好、肌肉無損傷的黑足鮑作為父本種鮑。
[0009]在步驟2)中，所述的種鮑的同步促熟，皺紋盤鮑性腺促熟溫度為20_22°C，黑足鮑性腺促熟溫度為15-17°C。
[0010]在步驟3)中，所述的催產(chǎn)的方法可采用在16-20°c的室溫條件下，陰干60-90min，然后將皺紋盤鮑的雌種鮑和黑足鮑的雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，雌雄個(gè)體嚴(yán)格區(qū)分，不同種的種鮑的容器相隔5m以上，防止不同種的精子混合;在皺紋盤鮑容器中注入照射強(qiáng)度為500-1200mwh/L紫外線處理海水，每隔40-60min更換一次紫外線處理海水，直至皺紋盤鮑種鮑產(chǎn)卵為止；同時(shí)，黑足鮑催產(chǎn)容器中加入12L海水，每個(gè)容器中加入60g/L的過氧化氫溶液18ml，lmol/L的氫氧化鈉溶液13.2ml，海水溫度優(yōu)選為:15-17.5°C，充分?jǐn)嚢韬髮⒑谧沲U種鮑放入催產(chǎn)容器直至排精為止。
[0011]上述技術(shù)方案使用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激法和陰干結(jié)合過氧化氫海水浸泡法分別對(duì)性腺發(fā)育成熟雌性皺紋盤鮑和雄性黑足鮑進(jìn)行催產(chǎn)，除催產(chǎn)方法外，紫外線的照射條件、過氧化氫和氫氧化鈉溶液的用量的控制均需按上述條件或比例嚴(yán)格控制，否則不僅會(huì)影響父本種鮑和母本種鮑的排卵或排精效果，甚至?xí)垢副痉N鮑和母本種鮑難以排卵或排精，致使雜交制種的受精率和孵化率大大降低。
[0012]在步驟4)中，所述的受精溫度調(diào)節(jié)，是指在受精前，將溫度調(diào)節(jié)至精子活力最適的溫度16°C，完成受精后，逐漸升高溫水至20°C。
[0013]在步驟4)中，所述的受精卵分裂至二細(xì)胞期是指30%_50%的受精卵分裂至二細(xì)胞期；
在步驟4)中，皺紋盤鮑早X黑足鮑^雜交時(shí)，所述的黑足鮑精子濃度為3 X 106-6.5 X106f/mL
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有以下突出優(yōu)點(diǎn):
1.采用本發(fā)明在進(jìn)行種間雜交時(shí)，由于優(yōu)化了受精條件，使受精卵在合適的受精環(huán)境中進(jìn)行胚胎發(fā)育，因此雜交受精率和孵化率與現(xiàn)有雜交技術(shù)條件下相比提高了 178%和158%以上。
[0014]2.在苗種的養(yǎng)成階段，采用本發(fā)明獲得的雜交種在生長(zhǎng)速度和成活率上均顯著優(yōu)于自交。
[0015]3.本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，對(duì)操作者的經(jīng)驗(yàn)要求不高，便于掌握。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1
取個(gè)體活力良好、肌肉無損傷的皺紋盤鮑做為母本種鮑與黑足鮑做為父本種鮑，其中皺紋盤鮑平均殼長(zhǎng)9.5cm，黑足鮑平均殼長(zhǎng)15.2cm;調(diào)節(jié)海水溫度對(duì)皺紋盤鮑和黑足鮑進(jìn)行同步促熟，其中皺紋盤鮑的性腺促熟溫度20-22°C，黑足鮑的性腺促熟溫度為15-17°C，促熟過程中，將種鮑按照雌雄分別放置在不同的親鮑培育池中進(jìn)行飼育，每個(gè)親鮑培育池內(nèi)親鮑的性別特征必須單一，不能雌雄混合放養(yǎng)在同一個(gè)親鮑培育池內(nèi)，培育密度為30個(gè)/m3，親鮑投喂海帶;待種鮑性腺發(fā)育成熟后，在16-20°C的室溫下將性腺發(fā)育成熟的皺紋盤鮑個(gè)體陰干60min，隨后注入照射強(qiáng)度為lOOOmwh/L紫外線處理海水，海水水溫為22°C，每隔50min更換一次紫外線處理海水，直至雌鮑產(chǎn)卵為止;在16-20°C的室溫下將性腺發(fā)育成熟的黑足鮑個(gè)體陰干901^11，在裝有121^海水的催產(chǎn)容器中加入6(^/1的過氧化氫181111，111101/1的氫氧化鈉溶液13.2ml，海水水溫為15-17.5°C，充分?jǐn)嚢韬髮⒑谧沲U種鮑放入催產(chǎn)容器直至排精為止;上述催產(chǎn)過程中將皺紋盤鮑與黑足鮑的雌雄種鮑分別置于不同的容器內(nèi)，雌雄個(gè)體嚴(yán)格區(qū)分，不同種的種鮑的容器相隔5m以上，操作過程嚴(yán)格防止同種精卵混合;分別取黑足鮑的精子和皺紋盤鮑的卵子，將二者混合，其中黑足鮑的精子濃度為6.5 X 106個(gè)/mL，調(diào)節(jié)精卵受精溫度至16°C，待30%-50%的受精卵分裂至二細(xì)胞期后開始洗卵；按照常規(guī)的孵化及后期培育方法即可獲得皺紋盤鮑與黑足鮑雜交種苗。
[0017]其中，皺紋盤鮑早X黑足鮑^雜交受精率為41.87 ±2.93%，孵化率為52.4±4.75%；雜交種生長(zhǎng)迅速，成活率高，具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì)，適合大面積的推廣養(yǎng)殖。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種皺紋盤鮑與黑足種間雜交制種方法，其特征在于其具體步驟如下: 1)種鮑的選擇:取皺紋盤鮑作為母本種鮑，取黑足鮑作為父本種鮑； 2)種鮑的同步促熟:將種鮑按照雌雄分別放置在不同的親鮑培育池中進(jìn)行培育； 3)人工催產(chǎn):將性腺發(fā)育成熟的皺紋盤鮑雌鮑采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，將性腺發(fā)育成熟的新西蘭黑足鮑雄鮑采用陰干結(jié)合過氧化氫海水浸泡法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止； 4)皺紋盤鮑早X黑足鮑^雜交種受精卵的獲得:分別取皺紋盤鮑的卵子和黑足鮑的精子混合，調(diào)節(jié)受精溫度，待受精卵分裂至二細(xì)胞期后洗卵； 5)按照常規(guī)的孵化及后期培育方法即可獲得皺紋盤鮑與黑足鮑雜交種苗。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:所述的皺紋盤鮑母本種鮑的殼長(zhǎng)范圍為8-12cm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:所述的黑足鮑父本種鮑的殼長(zhǎng)范圍為14-16cm。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟2)中所述的皺紋盤鮑性腺促熟所用海水水溫為20-22°C。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟2)中所述的黑足鮑性腺促熟所用海水水溫為15-17°C。6.根據(jù)權(quán)利I要求所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟4)中所述的受精溫度調(diào)節(jié)為16°C。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:完成受精后，逐漸升高水溫至20°C。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟4)中所述的受精卵分裂至二細(xì)胞期是指30%-50%的受精卵分裂至二細(xì)胞期。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟4)中，皺紋盤鮑早X黑足鮑^雜交時(shí)，所述黑足鮑的精子濃度為:3 X 106-6.5 X 16個(gè)/mL。10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一權(quán)利要求所述的一種皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，其特征在于:步驟3)中的催產(chǎn)方法采用在16-20°C條件下，陰干60-90min，然后將皺紋盤鮑和黑足鮑的雌雄種鮑分別置于不同的催產(chǎn)容器內(nèi)，雌雄個(gè)體嚴(yán)格區(qū)分，不同種的種鮑的容器相隔5m以上；在皺紋盤鮑的催產(chǎn)容器中注入照射強(qiáng)度為500-1200mWh/L的紫外線處理海水，每隔40-60min更換一次紫外線處理海水，直至皺紋盤鮑母本種鮑產(chǎn)卵為止；同時(shí)，在黑足鮑催產(chǎn)容器中加入12L海水，每個(gè)容器中加入濃度為60g/L的過氧化氫溶液18ml，Imol/L的氫氧化鈉溶液13.2mL，充分?jǐn)嚢韬髮⒑谧沲U父本種鮑放入催產(chǎn)容器直至排精為止。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種受精率和孵化率較高皺紋盤鮑與黑足鮑種間雜交制種方法，本發(fā)明的種間雜交制種方法以中國(guó)皺紋盤鮑為母本種鮑，新西蘭黑足鮑為父本種鮑；將種鮑按照雌雄分別放置在不同的親鮑培育池中培育；將性腺發(fā)育成熟的皺紋盤鮑雌鮑采用陰干結(jié)合紫外線照射海水刺激方法進(jìn)行催產(chǎn)，將性腺發(fā)育成熟的新西蘭黑足鮑雄鮑采用陰干結(jié)合過氧化氫海水浸泡法進(jìn)行催產(chǎn)，直至雌雄種鮑產(chǎn)卵和排精為止；皺紋盤鮑♀×黑足鮑♂雜交種受精卵的獲得：分別取皺紋盤鮑的卵子和黑足鮑的精子，將二者混合，調(diào)節(jié)受精海水溫度，待受精卵分裂至二細(xì)胞期后開始洗卵；按照常規(guī)的孵化及后期培育方法即可獲得皺紋盤鮑與黑足鮑雜交種苗。
【IPC分類】A01K61/00
【公開號(hào)】CN105494187
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510895362
【發(fā)明人】侯旭光, 張海濤, 郭戰(zhàn)勝, 梅俊學(xué)
【申請(qǐng)人】山東大學(xué)（威海）
【公開日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2015年12月8日