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4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法

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4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于植物無(wú)性快繁技術(shù)領(lǐng)域,涉及組培苗的生根方法,尤其是涉及一種4-松油醇型互葉白千層組培苗的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]互葉白千層(Melaleuca ahemifolia)是桃金娘科白千層屬的一種香料植物,90年代初從澳大利亞引種至我國(guó)南方,目前在廣西、廣東、云南和福建等省份都有種植?;ト~白千層的莖和葉經(jīng)過(guò)水蒸氣蒸餾而得的精油也稱(chēng)茶樹(shù)油,既是天然香料,又具有強(qiáng)力殺菌作用,經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高。
[0003]互葉白千層的種子多為敗育,發(fā)芽率低,且種間差異大,所以目前互葉白千層的繁育主要采用扦插和組培兩種,其中組培繁育的高效、快速及穩(wěn)定性使其更具備市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。
[0004]互葉白千層精油成分中,最主要的有效成份為4-松油醇,經(jīng)研究人員多年選育,已選育出多個(gè)松油醇含量較高的4-松油醇型互葉白千層優(yōu)良品種,但較高的松油醇成分在組培繁育時(shí)表現(xiàn)出對(duì)根系萌發(fā)的負(fù)面影響,使現(xiàn)有的組培技術(shù)生根率有限。本發(fā)明摒棄了現(xiàn)有的互葉白千層組培技術(shù)中廣泛采用的MS及其系列改良培養(yǎng)基,而是在WPM和B5培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,通過(guò)優(yōu)化調(diào)整培養(yǎng)基成分,有效降低了松油醇對(duì)生根率的影響,并且通過(guò)添加適宜的抑菌劑,建立的穩(wěn)定、高效的4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法,為4-松油醇型互葉白千層良種組培快繁助力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的旨在提供一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法,從而為其商業(yè)化快速繁育提供技術(shù)條件。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案是:
通過(guò)優(yōu)化調(diào)整培養(yǎng)基的成分及比例,篩選得到可以促進(jìn)4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽生根的培養(yǎng)基配方,添加適宜的抑菌劑,再輔以適宜的溫度和光照,建立4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法。
[0007]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的:
一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法,包括繼代芽壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)基配制、生根培養(yǎng)、煉苗、移栽5個(gè)工序,其操作步驟如下:
(1)繼代芽壯苗培養(yǎng):采用常規(guī)繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代芽的增殖培養(yǎng);當(dāng)繼代芽單芽長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm時(shí),增加光照促使單芽老練;
(2)生根培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基配方采用2/5?4/5改良WPM培養(yǎng)基或1/5?3/5改良B5培養(yǎng)基附加IBA0.05?I.5mg/L、ABT6號(hào)0.05?I.5mg/L、蔗糖 15000mg/L、瓊脂6.0g/L,在潔凈的環(huán)境中,將培養(yǎng)基按照配方配制好后,持續(xù)煮沸20分鐘,調(diào)節(jié)pH值至5.8?6.0,加入抑菌劑后混勻,分裝在一次性聚乙烯塑料杯中,每杯用保鮮膜覆蓋并用橡膠圈固定,待降溫凝結(jié)后使用; (3)生根培養(yǎng):將步驟(I)繼代芽繼續(xù)培養(yǎng)使芽伸長(zhǎng),選擇長(zhǎng)度1.0cm以上,并且綠色明顯加深,稍木質(zhì)化的單芽在超凈臺(tái)中剪下,并接種于步驟(2)中配制好的生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng);
(4)煉苗:當(dāng)步驟(3)單芽生根培養(yǎng)至根系長(zhǎng)度達(dá)到1.5cm后,將瓶苗移至室外具有遮陰裝置的大棚中進(jìn)行煉苗,遮陰度要求為75?85 %,煉苗1?15天;
(5)移栽:將步驟(4)煉苗后的小苗從杯中取出,清水洗去根系附著的培養(yǎng)基,移栽至消毒處理后淋透清水的紅心土或輕基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)杯中,用塑料薄膜和遮陰網(wǎng)進(jìn)行保濕遮陰2?3天后,按常規(guī)方法管護(hù),當(dāng)苗高30cm以上、無(wú)病蟲(chóng)害的4-松油醇型互葉白千層組培苗木可出圃造林。
[0008]以上步驟(2)中所述的潔凈環(huán)境,是指配制培養(yǎng)基專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面及周?chē)僮骺臻g,用75%酒精噴霧消毒;分裝過(guò)程中的其他用具均用0.3%的新潔爾滅浸泡消毒15分鐘,聚乙烯塑料杯為一次性使用。
[0009]以上步驟(2)中所述的抑菌劑成分為:頭孢霉素50?150mg/L,50%的可濕性粉劑多菌靈4?10%,4_松油醇型互葉白千層枝葉浸出液I?5%。
[0010]以上所述的4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液的制備方法為:取一年生4-松油醇型互葉白千層枝葉250g,剪短至5cm小段后加入試劑瓶中,再加入75%的酒精I(xiàn)L并密封,置于4 0C冰箱中浸泡48小時(shí),過(guò)濾獲得浸出液。
[0011]以上步驟(2 )所述改良WPM培養(yǎng)基的組分和體積重量比為:NH4NO3 33Omg/L、CaCl2.2H20 96mg/L、MgS04.7H20370mg/L、KH2P04l70mg/L、Ca(N03)2.4H20180mg/L、K10.83mg/L、MnS04.H2022.4mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L^Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuS04.5H200.025 mg/L^Na2.EDTA37.3mg/L、FeSO4.7H2027.8mg/L、肌醇200mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L、鹽酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L。
[0012]以上步驟(2)所述改良B5培養(yǎng)基的組分和體積重量比為:KNOdSOOmg/UCaCh-SfeO 150mg/L、MgS04.7H20250mg/L、(NH4)2S04l34mg/L、NaH2P04.H20150mg/L、Ca(N03)2.4H20200mg/L、K10.83mg/L、H3B033.0mg/L、MnS04.H2O1mg/L、ZnSCU.7出0 2.0mg/L、Na2Mo04.2H2O0.25 mg/L^CuSO4.5H200.025mg/L、Na2.EDTA37.3mg/L、FeS04.7H20 27.8mg/L、肌醇200mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L、鹽酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L。
[0013]以上步驟(3)所述生根培養(yǎng)的條件為:溫度28±2?30±2°C,光照1500?30001x,每日光照12?16小時(shí)。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果和顯著進(jìn)步:
1、本方法配制的生根培養(yǎng)基不需要經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌,節(jié)省能源降低成本,采用一次性聚乙烯塑料杯作為容器,省去了傳統(tǒng)生根玻璃瓶的購(gòu)置費(fèi)用和清洗的人工費(fèi)用,大幅降低了生產(chǎn)成本。
[0015]2、本方法在WPM和B5培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,通過(guò)優(yōu)化調(diào)整培養(yǎng)基成分,有效降低了松油醇對(duì)生根率的影響,并通過(guò)添加抑菌劑,能有效的將開(kāi)放式生根培養(yǎng)中的污染率控制在10%以下,已達(dá)到組培污染率的可接受范圍,組培繼代芽生根達(dá)到穩(wěn)定、高效。
[0016]3、本方法通過(guò)增加光照促使繼代芽老練壯苗,生根培養(yǎng)周期短,生根培養(yǎng)6?8天開(kāi)始萌發(fā)出根系,生根率達(dá)到97.8?99.5 %,繼續(xù)培養(yǎng)至15天后統(tǒng)計(jì),生根率可達(dá)到100 %。
[0017]4、本方法培育的苗木根系質(zhì)量尚,獲得的生根苗,每株根系數(shù)量4?8條根,單條根粗0.5?1.5mm,當(dāng)單芽生根培養(yǎng)至根系長(zhǎng)度達(dá)到1.5cm后,在室外10?15天的煉苗培養(yǎng)后,根系可伸長(zhǎng)至2?3cm,且每條根上萌發(fā)出須狀側(cè)根,這種根系健壯、發(fā)達(dá)的苗木移栽成活率高,達(dá)到97.4?98.8%,具有較好的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合實(shí)施例,對(duì)本發(fā)明的一種4-松油醇型互葉白千層組培繼代芽的開(kāi)放式生根培養(yǎng)方法進(jìn)一步描述。
[0019]實(shí)施例1:
在南寧3月份按照本發(fā)明的方法進(jìn)行生根培養(yǎng),具體步驟如下:
(1)繼代芽壯苗培養(yǎng):采用常規(guī)繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代芽的增殖培養(yǎng);當(dāng)繼代芽單芽長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm時(shí),增加光照促使單芽老練;
(2)生根培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基配方采用1/2改良WPM培養(yǎng)基附加IBA0.5mg/L、ABT6號(hào)
0.6mg/L、鹿糖 15000mg/L、瓊脂 6.0g/L;
在配制培養(yǎng)基專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi),將實(shí)驗(yàn)臺(tái)面及周?chē)僮骺臻g,用75%酒精噴霧消毒;分裝過(guò)程中的其他用具均用0.3%的新潔爾滅浸泡消毒15分鐘,聚乙烯塑料杯為一次性使用;
取250g—年生4-松油醇型互葉白千層枝葉,剪短至5cm小段后加入試劑瓶中,再加入
1L75%酒精并密封,置于4 0C冰箱中浸泡48小時(shí),過(guò)濾獲得浸出液。
[0020]抑菌劑按照頭孢霉素50mg/L,多菌靈(50 %可濕性粉劑)4%,4-松油醇型互葉白千層枝葉浸出液2%比例配制。
[0021]將培養(yǎng)基按照配方配制好后持續(xù)煮沸20分鐘,調(diào)節(jié)pH值至5.8,加入抑菌劑后混勻,分裝在一次性聚乙烯塑料杯中,每杯用保鮮膜覆蓋并用橡膠圈固定,待降溫凝結(jié)后使用。
[0022](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)繼代芽繼續(xù)培養(yǎng)使芽伸長(zhǎng),選擇長(zhǎng)度1.0cm以上,并且綠色明顯加深,稍木質(zhì)化的單芽在超凈臺(tái)中剪下,接種于步驟(2)中配制好的生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng),培養(yǎng)條件為溫度28 土 2°C,光照1500?25001x,每日光照12小時(shí)。
[0023]培養(yǎng)5天后根部膨大,7天后有根長(zhǎng)出,每株4?8條,生根率98.6%,繼續(xù)培養(yǎng)至15天后統(tǒng)計(jì),生根率100%,污染率2.3%。
[0024](4)煉苗:當(dāng)步驟(3)單芽生根培養(yǎng)至根系長(zhǎng)度達(dá)到1.5cm后,將瓶苗移至室外具有遮陰裝置的大棚中進(jìn)行煉苗,遮陰度要求為75 %,煉苗10天。
[0025](5 )移栽:將步驟(4)煉苗后的小苗從杯中取出,清水洗去根系附著的培養(yǎng)基,移栽至消毒處理后淋透清水的紅心土或輕基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)杯中,用塑料薄膜和遮陰網(wǎng)進(jìn)行保濕遮陰2天后,按常規(guī)方法管護(hù),移栽成活率97.3%。
[0026]以上步驟(2)所述改良WPM培養(yǎng)基的組分和體積重量比為:NH4N03330mg/L,CaCl2.2H20 96mg/L、MgS04.7H20370mg/L^KH2PO4170mg/L^Ca(NO3)2.4H20180mg/L、K10.83mg/L、MnSO4.H2O 22.4mg/L、ZnS04.7H208.6mg/L^Na2MoO4.2H200.25mg/L、CuS04.5H200.025mg/UNa2.EDTA37.3mg/L、FeS04.7H2027.8mg/L、肌醇200mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、鹽酸硫胺素1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L。
[0027]實(shí)施例2:
在南寧9月份按照本發(fā)明的方法進(jìn)行生根培養(yǎng),具體步驟如下: (1)繼代芽壯苗培養(yǎng):采用常規(guī)繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代芽的增殖培養(yǎng);當(dāng)繼代芽單芽長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm時(shí),增加光照促使單芽老練;
(2)生根培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基配方采用4/5改良WPM培養(yǎng)基附加IBA0.7mg/L、ABT6號(hào)
0.2mg/L、鹿糖 15000mg/L、瓊脂 6.0g/L。
[0028]在配制培養(yǎng)基專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi),將實(shí)驗(yàn)臺(tái)面及周?chē)僮骺臻g,用75%酒精噴霧消毒;分裝過(guò)程中的其他用
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