生物學(xué)對(duì)抗福氏耐格里變形蟲的方法，和包含原生動(dòng)物Willaertia magna的消毒劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及對(duì)抗耐格里屬和尤其是福氏耐格里變形蟲種的增殖的方法，除了施加于人或動(dòng)物體的治療方法外，其特征在于它使用原生動(dòng)物Willaertia magna，還涉及包含這種原生動(dòng)物的消毒劑。PTA-782420060821 PTA-782520060821
【專利說(shuō)明】
生物學(xué)對(duì)抗福氏耐格里變形蟲的方法，和包含原生動(dòng)物 Wi I laertia magna的消毒劑
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物學(xué)控制耐格里（Naegleria)屬和尤其是福氏耐格里變形蟲 (Naegleria fowlerKN.f.))的存在及其增殖的新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 福氏耐格里變形蟲是屬于化hlkampfiidae科的非寄生變形蟲。運(yùn)種變形蟲在人類 引起嚴(yán)重的病理性病癥，非常幸運(yùn)的是運(yùn)種病癥極其罕見(jiàn)(2007年檢測(cè)到235例）：原發(fā)性變 形蟲腦膜炎（PAMKCervantes-Sandoval I，2008;Kemble SK，2012;TW，2010;Su MY，2013)。 感染運(yùn)些非寄生變形蟲在用抗生素治療的約一周和幾周內(nèi)具有災(zāi)難性預(yù)后(Su MY,2013)。 對(duì)運(yùn)種感染沒(méi)有真正有效的治療;非常幸運(yùn)地，所述疾病是罕見(jiàn)的且要求一起具備引發(fā)PAM 的特定條件。運(yùn)些特定條件和所需要的接種物在現(xiàn)在仍然未知。然而，一些藥物和抗生素似 乎影響感染的進(jìn)展，例如兩性霉素 B、利福平和咪康挫，其當(dāng)組合時(shí)被證實(shí)對(duì)2個(gè)或3個(gè)個(gè)體 有效。在1992年，文獻(xiàn)報(bào)告僅7例在PAM后被證實(shí)幸存(Gautam化，2012)且僅在從2歲到14歲 的非常年輕的受試者中和治療和感染留下或多或少大量神經(jīng)學(xué)滯后效應(yīng)的受試者中。因此 存活率甚至低于埃博拉病毒感染。因此，監(jiān)控和控制運(yùn)種非寄生變形蟲構(gòu)成越來(lái)越重要的 當(dāng)務(wù)之急。
[0003] 通常，眾所周知福氏耐格里變形蟲在環(huán)境中具有廣泛分布(Madinez AJ，1997)， 因?yàn)檫\(yùn)種變形蟲已從上壤、河水和湖水(Jamerson M，2009)或工業(yè)廢水和生物膜(Goudot 8,2012;5.4.!111*3,2005)中分離，其特征在于它與其他非寄生變形蟲共處。若干可能致病的 細(xì)菌，包括嗜肺軍團(tuán)菌化egionella pneumophila)，具有在非寄生變形蟲中生存和復(fù)制的 成熟機(jī)制化uang SW，2010;De化11日化日日的，2011)。此外，已表明核電站通過(guò)將河水再加熱 若干度極大地促進(jìn)了福氏耐格里變形蟲的發(fā)育。事實(shí)上，福氏耐格里變形蟲是嗜熱性的，其 發(fā)育溫度范圍為25°C到45°C(Visvesvara GS，2007)。
[0004] 邸F，其在法國(guó)運(yùn)營(yíng)超過(guò)11個(gè)核電站，它量化了與水中檢測(cè)到的福氏耐格里變形蟲 的水平有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。為了對(duì)該風(fēng)險(xiǎn)有更好的理解，EDF的研究和調(diào)查部口 W及醫(yī)學(xué)研究部口 計(jì)算了當(dāng)游泳時(shí)死于PAM的風(fēng)險(xiǎn)作為水中福氏耐格里變形蟲的濃度的函數(shù)。該風(fēng)險(xiǎn)可W用 下列方式分解：
[0005] 1次游泳的風(fēng)險(xiǎn)=當(dāng)在水中游泳時(shí)吸入"η"個(gè)福氏耐格里變形蟲的可能性，其中福 氏耐格里變形蟲W濃度"c"(每次游泳吸入10ml的水)存在
[0006] 乘 W
[0007] 當(dāng)已吸入"η"個(gè)福氏耐格里變形蟲時(shí)的死亡概率(根據(jù)動(dòng)物數(shù)據(jù)建模）。
[000引當(dāng)選擇正常對(duì)數(shù)模型時(shí)，其提供最低估計(jì)，且完美符合實(shí)際數(shù)據(jù)化SA，Australia， New Zealand),獲得W下風(fēng)險(xiǎn)：
[0009] 游泳水中N. f.的量η的濃度風(fēng)險(xiǎn)
[0010] 1個(gè)福氏耐格里變形蟲/升，風(fēng)險(xiǎn)= 10-8,即每1億次游泳一次死亡
[0011] 10個(gè)福氏耐格里變形蟲/升，風(fēng)險(xiǎn)= 1.45xl〇-7,即每7000000次游泳一次死亡 [001 ^ 100個(gè)福氏耐格里變形蟲/升，風(fēng)險(xiǎn)=7.24x10-6，即每140000次游泳一次死亡
[0013] 1000個(gè)福氏耐格里變形蟲/升，風(fēng)險(xiǎn)= 1.34xl〇-3,即每746次游泳一次死亡
[0014] 根據(jù)Conseil sup紅ieur d'hygigne publique de France(CSHPF)[法國(guó)公共衛(wèi) 生高級(jí)委員會(huì)]的建議，超過(guò)100個(gè)福氏耐格里變形蟲(N.f.)/升的極限值必須導(dǎo)致禁止游 泳(尤其參見(jiàn)2004年5 月4 日 CSHPF的意見(jiàn)，與2003年抓 F 在 Bugey、Chooz、Dampierre、Golfech 和Nogent的電力生產(chǎn)核電站（CNPE)上進(jìn)行的使用單氯胺的抗變形蟲處理的經(jīng)驗(yàn)反饋有 關(guān))。
[001引在本文中，完全意外地，發(fā)明人已經(jīng)表明，變開(kāi)多蟲屬Willae;rtia magna(W.m.)消除 非寄生福氏耐格里變形蟲。運(yùn)種殺生物作用通過(guò)已經(jīng)證實(shí)的Willaedia magna對(duì)于其他細(xì) 菌性試劑例如細(xì)菌嗜肺軍團(tuán)菌、假單胞菌屬(Pseudomonas)和李斯特氏菌屬化isteria)的 捕食能力來(lái)支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 因此本發(fā)明的主題首先是用于控制耐格里屬和尤其是福氏耐格里變形蟲的增殖 的方法，其使用Willaedia屬原生動(dòng)物，優(yōu)選Willaertia magna。根據(jù)本發(fā)明的方法不包括 施加于人或動(dòng)物體的治療方法。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，通常用Willaedia屬原生動(dòng)物，尤 其是Willa&rtia magna種處理氣流或液流。然而，它也可W是固體表面。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的方法尤其用于消毒衛(wèi)生用水或工業(yè)用水分配網(wǎng)絡(luò)、工廠的冷卻回路 例如核型或空調(diào)網(wǎng)絡(luò)。它可W實(shí)施用于控制水管中、或可W與人或動(dòng)物食品接觸或不接觸 的表面的生物膜的形成。
[0018] 可W將原生動(dòng)物直接添加到待處理的管或網(wǎng)絡(luò)中循環(huán)的水或液體中。也可W將它 們噴霧在待消毒的工業(yè)網(wǎng)絡(luò)、煙畫、工廠中，和在待消毒的工業(yè)表面上，例如W水溶液諸如 氣溶膠的形式。
[0019] 有利地，用于本發(fā)明上下文中的原生動(dòng)物對(duì)應(yīng)于2006年8月21日W保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于2006年8月21日W保藏號(hào)PTA 7825保藏于ATCC的菌株，運(yùn) 兩種菌株^CENTRE NATIONAL DE LA REC肥RC肥 SCIENTIFIQ肥（CNRS)[French 化tional Center for Scientific Research]-3rue Michel Ange-75794PARIS CEDEX 16/France和 UNIV邸SITE LYON ICLAUDE 邸RNA畑[Lyon IClaude Bernard University]-43Boulevard du llNovembre 1918-69622VILLEURBAN肥 Cedex/化ance的名義保藏。
[0020] 對(duì)應(yīng)于W保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于w保藏號(hào)PTA 7825保藏于 ATCC的菌株的屬于Willaedia屬的原生動(dòng)物是本發(fā)明的組成部分。所述保藏的菌株也描述 于PCT國(guó)際申請(qǐng)W02008/043969的公布說(shuō)明書中。
[0021] 因此運(yùn)種原生動(dòng)物可W用于消毒劑，尤其旨在消除福氏耐格里變形蟲和控制福氏 耐格里變形蟲的增殖和污染。
[0022] 此外，本發(fā)明的主題是包含Willaedia屬原生動(dòng)物，尤其是Willaedia magna的 消毒劑。對(duì)應(yīng)于W保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于W保藏號(hào)PTA 7825保藏于 ATCC的菌株的原生動(dòng)物將是優(yōu)選的。有利地，根據(jù)本發(fā)明的消毒劑為例如在蒸饋水中的水 溶液或懸浮液的形式。消毒劑可W是可噴霧形式，例如氣溶膠或任何其他的施用方式。
[0023] 發(fā)明人已經(jīng)通過(guò)比較在Willaedia屬，尤其是Willaedia magna存在和不存在的 情況下福氏耐格里變形蟲的復(fù)制證實(shí)了Willaedia屬原生動(dòng)物，尤其是Willaedia ma即a 對(duì)福氏耐格里變形蟲增殖的抑制活性。發(fā)明人還通過(guò)利用非寄生變形蟲的另一個(gè)種-棘變 形蟲（Acanthamoeba)作為不引起福氏耐格里變形蟲生長(zhǎng)抑制的對(duì)照菌株證實(shí)了通過(guò) Willaertia magna屬抑制運(yùn)種福氏耐格里變形蟲生長(zhǎng)的獨(dú)特性質(zhì)。
[0024] 考慮到不存在福氏耐格里變形蟲的治愈性或預(yù)防性治療的情況下，福氏耐格里變 形蟲對(duì)人的死亡率風(fēng)險(xiǎn)在小于一周內(nèi)大于95%，本發(fā)明是控制運(yùn)種變形蟲攝疫的重要科學(xué) 進(jìn)展，其對(duì)環(huán)境和人具有中性影響。事實(shí)上，EC條例No. 1271/2008目前承認(rèn)，Willaertia magna菌株不在危險(xiǎn)種類中，且沒(méi)有提及任何危險(xiǎn)或警告建議，運(yùn)與目前使用的單氯胺不 同。
[00巧]此外，本發(fā)明設(shè)及根據(jù)本發(fā)明和/或Willaedia屬原生動(dòng)物，尤其是Willaedia magna的消毒劑，W及對(duì)應(yīng)于W保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于W保藏號(hào)PTA 7825保藏于ATCC的菌株的原生動(dòng)物作為耐格里屬的殺生物劑的用途。
[0026] W下實(shí)施例可W闡明本發(fā)明，但決不限制本發(fā)明。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 1.材料和方法
[0028] 1.1所使用的菌株
[0029] -變形蟲:所使用的菌株屬于Ξ個(gè)不同的變形蟲種：
[0030] -福氏耐格里變形蟲(ATCC 30809);
[0031] -卡氏棘變形蟲（Acanthamoeba castellanii(ATCC 30010));
[0032] -Willaertia ma即a(W保藏號(hào)PTA 7824和PTA 7825保藏于ATCC的菌株）
[0033] 將運(yùn)Ξ種菌株在10%胎牛血清存在下在SCGYEM培養(yǎng)基(血清酪蛋白葡萄糖酵母提 取物培養(yǎng)基)上無(wú)菌培養(yǎng)，W每管3ml的比例分配到GREI肥R?管。在維持中，每8-9天將營(yíng)養(yǎng) 體型亞培養(yǎng)。對(duì)于共培養(yǎng)，使用3到4天的亞培養(yǎng)W便正好在指數(shù)生長(zhǎng)期中具備營(yíng)養(yǎng)體。
[0034] SCGYEM培養(yǎng)基按照如下獲得：
[0035] 酪蛋白（MERCK, 1.02244.010)10g
[0036] Na抽P〇4 1.325邑
[0037] Κ出P〇4 0.8邑 [003引葡萄糖2.5g
[0039] 酵母提取物(DIFC0 0127-17-9)5g
[0040] 蒸饋水900ml
[0041] 胎牛血清100ml
[0042] 將2.5ml化0H( IN)、然后將化抽P化和K出？化添加到900ml蒸饋水中。在加熱板上略 微加熱后，在磁力攬拌下逐漸添加酪蛋白。酪蛋白溶解后，加入葡萄糖和酵母提取物。
[0043] 完全溶解后，將培養(yǎng)基在玻璃纖維（SART0RIUS SM 6513400)上、然后在化111膜 (WHATMAN 7190 004)上依次過(guò)濾。然后將培養(yǎng)基等分入玻璃瓶中。將瓶子在120°C下在高壓 滅菌器中滅菌20分鐘。在最終使用和分配培養(yǎng)基之前，在層流凈化罩下W最終容積10%的 比例無(wú)菌添加胎牛血清。
[0044] 1.2.制備Willaedia magna和福氏耐格里變形蟲的儲(chǔ)備懸浮液：
[0045] 各初始變形蟲懸浮液(儲(chǔ)備懸浮液）的制備采用SCGYB1培養(yǎng)基中無(wú)菌培養(yǎng)的各變 形蟲的4個(gè)燒瓶(T 175ml)來(lái)進(jìn)行。在指數(shù)生長(zhǎng)期結(jié)束時(shí)收獲福氏耐格里變形蟲、卡氏棘變 形蟲和Willa&rtia magna的運(yùn)些儲(chǔ)備變形蟲懸浮液，運(yùn)通常在培養(yǎng)開(kāi)始后4至化天獲得。
[0046] 為了增加所收獲的變形蟲的濃度，將燒瓶通過(guò)冰浴5到10分鐘，然后人工攬拌，W 盡可能多地收集變形蟲。
[0047] 合并運(yùn)4個(gè)燒瓶的內(nèi)容物W對(duì)在TH0MA單元上獲得的變形蟲懸浮液計(jì)數(shù)（[C]/ml)。 [004引將變形蟲懸浮液轉(zhuǎn)移入50m] falcon*型管中W通過(guò)isoog離屯、10分鐘來(lái)去除 SCGYEM培養(yǎng)基。用無(wú)菌蒸饋水洗涂?jī)纱蝸?lái)沖洗第一次離屯、產(chǎn)生的變形蟲沉淀，并在1500g離 屯、10分鐘。在2次洗涂結(jié)束時(shí)，將最終沉淀收集在40ml容積的無(wú)菌水中。
[0049] 1.3.闡明Willaedia magna對(duì)福氏耐格里變形蟲（菌株ATCC 30809)的殺生物作 用
[0050] 在包含10ml無(wú)菌PAS^age的變形蟲鹽水)培養(yǎng)基的T 25ml燒瓶中進(jìn)行變形蟲共培 養(yǎng)。將變形蟲共培養(yǎng)的燒瓶W預(yù)先在Malassez血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)的無(wú)菌變形蟲懸浮液的 1 X 105個(gè)Willaedia magna/ml和1 X 105個(gè)福氏耐格里變形蟲/ml的比例接種。通過(guò)將福氏 耐格里變形蟲/Willaertia magna之比固定為1來(lái)進(jìn)行福氏耐格里變形蟲對(duì)Willaedia magna的侵染。將T 25ml燒瓶在30°C的解育器中解育。
[0051 ] PAS培養(yǎng)基按如下獲得：
[0化2]
[0化3]
[0054]用0.22皿過(guò)濾器無(wú)菌過(guò)濾溶液1和2。為了獲得1升PAS培養(yǎng)基:添加5.0ml溶液1和 5.0ml溶液2,然后用無(wú)菌蒸饋水將容積調(diào)節(jié)至1升。
[0化日]將Willaedia magna和福氏耐格里變形蟲對(duì)照變形蟲單培養(yǎng)在T25ml燒瓶中在 10ml滅菌PAS培養(yǎng)基中單獨(dú)培養(yǎng)。
[0化6] 從預(yù)先在Malassez血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)的無(wú)菌變形蟲懸浮液，對(duì)于Willaedia magna對(duì)照，將燒瓶X 105個(gè)Willaedia magna/ml的比例接種，對(duì)于福氏耐格里變形蟲 對(duì)照，將燒瓶W1X105個(gè)福氏耐格里變形蟲/ml的比例接種。將T 25ml燒瓶在30°C的解育器 中解育。
[0057]各條件進(jìn)行Ξ次。Malassez單元上的各計(jì)數(shù)重復(fù)5次。實(shí)驗(yàn)在3個(gè)月時(shí)期內(nèi)重復(fù)Ξ (3)次。
[005引共培養(yǎng)和對(duì)照燒瓶中福氏耐格里變形蟲和Willaedia magna變形蟲的命運(yùn)W下 列方式測(cè)定：
[0059] 福氏耐格里變形蟲侵?jǐn)_后監(jiān)控變形蟲濃度120小時(shí)。在各時(shí)間間隔(在第3小時(shí)，然 后每24小時(shí)），將共培養(yǎng)和對(duì)照燒瓶取樣并檢查兩種變形蟲的細(xì)胞生長(zhǎng)和其形態(tài)學(xué)和動(dòng)態(tài)。 對(duì)于各檢查的燒瓶：
[0060] -在Malassez單元上直接計(jì)數(shù)變形蟲。
[0061] -在120小時(shí)，由于聯(lián)合使用MPN(最大可能數(shù)量)方法，低水平的福氏耐格里變形蟲 不再允許Malassez單元上的可靠計(jì)數(shù)。廣泛用于計(jì)數(shù)變形蟲的該方法具有更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)、 而且能將完整且活的變形蟲與完整但死的變形蟲區(qū)分開(kāi)來(lái)。
[006^ 2.結(jié)果
[0063] 圖1、2和3顯示了共培養(yǎng)(Willaertia magna/福氏耐格里變形蟲)和對(duì)照單培養(yǎng)變 形蟲的實(shí)驗(yàn)。
[0064] 它們顯示了與單培養(yǎng)中變形蟲的各群體的發(fā)展相比，初始的Willaedia/耐格里 屬之比為1的共培養(yǎng)后，Willaertia magna和福氏耐格里變形蟲的各群體的自發(fā)發(fā)展。
[0(?日]圖4a和4b顯示在Willaedia ma即a變形蟲存在下，福氏耐格里變形蟲隨時(shí)間的生 理狀態(tài)。圖4a對(duì)應(yīng)于與Willaedia magna共培養(yǎng)的福氏耐格里變形蟲的快速生理學(xué)降解的 圖像。圖4b對(duì)應(yīng)于闡明Wi 1 laedia magna對(duì)福氏耐格里變形蟲的"死亡之吻"現(xiàn)象的圖像。
[0066] 圖5顯示共培養(yǎng)(Willaertia magna/福氏耐格里變形蟲）和對(duì)照單培養(yǎng)變形蟲的 實(shí)驗(yàn)。
[0067] 在圖1、2和3中，稱為Willaedia magna的帶有菱形點(diǎn)(U)的曲線描述了無(wú)菌PAS培 養(yǎng)基中單獨(dú)的Willa&rtia magna的測(cè)量濃度。
[0068] 稱為福氏耐格里變形蟲的帶有方形點(diǎn)(η)的曲線描述了無(wú)菌PAS培養(yǎng)基中單獨(dú)的 福氏耐格里變形蟲的測(cè)量濃度。
[0069] 稱為W+NF的帶有Ξ角形點(diǎn)（D)的曲線描述了無(wú)菌PAS培養(yǎng)基中與福氏耐格里變形 蟲共培養(yǎng)的WillaeKia magna的測(cè)量濃度。
[0070] 稱為NF+W的帶有叉形點(diǎn)（X)的曲線描述了無(wú)菌PAS培養(yǎng)基中與Willaedia magna 共培養(yǎng)的福氏耐格里變形蟲的測(cè)量濃度。
[0071] 數(shù)據(jù)W在Malassez單元上計(jì)數(shù)的每毫升(ml)完整細(xì)胞的濃度來(lái)表示。
[0072] 在圖4a中，黑色箭頭表示W(wǎng)illaedia magna的存在，白色箭頭表示完整或破碎的 福氏耐格里變形蟲的存在。
[0073] 在圖4b中，黑色箭頭表示W(wǎng)illaedia magna的存在，白色箭頭表示福氏耐格里變 形蟲的存在。白色圓體現(xiàn)福氏耐格里變形蟲細(xì)胞的輪廓。該"死亡之吻"現(xiàn)象已經(jīng)在文獻(xiàn)中 (Berke G.Source Department of Cell Biology, 1995)描述為允許粒酶透過(guò)的接觸，其導(dǎo) 致祀細(xì)胞的調(diào)亡。
[0074] 在圖5中，由菱形點(diǎn)(U)組成的曲線代表卡氏棘變形蟲的單培養(yǎng)。
[0075] 由Ξ角形點(diǎn)(D)組成的曲線A+NF代表與福氏耐格里變形蟲共培養(yǎng)的卡氏棘變形蟲 的濃度。
[0076] 由方形點(diǎn)(η)組成的曲線NF代表福氏耐格里變形蟲的單培養(yǎng)。
[0077] 由叉形(X)組成的曲線NF+A代表與卡氏棘變形蟲共培養(yǎng)的福氏耐格里變形蟲的濃 度。
[007引 2.1 .Willaertia magna完全抑制福氏耐格里變形蟲的生長(zhǎng)
[0079] 如表示與Willaedia magna共培養(yǎng)的福氏耐格里變形蟲的發(fā)展的圖1、2和3的叉 形曲線所示，福氏耐格里變形蟲群體曲線中在約24小時(shí)非常迅速地發(fā)生分離。運(yùn)種福氏耐 格里變形蟲群體的降低僅在Wi 1 laedia magna存在下觀察到。實(shí)驗(yàn)1、2和3(圖1、2和3)中單 培養(yǎng)的福氏耐格里變形蟲的對(duì)照曲線（帶有方形點(diǎn)的曲線)在24小時(shí)均正在生長(zhǎng)。此外，單 培養(yǎng)福氏耐格里變形蟲的水平在24小時(shí)幾乎加倍。
[0080] 值得注意的是，顯微鏡觀察早在24小時(shí)就證實(shí)了與Willaedia magna共培養(yǎng)的福 氏耐格里變形蟲的形態(tài)變化（圖4)。福氏耐格里變形蟲細(xì)胞的生理狀態(tài)從伸展的營(yíng)養(yǎng)體形 式變?yōu)楦鼒A的受應(yīng)力形式，但與抱囊形式仍然不相似。福氏耐格里變形蟲細(xì)胞的內(nèi)部變得 不透明，掩蓋內(nèi)部空泡(變形蟲生長(zhǎng)的標(biāo)記KWillaedia magna存在下福氏耐格里變形蟲 細(xì)胞的尺寸早在共培養(yǎng)的3小時(shí)比單培養(yǎng)中的尺寸小一半（圖4a) sWillaedia magna變形 蟲的捕食方式基于吞隧作用。圖4b表明了在最初24小時(shí)內(nèi)類似于"死亡之吻"的抑制現(xiàn)象。 Willaertia magna對(duì)福氏耐格里變形蟲的吞隧作用確實(shí)發(fā)生了，但僅在共培養(yǎng)25小時(shí)之后 通過(guò)在運(yùn)些吞隧體中存在包含福氏耐格里變形蟲的Willaedia magna來(lái)證實(shí)（數(shù)據(jù)未報(bào) 告)。
[0081] 進(jìn)行的所有實(shí)驗(yàn)證實(shí)在120小時(shí)內(nèi)完全消除福氏耐格里變形蟲的最大抑制效果。 Malassez單元在120小時(shí)的讀數(shù)計(jì)數(shù)了存在且完整的福氏耐格里變形蟲細(xì)胞，但不可W采 用該計(jì)數(shù)區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞。NNA瓊脂+大腸桿菌巧.coli)上的雙倍讀數(shù)可W計(jì)數(shù)僅來(lái)自 營(yíng)養(yǎng)體形式和/或來(lái)自抱囊形式的福氏耐格里變形蟲活細(xì)胞。
[0082] 下表顯示通過(guò)Malassez單元上的讀數(shù)獲得的和采用MPN方法獲得的變形蟲（福氏 耐格里變形蟲)的濃度。
[0083] 將在感染后120小時(shí)取樣的來(lái)自Willaedia magna/福氏耐格里變形蟲共培養(yǎng)的 實(shí)驗(yàn)1、2和3(圖1-3)的各燒瓶的等分試樣接種在覆蓋有一層大腸桿菌的NNA瓊脂上。
[0084] 各種類的濃度的測(cè)定通過(guò)計(jì)數(shù)每個(gè)皿中確定的前部數(shù)目（number of fronts)來(lái) 測(cè)量，并顯示于MPN表中W從其中推斷變形蟲濃度。
[00化]Nf =福氏耐格里變形蟲
[0086] W.m=Willae;rtia ma即a
[0087]
[0088] 該表證實(shí)了 NNA瓊脂上不存在福氏耐格里變形蟲前部，表明在120小時(shí)不存在活的 抱囊或營(yíng)養(yǎng)體形式的福氏耐格里變形蟲。
[0089] 發(fā)明人表明了Willae^ia magna對(duì)耐格里屬和尤其是福氏耐格里變形蟲種的殺 生物作用的不可預(yù)料的性質(zhì)不與其他變形蟲種共有。
[0090] 如圖5所示，與單培養(yǎng)中測(cè)量的這些種的濃度相比，變形蟲屬卡氏棘變形蟲和福氏 耐格里變形蟲的共培養(yǎng)對(duì)兩個(gè)種的各自濃度不造成任何影響。該圖顯示棘變形蟲類型的另 一種變形蟲屬在這兩種變形蟲的共培養(yǎng)期間對(duì)福氏耐格里變形蟲群體的發(fā)展不存在相互 作用。
[0091] 在具有抑制耐格里屬，尤其是福氏耐格里變形蟲種的生長(zhǎng)的特征方面， Willaertia magna是相當(dāng)獨(dú)一無(wú)二的D
[0092] 文獻(xiàn)
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于控制耐格里屬變形蟲，尤其是福氏耐格里變形蟲的增殖的方法，施加于人或動(dòng) 物體的治療方法除外，其特征在于它使用Wi Ilaertia屬原生動(dòng)物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于用Wi Ilaertia屬原生動(dòng)物，尤其是 Wi I laertia magna處理氣流或液流或固體表面。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于這些原生動(dòng)物有利地對(duì)應(yīng)于以保藏號(hào) PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于以保藏號(hào)PTA 7825保藏于ATCC的菌株。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于實(shí)施該方法以用于消毒衛(wèi)生用水 或工業(yè)用水分配網(wǎng)絡(luò)、工業(yè)或核電站的冷卻回路或空調(diào)網(wǎng)絡(luò)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于實(shí)施該方法以用于控制水管中、 或可以與人或動(dòng)物食品接觸或不接觸的表面的生物膜的形成。6. 一種消毒劑，其包含原生動(dòng)物WiIIaertia屬，尤其是WiIlaertia magna種。7. 根據(jù)前述權(quán)利要求所述的消毒劑，其特征在于所述原生動(dòng)物對(duì)應(yīng)于以保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或?qū)?yīng)于以保藏號(hào)PTA 7825保藏于ATCC的菌株。8. 根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的消毒劑，其特征在于其為水溶液或懸浮液形式。9. 屬于Willaertia屬的原生動(dòng)物，其對(duì)應(yīng)于以保藏號(hào)PTA 7824保藏于ATCC的菌株，或 對(duì)應(yīng)于以保藏號(hào)PTA 7825保藏于ATCC的菌株。10. 根據(jù)權(quán)利要求6至8任一項(xiàng)所定義的消毒劑或根據(jù)權(quán)利要求9所定義的原生動(dòng)物作 為耐格里屬的殺生物劑的用途。
【文檔編號(hào)】A01N63/00GK105899078SQ201480058425
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年10月22日
【發(fā)明人】F·普拉松, M·O·馬梅里
【申請(qǐng)人】阿莫巴