一種獼猴桃莖尖脫毒快繁方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，包括以下步驟：(1)材料選擇；(2)材料消毒；(3)剝離莖尖；(4)株系建立與病毒檢測(cè)；(5)快速繁殖。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，能夠有效脫去植株所帶的病毒，從而培育出大量無(wú)病毒植株，能夠顯著增加獼猴桃節(jié)間距離，提高繁殖系數(shù)和移栽后成活，大大滿(mǎn)足獼猴桃快速繁殖的需求。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種獅猴桃莖尖脫毒快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種雜猴桃莖尖脫毒快繁方法，屬于苗木繁育領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雜猴桃屬雜猴桃科(Actinidiaceae)雜猴桃屬(Actinidia)多年生藤本植物，是20 世紀(jì)最早經(jīng)人工馴化栽培的四大野生果樹(shù)之一，其果實(shí)具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和良好的藥用 價(jià)值，尤含大量Vc，享有"Vc之王"美稱(chēng)。紅陽(yáng)雜猴桃屬于中華系列雜猴桃，是雜猴桃家族中 罕見(jiàn)的紅屯、雜猴桃，是在四川稱(chēng)猴桃原產(chǎn)地蒼溪發(fā)現(xiàn)的自然變異品種，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高，且果 肉細(xì)嫩，口感香甜，早果性、豐產(chǎn)性和抗逆性強(qiáng)，深受市場(chǎng)歡迎，具有極高的推廣前景。
[0003] 隨著雜猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，雜猴桃病毒病所造成的嚴(yán)重?fù)p失已引起許多國(guó)家的高度 關(guān)注。雜猴桃病毒病在我國(guó)保存的雜猴桃種質(zhì)資源及栽培雜猴桃植株上發(fā)生較普遍。近些 年，我國(guó)雜猴桃種植面積和產(chǎn)量均呈快速上升趨勢(shì)，同時(shí)病毒病危害也正在加劇。目前世界 上已報(bào)道關(guān)于雜猴桃病毒病有13種，常見(jiàn)的侵染我國(guó)雜猴桃的3種病毒，即雜猴桃病毒A (AcVA)，雜猴桃病毒B(AcVB)和相橘葉斑駁病毒(CLBV)。此外，在中國(guó)田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)雜猴桃 植株上有病毒及類(lèi)似病害的發(fā)生，日本也有雜猴桃嫁接傳播病害的報(bào)道，但均未對(duì)其病原 開(kāi)展研究。解決雜猴桃病毒病危害的可行途徑就是進(jìn)行病毒脫除，生產(chǎn)脫毒雜猴桃種苗，W 降低病毒病對(duì)雜猴桃大面積種植帶來(lái)的危害。
[0004] 目前，現(xiàn)有莖尖脫毒技術(shù)中，仍存在一些缺陷，如節(jié)間距離較短，繁殖系數(shù)較低，成 活率低等，無(wú)法滿(mǎn)足快速繁殖的需求，且沒(méi)有設(shè)及雜猴桃莖尖脫毒的相關(guān)技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有育苗技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種雜猴桃莖尖 脫毒快繁方法。
[0006] 技術(shù)方案:為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種雜猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征 在于，包括W下步驟：
[0007] (1)材料選擇:篩選健壯的雜猴桃植株，做好標(biāo)記，剪取l-2cm長(zhǎng)的頂芽，備用；
[000引（2)材料消毒:將所得頂芽先進(jìn)行清洗，切去完全展開(kāi)的葉片，然后在無(wú)菌操作臺(tái) 下用75%的乙醇浸泡20-30S，無(wú)菌水沖洗一遍，然后用0.1%的化(：12浸泡5-6111111，然后用無(wú) 菌水沖洗多遍；
[0009] (3)剝離莖尖:取步驟(2)處理后的頂芽，在解剖鏡下無(wú)菌剝離帶1-2個(gè)葉原基的莖 尖作為外植體，形態(tài)為突起態(tài)，將莖尖接入培養(yǎng)基進(jìn)行接種培養(yǎng)，控制溫度和光照，W獲得 再生植株；
[0010] (4)株系建立與病毒檢測(cè):將步驟(3)中獲得的植株轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基用于株系的建 立，等苗長(zhǎng)至2-3cm高時(shí)，采用化ISA法進(jìn)行病毒檢測(cè)；
[0011] (5)快速繁殖:病毒檢測(cè)合格后，將步驟(4)中檢測(cè)合格的無(wú)病毒苗進(jìn)行脫毒苗擴(kuò) 繁，采用繁殖培養(yǎng)基，控制溫度和光照，即可獲得脫毒苗。
[0012]作為優(yōu)選，所述雜猴桃為紅陽(yáng)雜猴桃。
[OOU]作為另一種優(yōu)選，步驟(3)中所述莖尖大小為0.15-0.3mm。
[0014] 作為另一種優(yōu)選，步驟（3)中所述培養(yǎng)基的成分為：MS+6-BAl-3mg/L+GA3〇.l- 0.3mg/L，瓊脂 6g/L，薦糖25g/L，抑為5.8。
[0015] 作為另一種優(yōu)選，步驟(3)中所述控制溫度和光照為:溫度25-27Γ，光照強(qiáng)度為 1500-2000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為12-1地。
[0016] 作為另一種優(yōu)選，步驟(4)中所述新的培養(yǎng)基為:MS+6-BAl-2mg/L+NAA0.1-0.3mg/ L，瓊脂 6g/L，薦糖30g/L，pH為5.8。
[0017] 作為另一種優(yōu)選，步驟(5)中所述繁殖培養(yǎng)基為:MS+6-BAl-3mg/L+NAA0.1-0.5mg/ L，瓊脂 6g/L，薦糖30g/L，pH為5.8。
[0018] 作為另一種優(yōu)選，步驟(5)中所述控制溫度和光照為:溫度25-27Γ，光照強(qiáng)度為 2000-3000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為16h。
[0019] 有益效果:相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明雜猴桃莖尖脫毒快繁方法，能夠有效脫去植株 所帶的病毒，從而培育出大量無(wú)病毒植株，能夠顯著增加雜猴桃節(jié)間距離，提高繁殖系數(shù)和 移栽后成活，大大滿(mǎn)足雜猴桃快速繁殖的需求。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 根據(jù)下述實(shí)施例，可W更好地理解本發(fā)明。而本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例 所描述的具體試驗(yàn)結(jié)果僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所描述的本 發(fā)明。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] (1)材料選擇:于3月份從雜猴桃果園篩選健壯的紅陽(yáng)雜猴桃植株，做好標(biāo)記，剪取 l-2cm長(zhǎng)的頂芽，備用；
[0023] (2)材料消毒:先在自來(lái)水下用流水沖洗2小時(shí)，切去完全展開(kāi)的葉片，然后在無(wú)菌 操作臺(tái)下用75%的乙醇浸泡20 S，無(wú)菌水沖洗一遍，然后用0.1 %的化C12浸泡5min，然后用 無(wú)菌水沖洗4遍；
[0024] (3)剝離莖尖:在解剖鏡下從(2)中獲取的頂芽中無(wú)菌剝離帶1-2個(gè)葉原基的莖尖 作為外植體，莖尖大小為0.15-0.3111111，形態(tài)為突起態(tài)，將莖尖接入培養(yǎng)基(15+6-841111旨/1+ GA30 . Img/L，瓊脂6g/L，薦糖25g/L，抑5.8)進(jìn)行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度25-27°C，光照強(qiáng) 度為1500LUX，每天光照時(shí)數(shù)為12h，W獲得再生植株；
[0025] (4)株系建立與病毒檢測(cè):將步驟(3)中獲得的植株轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)(MS+6-BAlmg/L+ NAAO.lmg/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，pH5.8)用于株系的建立，等苗長(zhǎng)至2-3cm高時(shí)，采用 ELISA法進(jìn)行病毒檢測(cè)；
[0026] (5)快速繁殖:病毒檢測(cè)合格后，將步驟(4)中檢測(cè)合格的無(wú)病毒苗進(jìn)行脫毒苗擴(kuò) 繁，繁殖培養(yǎng)基:MS+6-BAlmg/L+NAAO. Img/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，抑5.8;培養(yǎng)條件為溫度 25-27°C，光照強(qiáng)度為2000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為16h，即可獲得脫毒苗。
[0027] 實(shí)施例2
[0028] (1)材料選擇:于3月份從雜猴桃果園篩選健壯的紅陽(yáng)雜猴桃植株，做好標(biāo)記，剪取 l-2cm長(zhǎng)的頂芽，備用；
[0029] (2)材料消毒:先在自來(lái)水下用流水沖洗2小時(shí)，切去完全展開(kāi)的葉片，然后在無(wú)菌 操作臺(tái)下用75 %的乙醇浸泡30s，無(wú)菌水沖洗一遍，然后用0.1 %的化Cl2浸泡6min，然后用 無(wú)菌水沖洗6遍；
[0030] (3)剝離莖尖:在解剖鏡下從(2)中獲取的頂芽中無(wú)菌剝離帶1-2個(gè)葉原基的莖尖 作為外植體，莖尖大小為0.15-0.3111111，形態(tài)為突起態(tài)，將莖尖接入培養(yǎng)基(15+6-843111旨/1+ GA30.3mg/L，瓊脂6g/L，薦糖25g/L，抑5.8)進(jìn)行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度25-27°C，光照強(qiáng) 度為2000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為14h，W獲得再生植株；
[0031] (4)株系建立與病毒檢測(cè):將步驟(3)中獲得的植株轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)(MS+6-BA2mg/L+ NAA0.3mg/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，pH5.8)用于株系的建立，等苗長(zhǎng)至2-3cm高時(shí)，采用 ELISA法進(jìn)行病毒檢測(cè)；
[0032] (5)快速繁殖:病毒檢測(cè)合格后，將步驟(4)中檢測(cè)合格的無(wú)病毒苗進(jìn)行脫毒苗擴(kuò) 繁，繁殖培養(yǎng)基:MS+6-BA3mg/L+NAA0.5mg/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，P冊(cè).8;培養(yǎng)條件為溫度 25-27°C，光照強(qiáng)度為3000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為16h，即可獲得脫毒苗。
[0033] 實(shí)施例3
[0034] (1)材料選擇:于3月份從雜猴桃果園篩選健壯的紅陽(yáng)雜猴桃植株，做好標(biāo)記，剪取 l-2cm長(zhǎng)的頂芽，備用；
[0035] (2)材料消毒:先在自來(lái)水下用流水沖洗2小時(shí)，切去完全展開(kāi)的葉片，然后在無(wú)菌 操作臺(tái)下用75%的乙醇浸泡25s，無(wú)菌水沖洗一遍，然后用0.1 %的化Cl2浸泡5.5min，然后 用無(wú)菌水沖洗5遍；
[0036] (3)剝離莖尖:在解剖鏡下從(2)中獲取的頂芽中無(wú)菌剝離帶1-2個(gè)葉原基的莖尖 作為外植體，莖尖大小為0.15-0.3111111，形態(tài)為突起態(tài)，將莖尖接入培養(yǎng)基(15+6-842111旨/1+ GA30.2mg/L，瓊脂6g/L，薦糖25g/L，抑5.8)進(jìn)行接種培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度25-27°C，光照強(qiáng) 度為1800LUX，每天光照時(shí)數(shù)為13h，W獲得再生植株；
[0037] (4)株系建立與病毒檢測(cè):將步驟(3)中獲得的植株轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)(MS+6-BA1.5mg/ L+NAA0.2mg/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，抑5.8)用于株系的建立，等苗長(zhǎng)至2-3。111高時(shí)，采用 ELISA法進(jìn)行病毒檢測(cè)；
[0038] (5)快速繁殖:病毒檢測(cè)合格后，將步驟(4)中檢測(cè)合格的無(wú)病毒苗進(jìn)行脫毒苗擴(kuò) 繁，繁殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2mg/L+NAA0.3mg/L，瓊脂6g/L，薦糖30g/L，P冊(cè).8;培養(yǎng)條件為溫度 25-27°C，光照強(qiáng)度為2500LUX，每天光照時(shí)數(shù)為16h，即可獲得脫毒苗。
[0039] 實(shí)驗(yàn)例本發(fā)明方法所得快繁苗考察
[0040] 對(duì)照1組與本發(fā)明實(shí)施例3方法相同，不同之處僅在于去掉步驟(2)中乙醇浸泡的 步驟，所得快繁苗；
[0041] 對(duì)照2組與本發(fā)明實(shí)施例3方法相同，不同之處僅在于選用馬鈴馨植株，所得快繁 苗；
[0042] 實(shí)施例1、2和3組分別采用本發(fā)明實(shí)施例1、2和3方法，所得快繁苗；
[0043] 將各組快繁苗移栽，在同樣的條件下培養(yǎng)，考察結(jié)果見(jiàn)下表1。
[0044] 表1各方法所得快繁苗考察結(jié)果
[0045]
[0046] 注:與對(duì)照組相比較，沖<0.05
[0047] 由上表1結(jié)果可得，與對(duì)照組相比較，本發(fā)明莖尖脫毒方法，能夠顯著增加雜猴桃 莖尖的成活率，提高脫毒率和移栽成活率，特別適用于紅陽(yáng)雜猴桃的莖尖脫毒快繁，能大大 滿(mǎn)足雜猴桃快速繁殖的需求。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 材料選擇:篩選健壯的獼猴桃植株，做好標(biāo)記，剪取l-2cm長(zhǎng)的頂芽，備用； (2) 材料消毒:將所得頂芽先進(jìn)行清洗，切去完全展開(kāi)的葉片，然后在無(wú)菌操作臺(tái)下用 75 %的乙醇浸泡20-30s，無(wú)菌水沖洗一遍，然后用0.1 %的HgCl2浸泡5-6min，然后用無(wú)菌水 沖洗多遍； (3) 剝離莖尖:取步驟(2)處理后的頂芽，在解剖鏡下無(wú)菌剝離帶1-2個(gè)葉原基的莖尖作 為外植體，形態(tài)為突起態(tài)，將莖尖接入培養(yǎng)基進(jìn)行接種培養(yǎng)，控制溫度和光照，以獲得再生 植株； (4) 株系建立與病毒檢測(cè)：將步驟(3)中獲得的植株轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基用于株系的建立， 等苗長(zhǎng)至2-3cm高時(shí)，采用ELISA法進(jìn)行病毒檢測(cè)； (5) 快速繁殖:病毒檢測(cè)合格后，將步驟(4)中檢測(cè)合格的無(wú)病毒苗進(jìn)行脫毒苗擴(kuò)繁，采 用繁殖培養(yǎng)基，控制溫度和光照，即可獲得脫毒苗。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，所述獼猴桃為紅陽(yáng)獼 猴桃。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(3)中所述莖尖 大小為 0.15_0.3mm。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(3)中所述培養(yǎng) 基的成分為:MS+6-BAl-3mg/L+GA 30 · 1-0 · 3mg/L，瓊脂6g/L，蔗糖 25g/L，pH為5 · 8。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(3)中所述控制 溫度和光照為:溫度25-27°C，光照強(qiáng)度為1500-2000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為12-14h。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(4)中所述新的 培養(yǎng)基為:MS+6-BAl-2mg/L+NAA0 · 1-0 · 3mg/L，瓊脂 6g/L，蔗糖30g/L，pH為5 · 8。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述繁殖 培養(yǎng)基為:MS+6-BAl-3mg/L+NAA0 · 1-0 · 5mg/L，瓊脂 6g/L，蔗糖30g/L，pH為5 · 8。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獼猴桃莖尖脫毒快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述控制 溫度和光照為:溫度25-27°C，光照強(qiáng)度為2000-3000LUX，每天光照時(shí)數(shù)為16h。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105918130SQ201610353500
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年5月25日
【發(fā)明人】王姍, 鮑華鵬, 鮑榮靜, 雷武生, 王全智
【申請(qǐng)人】江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院