一種山蘭種子的萌發(fā)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種山蘭種子的萌發(fā)方法。該萌發(fā)方法包括：將山蘭種子加入種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)；種子萌發(fā)培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基、NAA、6?BA。本發(fā)明提供的萌發(fā)方法可有效促進(jìn)山蘭種子的萌發(fā)。
【專利說(shuō)明】
一種山蘭種子的萌發(fā)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種山蘭種子的萌發(fā)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 山蘭Oreorchis patens(Lindl · )Lindl ·是蘭科山蘭屬多年生草本植物，廣泛分布 于我國(guó)西南、華中、西北和東北各地，其干燥球莖入藥，甘、辛，寒，有小毒。具有滋陰清肺、化 痰止咳的功效，用于癰疳瘡腫，瘰疬，無(wú)名腫毒，常作山慈菇習(xí)用品入藥。
[0003] 山蘭的植物學(xué)特征：山蘭須狀根聚生于球莖底部和根狀莖相連的球莖底部，球莖 卵球形、近橢圓形或長(zhǎng)錐形，有2圈環(huán)紋，具3節(jié)，常2~5個(gè)相連生于匍匐狀短根狀莖上，外被 撕裂成纖維狀的鞘。葉片1~2枚，生于球莖頂端，草質(zhì)，縱葉脈6條，線形或狹披針形，葉長(zhǎng)13 ~32cm?；ㄝ銖那蚯o第一節(jié)側(cè)面發(fā)出，直立，長(zhǎng)22~40cm，中下部有2~3枚筒狀鞘;多花排成 10~16cm長(zhǎng)的總狀花序，疏生21~34朵花，花黃褐色至淡黃色。蒴果呈豆莢形，長(zhǎng)約1.0~ 2.5cm，種子細(xì)小極多，約2000~2500粒，種子棕色，長(zhǎng)扁梭形，長(zhǎng)0.8mm，寬0.2mm。
[0004] 山蘭的繁殖特點(diǎn)：山蘭有有性繁殖和分生繁殖兩種繁殖方式。和其它蘭科植物一 樣，種子的萌發(fā)需要共生菌的參與，種子在第一年10月份成熟后蒴果開(kāi)裂落地，第二年4月 下旬在共生菌參與下萌發(fā)形成原球莖，愈傷狀原球莖不斷呈叉狀分支分生多級(jí)，呈扇面狀， 外形似姜，長(zhǎng)3~4cm，寬4~7cm，老的部分至新生部分顏色由土黃色漸變?yōu)榘咨?，頂端分?旺盛，當(dāng)原球莖分生至4~6級(jí)時(shí)，原球莖頂端停止分生，在第三年7月上旬分化產(chǎn)生1片葉子 長(zhǎng)出地面，根毛開(kāi)始生長(zhǎng)，當(dāng)葉片長(zhǎng)到一定大小時(shí)，葉片下端與原球莖相連處開(kāi)始膨大，形 成小球莖，小球莖不斷膨大，第四年長(zhǎng)到一定大小的球莖5月上旬開(kāi)始抽葶，花葶露出地面 并開(kāi)花結(jié)果，7月上旬橫走莖分化產(chǎn)生的葉片長(zhǎng)出地面，形成新生植株，新生植株地下部分 圍繞橫走莖產(chǎn)生須根，并且新生植株根部膨大形成新的球莖。在同一個(gè)球莖上每年可產(chǎn)生1 ~3個(gè)新生球莖。
[0005] 從2007年以來(lái)，山蘭用量增加，價(jià)格上升，受利益驅(qū)動(dòng)，野生山蘭遭到掠奪式采挖， 資源遭受毀滅性破壞，被列為吉林省三級(jí)保護(hù)植物，開(kāi)展人工栽培是解決這一矛盾的根本 途徑，種苗來(lái)源成為制約山蘭規(guī)模化栽培的關(guān)鍵。由于山蘭自然繁殖困難，繁殖系數(shù)低，嚴(yán) 重制約了山蘭的擴(kuò)大生產(chǎn)。目前，還未有報(bào)道涉及能夠有效促進(jìn)山蘭種子萌發(fā)的研究。因 此，急需提供一種可有效促進(jìn)山蘭種子萌發(fā)的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明提供了一種山蘭種子的萌發(fā)方法。該萌發(fā)方法可有效促進(jìn)山蘭 種子的萌發(fā)。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種山蘭種子的萌發(fā)方法，包括:將山蘭種子加入種子萌發(fā)培養(yǎng)基 中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng);種子萌發(fā)培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基、NAA、6-BA。
[0009] 萘乙酸，（I-Naphthaleneacetic acid，簡(jiǎn)稱NAA)，是一種有機(jī)化合物，性質(zhì)穩(wěn)定， 但易潮解，見(jiàn)光變色，應(yīng)避光保存，萘乙酸分α型和β型，α型活力比β型強(qiáng)，通常所說(shuō)的萘乙酸 即指α型。熔點(diǎn)為134.5-135.5°C。不溶于水，微溶于熱水，易溶于乙醇、乙醚、丙酮、苯和醋酸 及氯仿。萘乙酸鈉鹽能溶于水，在一般有機(jī)溶劑中穩(wěn)定。萘乙酸系萘類具有生長(zhǎng)素類活性的 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，由根、莖、葉吸收。萘乙酸廣泛用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)、蔬菜、花卉、果樹(shù)等領(lǐng)域，誘 發(fā)不定根形成，提高樹(shù)木扦插成活率，提高座果率，防止采前落果。
[0010] 6-BA是6-芐氨基腺嘌呤，別名：6_芐氨基嘌呤、細(xì)胞分裂素，英文通用名：6-Benzylaminopurine，分子式{^ΗιιΝδΑ-ΒΑ具有高效、穩(wěn)定、廉價(jià)和易于使用等特點(diǎn)，因而被 廣泛采用，并且是組織培養(yǎng)者最喜愛(ài)的細(xì)胞分裂素。BA的主要作用是促進(jìn)芽的形成，也可以 誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生?？捎糜谔岣卟枞~、煙草的質(zhì)量及產(chǎn)量，蔬菜、水果的保鮮和無(wú)根豆芽的 培育，明顯提高果品及葉片的品質(zhì)。
[0011]作為優(yōu)選，種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度為0.1~1.0 mg/L，6-BA的濃度為0.5~ 5·Omg/L〇
[0012] 優(yōu)選地，種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度為0.5mg/L，6-BA的濃度為2. Omg/L。
[0013] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度為0. lmg/L，6-BA的 濃度為〇.5mg/L。
[0014] 在本發(fā)明提供的另一些實(shí)施例中，種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度為1.0mg/L，6-BA 的濃度為5 .Omg/L。
[0015] 作為優(yōu)選，基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。由于山蘭種子需要60d才能萌發(fā)，萌發(fā)后需要 IOOd培養(yǎng)才能完成胚的分化，且山蘭種子細(xì)小，繼代操作不便，需要在同一培養(yǎng)基里面長(zhǎng)時(shí) 間培養(yǎng)，培養(yǎng)基水分蒸發(fā)和外植體分泌物使培養(yǎng)基酸堿度變化、顏色變褐，阻礙種子發(fā)育， 因此需要選用酸堿緩沖能力強(qiáng)的MS培養(yǎng)基。
[0016] 作為優(yōu)選，種子萌發(fā)培養(yǎng)基還包括活性炭?；钚蕴靠捎行Х乐古囵B(yǎng)基顏色變褐阻 礙種子發(fā)育。
[0017]作為優(yōu)選，活性炭在種子萌發(fā)培養(yǎng)基中的添加量為1~3g/L。
[0018] 優(yōu)選地，活性炭在種子萌發(fā)培養(yǎng)基中的添加量為2g/L。
[0019] 作為優(yōu)選，萌發(fā)培養(yǎng)的溫度為20~25°C。
[0020] 在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，萌發(fā)培養(yǎng)的溫度為20~24°C。
[0021] 作為優(yōu)選，萌發(fā)培養(yǎng)的空氣濕度為65 %~75 %。
[0022] 作為優(yōu)選，在山蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)過(guò)程中，在山蘭種子萌發(fā)之前采用黑暗條件進(jìn)行 培養(yǎng);待山蘭種子萌發(fā)之后進(jìn)行光照培養(yǎng)。
[0023] 作為優(yōu)選，光照培養(yǎng)的光暗周期為12h/12h。
[0024] 作為優(yōu)選，光照培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為小于等于20001x。
[0025] 作為優(yōu)選，光照培養(yǎng)采用逐漸增加光照的方式進(jìn)行培養(yǎng)。種子萌發(fā)后進(jìn)行光照培 養(yǎng)，逐漸增加光照強(qiáng)度，可避免突然強(qiáng)光照射造成幼胚褐化。
[0026]在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，逐漸增加光照的方式具體為:501x培養(yǎng)15d至幼胚 呈淺綠色，再增加至1000 Ix培養(yǎng)15d至幼胚芽綠色，然后增加至20001x正常培養(yǎng)。
[0027] 作為優(yōu)選，在萌發(fā)培養(yǎng)之前還包括對(duì)山蘭種子進(jìn)行消毒的操作。
[0028] 優(yōu)選地，消毒為：山蘭種子先用酒精消毒，再用升汞消毒。
[0029]在本發(fā)明提供的一些實(shí)施例中，山蘭種子用75%酒精消毒50s，無(wú)菌水沖洗5次， 0.15 %升萊連續(xù)消毒2次，時(shí)間分別為4min、6min，無(wú)菌水沖洗5次。
[0030] 本發(fā)明提供了一種山蘭種子的萌發(fā)方法。該萌發(fā)方法包括:將山蘭種子加入種子 萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng);種子萌發(fā)培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基、NAA、6-BA。本發(fā)明至少具有 如下有益效果之一：
[0031] 1、本發(fā)明提供的萌發(fā)方法可有效促進(jìn)山蘭種子的萌發(fā)，萌發(fā)率與采集種子時(shí)種子 的成熟度及生理狀況有關(guān)，在本實(shí)施例中萌發(fā)率可達(dá)96.57 %~99.14;
[0032] 2、NAA和6-BA含量組合對(duì)球莖的不同發(fā)育途徑誘導(dǎo)效果顯著，NAA含量降低利于原 球莖分化，6-BA含量的適當(dāng)增加利于橫走莖分化，當(dāng)NAA 0.5mg/L+6-BA 2. Omg/L時(shí)，對(duì)球莖 的三種發(fā)育途徑均有較好的誘導(dǎo)效果；
[0033] 3、由于山蘭種子需要長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)，MS培養(yǎng)基酸堿緩沖能力強(qiáng)，可減緩培養(yǎng)基的酸 堿變化，防止培養(yǎng)基在短時(shí)間內(nèi)酸堿變化較大阻礙種子發(fā)育；
[0034] 4、本發(fā)明先采用黑暗條件對(duì)山蘭種子進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，種子萌發(fā)之后再采用逐漸增 加光照強(qiáng)度的方式進(jìn)行光照培養(yǎng)，可有效提高山蘭種子萌發(fā)率。
【附圖說(shuō)明】
[0035] 圖1示山蘭種子結(jié)構(gòu)和種胚萌發(fā)階段;其中1示山蘭種子外形;2示無(wú)胚乳種子;3示 胚細(xì)胞吸水膨脹;4示心形胚;5示魚(yú)雷形胚;6-8示子葉胚的形成;9示原球莖;10示球莖；
[0036] 圖2示山蘭種子自然萌發(fā)過(guò)程;其中1示第1年播種的山蘭種子;2示山蘭根際共生 菌絲;3示播種第2年原球莖產(chǎn)生;4示第3年原球莖分化出1年生植株。
【具體實(shí)施方式】
[0037] 本發(fā)明公開(kāi)了一種山蘭種子的萌發(fā)方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適 當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō) 是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn) 行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用 進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0038]培養(yǎng)條件、計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)和統(tǒng)計(jì)方法：
[0039]無(wú)特殊說(shuō)明情況下，用于山蘭種子萌發(fā)的培養(yǎng)室溫度為22±2°C，空氣濕度65%-75%，光暗周期為12h/12h;
[0040]以肉眼能觀察到白點(diǎn)為種子萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，此時(shí)種子突破種皮，在顯微鏡下為心形胚； [00411試驗(yàn)結(jié)果用SAS 8.0軟件分析。
[0042] 本發(fā)明提供的一種山蘭種子的萌發(fā)方法中所用種子、球莖、試劑等均可由市場(chǎng)購(gòu) 得。
[0043] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 本實(shí)施例通過(guò)對(duì)影響球莖不同發(fā)育途徑激素搭配的研究和影響種子無(wú)菌萌發(fā)的 培養(yǎng)基和光照條件的研究得出適宜種子無(wú)菌萌發(fā)的條件，并通過(guò)對(duì)種子萌發(fā)過(guò)程中胚形態(tài) 變化的研究，闡明種子萌發(fā)過(guò)程中6個(gè)階段的形態(tài)特征。
[0046] 材料:試驗(yàn)材料采集于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所山蘭栽培基地，球莖采集挖于 2014年9月15日，選取1年生球莖，除去泥土、纖維外殼，用鋒利刀片貼球莖切去須根、葉和花 葶，選取外表光滑、無(wú)腐爛、黑斑的球莖為試驗(yàn)材料。蒴果采集于2015年8月14日和8月27日， 選取外形飽滿光滑完整、顏色淺綠微黃、無(wú)蟲(chóng)咬、缺刻、扭曲和黑斑的朔果為試驗(yàn)材料，用剪 刀貼花葶將蒴果剪下，放入冰盒中，避免擠破蒴果和脫水。
[0047] 材料消毒和接種:球莖和蒴果分別用洗衣粉水浸泡5-10min，置自來(lái)水下沖洗8h， 在無(wú)菌條件下，球莖用75%酒精消毒50s，無(wú)菌水沖洗5次，0.3%升汞連續(xù)消毒2次(4min+ 8min)，無(wú)菌水沖洗5次，球莖2/3埋入添加0.2%活性炭的1/4MS培養(yǎng)基中弱光(401x)培養(yǎng)， 72 h后使球莖全部露出培養(yǎng)基繼續(xù)弱光培養(yǎng)2周至球莖表面淺綠色，逐漸增加光照強(qiáng)度至 200011。蒴果用75%酒精消毒5〇8，無(wú)菌水沖洗5次，0.15%升萊連續(xù)消毒2次(4111；[11+6111；[11)， 無(wú)菌水沖洗5次，5個(gè)蒴果為1組，將蒴果剖開(kāi)，種子混勻后平均撒入5個(gè)培養(yǎng)瓶中并搖勻，每 瓶約35粒種子。
[0048] 然后，本申請(qǐng)就激素組合對(duì)球莖發(fā)育途徑的影響、MS培養(yǎng)基鹽含量對(duì)種子萌發(fā)的 影響、光照強(qiáng)度對(duì)種子萌發(fā)的影響進(jìn)行了研究，并觀察了種子萌發(fā)過(guò)程形態(tài)變化。具體試驗(yàn) 方法及結(jié)果如下：
[0049] I、NAA和6-BA含量組合對(duì)球莖發(fā)育途徑的影響
[0050] 將球莖接種于添加0.2 %活性炭的1/4MS培養(yǎng)基中，分別加入NAA 0 . lmg/L+6-BA 0.5mg/L、NAA 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L、NAA 1.0mg/L+6-BA 5.0mg/L，每處理3重復(fù)，每重復(fù) 30個(gè)球莖，弱光培養(yǎng)60d后統(tǒng)計(jì)原球莖、橫走莖和正常發(fā)育球莖的誘導(dǎo)率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。 [0051 ] 表1NAA和6-BA含量組合對(duì)球莖發(fā)育途徑的影響
[0053] 注：同列內(nèi)無(wú)相同大寫字母表示差異極顯著(P〈0.01)，小寫字母表示差異顯著(P〈 0.05)〇
[0054] 表1試驗(yàn)結(jié)果表明，NAA和6-BA含量組合對(duì)球莖的不同發(fā)育途徑誘導(dǎo)效果顯著，NAA 含量降低利于原球莖分化，6-BA含量的適當(dāng)增加利于橫走莖分化，當(dāng)NAA 0.5mg/L+6-BA 2 · Omg/L時(shí)，對(duì)球莖的三種發(fā)育途徑均有較好的誘導(dǎo)效果。因此，NAA 0 · 5mg/L+6-BA 2 · Omg/ L組合可作為山蘭種子無(wú)菌萌發(fā)的激素條件。
[0055] 2、MS培養(yǎng)基鹽含量對(duì)種子萌發(fā)的影響
[0056] 將種子接撒播于添加 NAA 0.5mg/L+6-BA 2.〇11^/1的]\^、1/215和1/4]\^培養(yǎng)基中， 每處理3重復(fù)，每重復(fù)15瓶，弱光培養(yǎng)160d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)個(gè)數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
[0057]表2MS培養(yǎng)基鹽含量對(duì)種子萌發(fā)數(shù)的影響
[0059] 表2試驗(yàn)結(jié)果表明，種子在MS和1/2MS培養(yǎng)基中萌發(fā)數(shù)均高于1/4MS，且達(dá)到顯著水 平，種子在1/2MS培養(yǎng)基萌發(fā)數(shù)高于1/4MS，但差異不顯著，由于山蘭種子萌發(fā)需要約60d時(shí) 間，萌發(fā)后需要生長(zhǎng)IOOd時(shí)間才能繼代培養(yǎng)，且山蘭種子細(xì)小，繼代操作不便，需要在同一 培養(yǎng)基里面長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)，培養(yǎng)基水分蒸發(fā)和外植體分泌物使培養(yǎng)基酸堿度變化、顏色變褐， 阻礙種子發(fā)育，因此，萌發(fā)數(shù)稍低但是酸堿緩沖能力強(qiáng)的MS培養(yǎng)基更適合作為種子萌發(fā)的 培養(yǎng)基。
[0060] 3、光照強(qiáng)度對(duì)種子萌發(fā)的影響
[0061 ] 將種子撒播于MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L的培養(yǎng)基中，每處理3重復(fù)，每重復(fù) 15瓶，分別置于光照強(qiáng)度為01x、401X、20001X條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)170d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)個(gè)數(shù)。試驗(yàn) 結(jié)果見(jiàn)表3。
[0062] 表3光照強(qiáng)度對(duì)種子萌發(fā)的影響
[0064]表3試驗(yàn)結(jié)果表明，光照強(qiáng)度對(duì)種子萌發(fā)影響顯著，種子萌發(fā)數(shù)隨光照減弱而增 加，完全黑暗條件下種子萌發(fā)效果最好，光照對(duì)植物形態(tài)建成具有重要作用，黑暗條件利于 萌發(fā)種子向原球莖途徑分化，光照條件利于萌發(fā)種子向球莖途徑發(fā)育，根據(jù)培養(yǎng)需要及時(shí) 進(jìn)行繼代培養(yǎng)。
[0065] 4、種子萌發(fā)過(guò)程形態(tài)變化
[0066] 種子內(nèi)部結(jié)構(gòu)用石蠟切片方法進(jìn)行觀察，外部形態(tài)和萌發(fā)過(guò)程用光學(xué)顯微鏡觀 察。
[0067] 顯微鏡下山蘭種子帶翼長(zhǎng)約800μηι，寬約44μηι，種子居中，長(zhǎng)約ΙΙΙμηι，石錯(cuò)切片顯 示種子為無(wú)胚乳種子，僅有分化不完全的胚細(xì)胞，接種60d后種子開(kāi)始萌發(fā)，萌發(fā)速度不同 步，160d左右達(dá)到最大萌發(fā)數(shù)，發(fā)育速度快的種胚形成原球莖并分化出球莖，弱光條件下種 子萌發(fā)過(guò)程中形態(tài)變化如圖1所示，分為6個(gè)階段：
[0068] 第1階段，種子胚性細(xì)胞先吸水膨脹，變?yōu)辄S綠色，種子仍被種皮包被(圖1-3);
[0069] 第2階段，種子發(fā)育成心形胚，變?yōu)辄S綠色，種胚撐破種皮(圖1-4);
[0070] 第3階段，種子發(fā)育成魚(yú)雷形胚，胚頂端黃綠色，胚根開(kāi)始分化根毛，種胚脫掉種皮 (圖卜5);
[0071] 第4階段，種胚繼續(xù)生長(zhǎng)并分化出第1片黃綠色子葉，培根分化出大量根毛，形成完 整的胚(圖1-6~圖1-8);
[0072] 第5階段，成熟種胚繼續(xù)分化為1級(jí)分枝的黃綠色原球莖(圖1-9);
[0073] 第6階段，原球莖分化出淺綠色的球莖(圖1-10)。
[0074] 由圖1可知，種子自然萌發(fā)與無(wú)菌萌發(fā)所觀察到的形態(tài)變化有差異，自然狀況下只 觀察到原球莖和球莖的分化，而無(wú)菌培養(yǎng)條件下觀察到種子是由胚性細(xì)胞經(jīng)過(guò)胚的分化階 段后才分化出原球莖和球莖，是由于自然狀況下原球莖形成后原來(lái)胚的部分營(yíng)養(yǎng)被吸收后 腐爛掉，而在水分和養(yǎng)分充足的培養(yǎng)基中胚的部分被保留了下來(lái)(圖1-10)。
[0075] 結(jié)論：
[0076] 1、本研究得出山蘭種子適合在黑暗條件萌發(fā)；
[0077] 2、無(wú)菌萌發(fā)的培養(yǎng)基為MS+NAA 0.5mg/L+6_BA 2.0mg/L;
[0078] 3、山蘭種子萌發(fā)過(guò)程分為6個(gè)階段:胚性細(xì)胞吸水膨脹階段、心形胚階段、魚(yú)雷形 胚階段、子葉胚階段、原球莖形成階段和球莖分化階段。
[0079] 實(shí)施例2
[0080] 將種子撒播于MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 2.0mg/L的培養(yǎng)基中，3次重復(fù)，每重復(fù)15瓶， 置于光照強(qiáng)度為〇1χ(即黑暗條件)條件下培養(yǎng)。接種60d后種子開(kāi)始萌發(fā)，種子萌發(fā)后進(jìn)行 光照培養(yǎng)，逐漸增加光照的方式具體為:501x培養(yǎng)15d至幼胚呈淺綠色，再增加至1000 Ix培 養(yǎng)15d至幼胚芽綠色，然后增加至20001x正常培養(yǎng)。培養(yǎng)170d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)個(gè)數(shù)。同時(shí)以自然 播種為對(duì)照，播種方法為:在10月中旬，蒴果變褐色開(kāi)裂時(shí)，采集蒴果，隨機(jī)選3塊自然生長(zhǎng) 地，每塊15m 2，每塊地均勻播撒30個(gè)蒴果約75000粒種子，以分化出1年生植株為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn) (圖2-4)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果均標(biāo)準(zhǔn)化為35粒種子的萌發(fā)數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。
[0081 ]表4種子無(wú)菌萌發(fā)與自然播種萌發(fā)情況比較 LUUBd」 衣4?驗(yàn)結(jié)朱衣明，不及明試驗(yàn)力
云卜的山三柙f的明及雙朱顯者奸t目然條件 下的萌發(fā)效果。
[0084]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種山蘭種子的萌發(fā)方法，其特征在于，包括:將山蘭種子加入種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn) 行萌發(fā)培養(yǎng);所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基、NAA、6-BA。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度為 O · 1~1 · 0mg/L，6_BA 的濃度為O · 5~5 · Omg/L。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基中NAA的濃度 為0 · 5mg/L，6-BA 的濃度為 2 · Omg/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述基本培養(yǎng)基為MS培 養(yǎng)基。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基還 包括活性炭。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述活性炭在種子萌發(fā) 培養(yǎng)基中的添加量為1~3g/L。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述萌發(fā)培養(yǎng)的溫度為 20 ~25°C。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述萌發(fā)培養(yǎng)的空氣濕 度為65%~75%。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的萌發(fā)方法，其特征在于，在山蘭種子萌發(fā)培養(yǎng)過(guò) 程中，在山蘭種子萌發(fā)之前采用黑暗條件進(jìn)行培養(yǎng);待山蘭種子萌發(fā)之后進(jìn)行光照培養(yǎng)。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的萌發(fā)方法，其特征在于，所述光照培養(yǎng)的光暗周期為12h/ 12h;所述光照培養(yǎng)的光照強(qiáng)度小于等于20001x;所述光照培養(yǎng)采用逐漸增加光照的方式進(jìn) 行培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105941145SQ201610289754
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月4日
【發(fā)明人】張正海, 張悅, 李愛(ài)民, 張亞玉
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所