一種防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑及其生產(chǎn)方法【專利摘要】本發(fā)明公開了一種防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑，生物殺菌劑中的各組分的含量如下：殺菌活性物質(zhì)粗提液300～500mL/L、羧甲基纖維素納20～40g/L、蕓苔素內(nèi)酯10～50mg/L、甘油50～150mL/L、氮酮10～40mL/L、有機(jī)硅DC?52110.3～1mL/L，其余為水；其中殺菌活性物質(zhì)粗提液中含有殺菌活性物質(zhì)為HSAF，生物殺菌劑中HSAF的濃度為24～40mg/L；本發(fā)明生物殺菌劑可通過對刮治后的病疤進(jìn)行藥劑涂抹防治梨樹腐爛病，且具有成膜效果好，滲透力強(qiáng)，藥效期長，傷口愈合快，治愈率高，藥養(yǎng)多效，安全實(shí)用；本發(fā)明能替代化學(xué)殺菌劑，減少梨樹腐爛病防治過程中化學(xué)農(nóng)藥的施用。【專利說明】一種防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明涉及生物農(nóng)藥的制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種能夠用于防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]梨樹腐爛病又名臭皮病，是梨樹最重要的枝干病害。該病在我國各地梨園均有發(fā)生，特別在西北、華北和管理水平較低的梨園發(fā)生尤為嚴(yán)重。該病以侵染和危害主干、主枝和較大的側(cè)生枝為主，病菌從各種傷口（剪鋸口、環(huán)割口、凍傷、蟲傷口）及死亡組織侵入，也能從皮孔、葉柄痕和果柄痕侵入。病菌有潛伏侵染的特性，當(dāng)樹勢衰弱，抗病力下降時(shí)，潛伏病菌便大量繁殖，迅速擴(kuò)展引起樹皮腐爛，出現(xiàn)病疤，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致枝干枯死，甚至毀園。生產(chǎn)上梨樹腐爛病防治的主要方法是采用對刮治后的病疤涂刷藥液或淋洗式噴霧施藥。自2009年福美砷禁用后，目前生產(chǎn)上常用的化學(xué)藥劑有甲硫·萘乙酸、腐植酸銅、菌毒清、甲基硫菌靈、丁香菌酯、噻霉酮、戊唑醇等。這些藥劑大多來源于蘋果腐爛病的防治，單一效果較好，但是均為化學(xué)藥劑，對梨果質(zhì)量和梨園生態(tài)環(huán)境安全有不同程度的負(fù)面影響。[0003]HSAF(HeatStableantifungalfactor)是本實(shí)驗(yàn)室從生防細(xì)菌產(chǎn)酶溶桿菌(ArsoAacierefiZZfflogaoesWHl1菌株中分離鑒定的一種結(jié)構(gòu)和作用方式新穎，生物合成獨(dú)特的小分子廣譜抗真菌、卵菌物質(zhì)。該物質(zhì)對熱極其穩(wěn)定，121°C高壓處理20min仍有抗菌活性;對人、動物和非靶標(biāo)生物毒性很低;對包括梨腐爛病菌在內(nèi)的10多種植物病原真菌、卵菌均有較強(qiáng)的拮抗活性(見申請專利201410823196.4)。因此，針對梨樹腐爛病綠色防治的現(xiàn)實(shí)需求，開發(fā)基于HSAF的應(yīng)用方便、高效安全、兼具病疤治療和傷口愈合雙重效果的生物殺菌劑具有重要意義?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0004]針對上述存在的問題，本發(fā)明目的在于提供一種成膜效果好，滲透力強(qiáng)，藥效期長，傷口愈合快，治愈率高，藥養(yǎng)多效，安全實(shí)用，且不會對梨果品質(zhì)和梨園生態(tài)環(huán)境造成不良影響的能夠用于防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑。[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：一種防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑，所述的生物殺菌劑中的各組分的含量如下:殺菌活性物質(zhì)粗提液300~500mL/L、羧甲基纖維素納20~40g/L、蕓苔素內(nèi)酯10~50mg/L、甘油50~150mL/L、氮酮10~40mL/L、有機(jī)硅DC-52110.3~ImL/L，其余為水;其中殺菌活性物質(zhì)粗提液中含有殺菌活性物質(zhì)為HSAF，生物殺菌劑中HSAF的濃度為24~40mg/L。[0006]本發(fā)明的所述的防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑的生產(chǎn)方法包括殺菌活性物質(zhì)粗提液的制備和生物殺菌劑的制備，其詳細(xì)的操作步驟如下：1)活化培養(yǎng):取產(chǎn)酶溶桿菌OHll菌株，劃線接種至LB固體平板上，在28°C條件下活化培養(yǎng)24~36h;2)種子液制備:利用滅菌牙簽挑取一個(gè)單菌落接種到一個(gè)含有LB液體培養(yǎng)基的三角瓶中，28°C條件下震蕩培養(yǎng)16~24h，震蕩頻率為150r/min;3)發(fā)酵液制備:將上述步驟2)所得的種子液以體積比為2%的比例接種到10%TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28°C，以每分鐘通過發(fā)酵液的空氣體積與發(fā)酵液體積之比為0.5~2.0:1的方式，進(jìn)行發(fā)酵通氣，攪拌速度為80~160r/min，發(fā)酵時(shí)間為72h;4)殺菌活性物質(zhì)粗提液的制備:將發(fā)酵液利用雙層紗布過濾，煮沸10min，然后6000r/min離心15分鐘取上清，用HPLC測定發(fā)酵上清中HSAF含量，并利用純水將HSAF的濃度調(diào)整到80mg/L，得到殺菌活性物質(zhì)粗提液；5)凝膠的制備:稱取20~40g羧甲基纖維素鈉緩慢加入250mL純水中，攪拌均勻后靜置過夜，使其充分溶脹;然后依次將蕓苔素內(nèi)酯10~50mg、甘油50~150ml、氮酮10~40mL、有機(jī)娃D(zhuǎn)C-52110.3~ImL加到已溶脹好的上述溶液，攪拌均勾并定容至500mL;6)生物殺囷劑的制備:將步驟4)中制備好的殺囷活性物質(zhì)粗提液300~500mL添加到步驟5)制備的凝膠中，充分?jǐn)嚢?，加蒸餾水定容至1000mL，得到最終產(chǎn)品生物殺菌劑。[0007]本發(fā)明所述的步驟2)中應(yīng)用的LB液體培養(yǎng)基，其配比為：胰蛋白胨10g，NaCl10g和酵母提取物5g;經(jīng)蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH7.0~7.2,分裝后121°C高壓滅菌20min后得到;步驟1)中應(yīng)用的LB固體培養(yǎng)基需另外添加瓊脂粉15g。[0008]本發(fā)明所述的步驟3)中應(yīng)用的10%TSB培養(yǎng)基，其配比為:胰蛋白胨1.7g、大豆蛋白胨0.3g、氯化鈉0.5g、磷酸氫二鉀0.25g和葡萄糖0.25g;經(jīng)蒸餾水定容至1000mL，pH7.0~7.2，121°C高壓滅菌20min后得到。[0009]本發(fā)明所述生物殺菌的使用方法為:在春季梨樹發(fā)芽前后，選擇晴朗天氣，利用鋒利的刮刀將梨樹腐爛病斑進(jìn)行徹底刮除，刮至枝干的木質(zhì)部，然后將藥劑涂抹其上，并完全覆蓋刮除病斑后的傷口。另外，收集刮除的病斑碎片，進(jìn)行集中焚燒處理。[0010]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明所述生物殺菌劑是一種防控梨樹腐爛病的新型生物殺菌劑，主要有效成分為HSAFc3HSAF是一種含四元酸結(jié)構(gòu)的大環(huán)內(nèi)酰胺，分子式為C29H39〇6N2，具有高效、廣譜的殺菌活性，具有保護(hù)和治療作用。通過干擾真菌菌絲的極性生長，抑制產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生質(zhì)壁分離，降低其對環(huán)境脅迫的抵抗能力，從而影響病菌的生存、侵染和傳播。[0011]本發(fā)明所述生物殺菌劑中含有高分子成膜材料羧甲基纖維素鈉，易于分散在水中形成澄明的膠狀液，對熱較穩(wěn)定，無毒、無刺激性，是一種優(yōu)良的水溶性凝膠劑。涂抹到刮治后的病疤上可以形成一層保護(hù)薄膜，耐風(fēng)吹、日曬、雨雪沖刷而不易脫落，能使凝膠劑持久發(fā)揮藥效，又能保護(hù)傷口減少水分蒸發(fā)，也能阻止腐爛病菌再次侵染。凝膠劑中加入了蕓苔素內(nèi)酯，這是一種高效、低毒、廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑，能迅速促進(jìn)細(xì)胞分裂，增強(qiáng)植物的抗逆性，促進(jìn)傷口愈合。氮酮作為一種滲透劑，也能促進(jìn)植物對藥物的吸收，提高藥效。有機(jī)硅DC-5211能夠顯著促進(jìn)藥劑對病原菌和病疤組織的滲透，提高病害防治效果，擴(kuò)展藥劑的持效期。[0012]本發(fā)明所述生物殺菌劑在江蘇、遼寧、甘肅、陜西、山東、新疆等地果園進(jìn)行了多年田間試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，該生物殺菌劑成膜保護(hù)時(shí)間達(dá)4個(gè)月以上，對梨樹腐爛病治愈率高達(dá)85%以上，在果園使用過程中均未出現(xiàn)任何藥害。該凝膠劑具有成膜效果好，滲透力強(qiáng)，藥效期長，傷口愈合快，治愈率高，藥養(yǎng)多效，安全實(shí)用等特點(diǎn)，是一種可有效替代化學(xué)殺菌劑的生物殺菌劑?！靖綀D說明】[0013]圖1為本發(fā)明人工接種條件下本發(fā)明所述生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果；圖2為本發(fā)明對梨樹腐爛病病疤刮除與涂藥處理；圖3為本發(fā)明的生物殺菌劑對梨樹腐爛病田間防治效果?！揪唧w實(shí)施方式】[0014]下面結(jié)合【附圖說明】和【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。[0015]本發(fā)明中所提及的產(chǎn)酶溶桿菌OHll菌株和殺菌活性物質(zhì)HSAF均為專利CN201410823196.4中所公開的菌種及其代謝產(chǎn)物。若無特別說明，下述實(shí)施例中所用技術(shù)方法均為常規(guī)方法，下述實(shí)施例中所用試驗(yàn)材料，均為常規(guī)試劑材料。[0016]實(shí)施例1:生物殺菌劑及其特性一、生物殺菌劑制備本實(shí)施例制備了如下7種基于殺菌活性物質(zhì)HSAF粗提液的生物殺菌劑：生物殺菌劑（1)組分為:殺菌活性物質(zhì)粗提液300mL、羧甲基纖維素納30g、蕓苔素內(nèi)酯25mg、甘油150mL、氮酮20mL、有機(jī)硅DC-52110.6mL，加水補(bǔ)足1000mL。[0017]生物殺菌劑（2)組分為：殺菌活性物質(zhì)粗提液300mL、羧甲基纖維素納40g、蕓苔素內(nèi)酯25mg、甘油50mL、氮酮40mL、有機(jī)硅DC-5211ImL，加水補(bǔ)足1000mL。[0018]生物殺菌劑（3)組分為：殺菌活性物質(zhì)粗提液400mL、羧甲基纖維素納30g、蕓苔素內(nèi)酯50mg、甘油100mL、氮酮30mL、有機(jī)硅DC-52110.3mL，加水補(bǔ)足1000mL。[0019]生物殺菌劑(4)組分為：殺菌活性物質(zhì)粗提液400mL、羧甲基纖維素納30g、蕓苔素內(nèi)酯50mg、甘油100mL、氮酮40mL、有機(jī)硅DC-5211ImL，加水補(bǔ)足1000mL。[0020]生物殺菌劑（5)組分為：殺菌活性物質(zhì)粗提液500mL、羧甲基纖維素納30g、蕓苔素內(nèi)酯25mg、甘油100mL、氮酮20mL、有機(jī)硅DC-52110.3mL，加水補(bǔ)足1000mL。[0021]生物殺菌劑(6)組分為:殺菌活性物質(zhì)粗提取液500mL、羧甲基纖維素納20g、蕓苔素內(nèi)酯10mg、甘油50mL、氮酮40mL、有機(jī)硅DC-52110.3mL，加水補(bǔ)足1000mL。[0022]生物殺菌劑(7)組分為：殺菌活性物質(zhì)粗提液500mL、羧甲基纖維素納30g、蕓苔素內(nèi)酯10mg、甘油100mL、氮酮20mL、有機(jī)硅DC-52110.6mL，加水補(bǔ)足1000mL。[0023]上述生物殺菌劑按照下述方法制備：首先，將羧甲基纖維素鈉緩慢加入250mL純水中，攪拌均勻后靜置過夜，使其充分溶脹;依次將蕓苔素內(nèi)酯、甘油、氮酮、有機(jī)硅DC-5211加到已溶脹好的上述溶液，攪拌均勻并定容至500mL;然后將殺菌活性物質(zhì)HSAF粗提取液添加到上述凝膠液中，充分?jǐn)嚢杈鶆?，即為有效成分HSAF含量為24-40yg/mL的生物殺菌凝膠劑。[0024]二、生物殺菌劑的特性將配置好的生物殺菌劑分別在3000r/min離心30分鐘，55°C保存7天，(TC保存15天，20°C保存90天，觀察其粘稠度、涂展性以及是否分層。結(jié)果表明，在試驗(yàn)的條件和時(shí)間范圍內(nèi)HSAF凝膠劑表現(xiàn)出良好的涂展性和穩(wěn)定性(表1)。[0025]表1生物殺菌劑的理化特性實(shí)施例2:人工接種條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果2013年4月3日，在江蘇省南京市梨園內(nèi)，梨樹品種為碭山酥梨，選擇3年生主枝，通過人工接種的方式，進(jìn)行了生物殺菌劑(5)對梨樹腐爛病的防治效果試驗(yàn)。生物殺菌劑(5)按照上述實(shí)施例1中的組分配比及方法制備。試驗(yàn)分5個(gè)處理，包括預(yù)防處理(先涂生物殺菌劑，再接種病原菌）、治療處理1(先接種病原菌，再涂生物殺菌劑）、治療處理2(先接種病原菌，再涂5%菌毒清水劑）、陽性對照(接種病原菌，未涂藥)和陰性對照(接種水，用水涂抹）。病原菌接種是用打孔器在新鮮樹皮上打孔，然后接種梨腐爛病菌菌絲塊并保濕，每個(gè)處理包括10個(gè)枝條。處理7天和21天后分別調(diào)查平均病斑長度，21天時(shí)觀察傷口愈合情況。結(jié)果表明本發(fā)明生物殺菌劑具有較好的預(yù)防和治療效果，能夠快速促進(jìn)傷口愈合(見下表2和圖1所示)。[0026]表2人工接種條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病防治效果實(shí)施例3:大田發(fā)病條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果2013年4月6日，在江蘇豐縣梨園進(jìn)行了生物殺菌劑(5)對梨樹腐爛病的田間防治試驗(yàn)，梨樹品種為碭山酥梨，樹齡在10-12年。生物殺菌劑(5)按照上述實(shí)施例1中的組分配比及方法制備。施藥方法是采用病疤括除涂抹法，即用刀將病疤處樹皮刮剝至木質(zhì)部，然后將藥劑涂抹其上并完全覆蓋。試驗(yàn)以化學(xué)藥劑3.315%甲硫?萘乙酸涂抹劑和2.12%腐殖酸銅水劑為對照藥劑。2013年9月24日進(jìn)行病疤愈合(長出新鮮組織且無擴(kuò)展的病疤)調(diào)查，在試驗(yàn)過程中同時(shí)觀察藥劑成膜、傷口愈合情況。結(jié)果表明，生物殺菌劑(5)對梨樹腐爛病的綜合防治效果與甲硫?萘乙酸相當(dāng)，病疤愈合率高，成膜保護(hù)時(shí)間長，對傷口的愈合作用好(見表3與圖2、3)。[0027]表3生物殺菌劑(5)對梨樹腐爛病的田間防治效果(碭山酥梨）實(shí)施例4:大田發(fā)病條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果2014年4月14日，在遼寧營口梨園進(jìn)行了生物殺菌劑（2)對梨樹腐爛病的田間防治試驗(yàn)，梨樹品種為巴梨，樹齡6-7年。生物殺菌劑(2)按照上述實(shí)施例1中的組分配比及方法制備。施藥方法是采用病疤括除涂抹法，即用刀將病疤處樹皮刮剝至木質(zhì)部，然后將藥劑涂抹其上并完全覆蓋。試驗(yàn)以化學(xué)藥劑3.315%甲硫?萘乙酸涂抹劑和2.12%腐殖酸銅水劑為對照藥劑，在2014年9月18日進(jìn)行病疤愈合(長出新鮮組織且無擴(kuò)展的病疤)調(diào)查，在試驗(yàn)過程中同時(shí)觀察藥劑成膜、傷口愈合情況。結(jié)果表明，生物殺菌劑(2)對梨樹腐爛病的綜合防治效果與甲硫?萘乙酸相當(dāng)，病疤愈合率高，成膜保護(hù)時(shí)間長，對傷口的愈合作用好(見下表4)〇[0028]表4生物殺菌劑(2)對梨樹腐爛病的田間防治效果(巴梨）實(shí)施例5:大田發(fā)病條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果2014年4月7日，在甘肅景泰進(jìn)行了生物殺菌劑(3)對梨樹腐爛病的田間防治試驗(yàn)，梨樹品種為黃冠梨，樹齡7-8年。生物殺菌劑(3)按照上述實(shí)施例1中的組分配比及方法制備。施藥方法是采用病疤括除涂抹法，即用刀將病疤處樹皮刮剝至木質(zhì)部，然后將藥劑涂抹其上并完全覆蓋。試驗(yàn)以化學(xué)藥劑3.315%甲硫?萘乙酸涂抹劑和2.12%腐殖酸銅水劑為對照藥劑，2014年9月27日進(jìn)行病疤愈合(長出新鮮組織且無擴(kuò)展的病疤)調(diào)查，在試驗(yàn)過程中同時(shí)觀察藥劑成膜、傷口愈合情況。結(jié)果表明，生物殺菌劑(3)對梨樹腐爛病的綜合防治效果與甲硫?萘乙酸相當(dāng)，病疤愈合率高，成膜保護(hù)時(shí)間長，對傷口的愈合作用好(見表5)。[0029]表5生物殺菌劑(3)對梨樹腐爛病的田間防治效果(黃冠梨）實(shí)施例6:大田發(fā)病條件下生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防治效果2015年4月20日，在新疆庫爾勒進(jìn)行了生物殺菌劑(7)對梨樹腐爛病的田間防治試驗(yàn)，梨樹品種為香梨，樹齡在12-15年。生物殺菌劑(7)按照上述實(shí)施例1中的組分配比及方法制備。施藥方法是采用病疤括除涂抹法，即用刀將病疤處樹皮刮剝至木質(zhì)部，然后將藥劑涂抹其上并完全覆蓋。試驗(yàn)以化學(xué)藥劑3.315%甲硫?萘乙酸涂抹劑和2.12%腐殖酸銅水劑等化學(xué)藥劑為對照，2015年9月11日進(jìn)行病疤愈合(長出新鮮組織且無擴(kuò)展的病疤)調(diào)查，在試驗(yàn)過程中同時(shí)觀察藥劑成膜、傷口愈合情況。結(jié)果表明，生物殺菌劑(7)對梨樹腐爛病的綜合防治效果好于對照藥劑3.315%甲硫?萘乙酸和2.12%腐殖酸銅，病疤愈合率高，成膜保護(hù)時(shí)間長，對傷口的愈合作用好(見表6)。表6生物殺菌劑(7)對梨樹腐爛病的田間防治效果(黃冠梨）由上表可知:在本發(fā)明設(shè)定的各組分含量范圍內(nèi)，生物殺菌劑3對梨樹腐爛病的防治效果最好，病斑愈合率高達(dá)87.9%，明顯高于組分含量不在本發(fā)明設(shè)定范圍內(nèi)的對比例4、對比例5和對比例6;由此可見，當(dāng)殺菌物質(zhì)中各組分的質(zhì)量濃度發(fā)生改變時(shí)，部分組分含量過多或者過少，其最終產(chǎn)品的使用效果也會產(chǎn)生一定的下降。另外，在本發(fā)明的組分含量設(shè)定范圍內(nèi)，蕓苔素內(nèi)酯和有機(jī)硅DC-5211均能大幅提高生物殺菌劑對梨樹腐爛病的防效，特別是同時(shí)添加蕓苔素內(nèi)酯和有機(jī)硅DC-5211的生物殺菌劑3防治梨樹腐爛病的病斑愈合率高達(dá)87.9%，不添加蕓苔素內(nèi)酯和有機(jī)硅DC-5211的對比例3防治梨樹腐爛病的病斑愈合率僅為66.7%〇[0030]需要說明的是，上述僅僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非用來限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，在上述實(shí)施例的基礎(chǔ)上所做出的任意組合或等同變換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍?！局鳈?quán)項(xiàng)】1.一種防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑，其特征在于，所述的生物殺菌劑中的各組分的含量如下：殺菌活性物質(zhì)粗提液300~500mL/L、羧甲基纖維素納20~40g/L、蕓苔素內(nèi)酯10~50mg/L、甘油50~150mL/L、氮酮10~40mL/L、有機(jī)硅DC-52110.3~1mL/L，其余為水;其中殺菌活性物質(zhì)粗提液中含有殺菌活性物質(zhì)為HSAF，生物殺菌劑中HSAF的濃度為24~40mg/L。2.-種如權(quán)利要求1所述的防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的生產(chǎn)方法包括殺菌活性物質(zhì)粗提液的制備和生物殺菌劑的制備，其詳細(xì)的操作步驟如下：1)活化培養(yǎng):取產(chǎn)酶溶桿菌OH11菌株，劃線接種至LB固體平板上，在28°C條件下活化培養(yǎng)24~36h;2)種子液制備:利用滅菌牙簽挑取一個(gè)單菌落接種到一個(gè)含有LB液體培養(yǎng)基的三角瓶中，28°C條件下震蕩培養(yǎng)16~24h，震蕩頻率為150r/min;3)發(fā)酵液制備：將上述步驟2)所得的種子液以體積比為2%的比例接種到10%TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為28°C，以每分鐘通過發(fā)酵液的空氣體積與發(fā)酵液體積之比為0.5~2.0:1的方式，進(jìn)行發(fā)酵通氣，攪拌速度為80~160r/min，發(fā)酵時(shí)間為72h;4)殺菌活性物質(zhì)粗提液的制備：將發(fā)酵液利用雙層紗布過濾，煮沸10min，然后6000r/min離心15分鐘取上清，用HPLC測定發(fā)酵上清中HSAF含量，并利用純水將HSAF的濃度調(diào)整到80mg/L，得到殺菌活性物質(zhì)粗提液；5)凝膠的制備：稱取20~40g羧甲基纖維素鈉緩慢加入250mL純水中，攪拌均勻后靜置過夜，使其充分溶脹;然后依次將蕓苔素內(nèi)酯10~50mg、甘油50~150ml、氮酮10~40mL、有機(jī)娃D(zhuǎn)C-52110.3~1mL加到已溶脹好的上述溶液，攪拌均勾并定容至500mL;6)生物殺囷劑的制備：將步驟4)中制備好的殺囷活性物質(zhì)粗提液300~500mL添加到步驟5)制備的凝膠中，充分?jǐn)嚢瑁诱麴s水定容至1000mL，得到最終產(chǎn)品生物殺菌劑。3.如權(quán)利要求2所述的防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟2)中應(yīng)用的LB液體培養(yǎng)基，其配比為:胰蛋白胨10g，NaCl10g和酵母提取物5g;經(jīng)蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH7.0~7.2,分裝后121°C高壓滅菌20min后得到；步驟1)中應(yīng)用的LB固體培養(yǎng)基需另外添加瓊脂粉15g。4.如權(quán)利要求2所述的防治梨樹腐爛病的生物殺菌劑的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟3)中應(yīng)用的10%TSB培養(yǎng)基，其配比為:胰蛋白胨1.7g、大豆蛋白胨0.3g、氯化鈉0.5g、磷酸氫二鉀0.25g和葡萄糖0.25g;經(jīng)蒸餾水定容至1000mL，pH7.0~7.2，121°C高壓滅菌20min后得到。5.-種如權(quán)利要求1所述的生物殺菌劑使用方法，其特征在于，所述的使用方法如下：首先將梨樹枝干上的腐爛病斑徹底刮除至木質(zhì)部，然后將生物殺菌劑均勻涂抹到刮除病斑后的枝干上，涂抹后的藥膜完全的覆蓋在刮除病斑后的枝干傷口。【文檔編號】A01P3/00GK105961411SQ201610294430【公開日】2016年9月28日【申請日】2016年5月3日【發(fā)明人】劉鳳權(quán),錢國良,趙延存,徐會永,何鋒【申請人】江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院