一種白及組織培養(yǎng)基、制備方法及應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種白及組織培養(yǎng)基，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.4?0.6mg、多效唑0.2?0.5mg、蔗糖20?25g、土豆20?40g和香蕉皮80?120g，且培養(yǎng)基的pH為5.8?6.2。本發(fā)明還提供了一種白及培養(yǎng)基的制備方法及其在白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)中的應(yīng)用。本發(fā)明使用廢棄的香蕉皮作為培養(yǎng)基的制備材料之一，并在此基礎(chǔ)上添加了其他的組分，不但保證了白及種子發(fā)芽率在95％以上、原球莖分化率在98％以上，同時(shí)，將培養(yǎng)基的制作成本降低了至少60％，此外，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，利用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)的白及組織葉肉飽滿(mǎn)、莖枝粗壯，生長(zhǎng)狀況更佳，白及成活率提高了50％。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種白及組織培養(yǎng)基、制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種白及組織培養(yǎng)基，本發(fā)明還涉 及一種白及組織培養(yǎng)基的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 白及(Bletilla striata)，又名白發(fā)，為蘭科白及屬多年生草本植物，屬?lài)?guó)家二級(jí) 瀕危植物，其干燥根莖入藥，成熟之后除去須根、洗凈，潤(rùn)透，切薄片，曬干，具有收斂止血， 消腫生肌之功效，用于治療肺結(jié)核咳血、胃潰瘍及外傷出血等疾病。另一方面，白及塊莖中 富含白及膠、白及多糖，被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)和日化工業(yè)中。
[0003] 白及果莢內(nèi)存有3-5萬(wàn)個(gè)種子，自然界條件下萌發(fā)率僅為5 %，極難萌發(fā)。目前隨著 白及藥材市場(chǎng)需求量增加，高利潤(rùn)的趨勢(shì)，導(dǎo)致野生白及采挖量加大日益稀少，價(jià)格日趨增 尚。因此，開(kāi)發(fā)出能夠提尚白及發(fā)芽率的培養(yǎng)基，擴(kuò)大白及優(yōu)良種苗快速繁殖，迅速實(shí)施白 及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，不但可以降低藥材價(jià)格，而且對(duì)瀕危植物白及的保護(hù)具有重要意義。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)是，用于提高白及發(fā)芽率的培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)之上添加 許多其他組分，成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供的一種白及組織培養(yǎng)基、制備方法及應(yīng)用，可以提高白及的發(fā)芽率，且 成本較低。
[0006] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種白及組織培養(yǎng)基，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下 組分：萘乙酸0.4-0.6mg、多效唑0.2-0.5mg、鹿糖20_25g、土豆20_40g和香蕉皮80_120g，且 培養(yǎng)基的pH為5.8-6.2。
[0007] 優(yōu)選的，一種白及組織培養(yǎng)基，每升1 /2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.5mg、 多效唑0.3mg、蔗糖20g、土豆20g和香蕉皮80g，且培養(yǎng)基的pH為6.2。
[0008] 優(yōu)選的，一種白及組織培養(yǎng)基，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.4mg、 多效唑0.2mg、鹿糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培養(yǎng)基的pH為6.0。
[0009] 優(yōu)選的，一種白及組織培養(yǎng)基，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.6mg、 多效唑0.51^、蔗糖228、土豆4(^和香蕉皮958，且培養(yǎng)基的?!1為5.8。
[0010]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種白及組織培養(yǎng)基的制備方法，按照以下步驟制 備：
[0011]步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基；
[0012]步驟2，按每升1/2MS培養(yǎng)基中含有0.4-0.6mg萘乙酸、0.2-0.5mg多效唑、鹿糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-120g的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉 皮；
[0013] 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香 蕉皮塊；
[0014] 步驟4,將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊 混勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆?，獲得組織培養(yǎng)液；
[0015] 步驟5，將步驟4中組織培養(yǎng)液的pH調(diào)節(jié)至5.8-6.2，于121°C高壓滅菌20-30min，得 到白及組織培養(yǎng)基。
[0016] 優(yōu)選的，上述白及組織培養(yǎng)基的制備方法，調(diào)節(jié)pH使用的試劑為NaOH。
[0017] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種白及組織培養(yǎng)基，在白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)中的應(yīng) 用。
[0018] 本發(fā)明一種白及組織培養(yǎng)基，使用廢棄的香蕉皮作為培養(yǎng)基的制備材料之一，并 在此基礎(chǔ)上添加了其他的組分，不但保證了白及種子發(fā)芽率在95%以上、原球莖分化率在 98%以上，同時(shí)，將培養(yǎng)基的制作成本降低了至少60%，此外，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，利用本 發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)的白及組織葉肉飽滿(mǎn)、莖枝粗壯，生長(zhǎng)狀況更佳，白及成活率提高了 50% 〇
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)理解為本發(fā)明的限制。下面 實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，均按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法和條件進(jìn)行。
[0020] 需要說(shuō)明的是，本發(fā)明的方法以及下面實(shí)施例中，白及組織培養(yǎng)基配制時(shí)使用的 1 /2MS培養(yǎng)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的培養(yǎng)基，1 /2MS培養(yǎng)基配制時(shí)按照公知的配方稱(chēng)取其 中的各個(gè)組分和配制方法進(jìn)行配制即可。
[0021] MS培養(yǎng)基的配方如表1所示，首先分別按照表1所述的配方分別配制母液I、母液 II、母液III和母液IV，其中母液I是10倍濃縮液，母液II、母液III和母液IV均是100倍濃縮 液，每升MS培養(yǎng)基配制時(shí)，取母液I 100mL，取母液II、母液III和母液IV各10mL，然后加水至 1L即可，1/2MS培養(yǎng)基的配方是將MS培養(yǎng)基中配制母液I的用量減半，而其他母液的用量不 變。
[0022] 表1 MS培養(yǎng)基的配方
[0023]
[0024] 本發(fā)明一種白及組織培養(yǎng)基，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸（NAA) 0 · 4-0 · 6mg、多效唑 0 · 2-0 · 5mg、蔗糖 20-25g、土豆 20-40g 和香蕉皮80-120g，pH為 5 · 8-6 · 2。
[0025] 基于同一發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明提供了一種白及組織培養(yǎng)基的制備方法，按照以下步 驟制備：
[0026]步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基；
[0027] 步驟2，按每升1 /2MS培養(yǎng)基中含有0 · 4-0 · 6mg萘乙酸、0 · 2-0 · 5mg多效唑、20-25g蔗 糖、20-40g 土豆和80-120g香蕉皮的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、土豆和香蕉皮； [0028] 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香 蕉皮塊；
[0029]步驟4,將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊 混勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆颍@得組織培養(yǎng)液；
[0030] 步驟5，將步驟4中組織培養(yǎng)液的pH調(diào)節(jié)至5.8-6.2，于121°C高壓滅菌20-30min，得 到白及組織培養(yǎng)基。
[0031 ]優(yōu)選的，本發(fā)明一種白及組織培養(yǎng)基，還包括以下實(shí)施例：
[0032] 實(shí)施例1
[0033]實(shí)施例1的白及組織培養(yǎng)基，每升1 /2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.5mg、多 效挫0.311^、鹿糖2(^、土豆2(^和香蕉皮8(^，且培養(yǎng)基的口!1為6.2。
[0034]上述培養(yǎng)基按照以下步驟制備：
[0035]步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基；
[0036] 步驟2,按每升1/2MS培養(yǎng)基中含有0.5mg萘乙酸、0.3mg多效唑、20g蔗糖、20g 土豆 和80g香蕉皮的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
[0037] 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香 蕉皮塊；
[0038]步驟4，將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊 混勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆颍@得組織培養(yǎng)液；
[0039] 步驟5，將步驟4中組織培養(yǎng)液調(diào)節(jié)pH至6.2，于121°C高壓滅菌20min，得到白及組 織培養(yǎng)基。
[0040] 實(shí)施例2
[00411實(shí)施例2的白及組織培養(yǎng)基，每升1 /2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.4mg、多 效挫0.2mg、鹿糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培養(yǎng)基的pH為6.0。
[0042]上述培養(yǎng)基按照以下步驟制備：
[0043]步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基；
[0044] 步驟2,按每升1/2MS培養(yǎng)基中含有0.4mg萘乙酸、0.2mg多效唑、25g蔗糖、30g 土豆 和l〇〇g香蕉皮的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
[0045] 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香 蕉皮塊；
[0046]步驟4,將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊 混勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆?，獲得組織培養(yǎng)液；
[0047] 步驟5,將步驟4中組織培養(yǎng)液的pH調(diào)節(jié)至6.0,于121°C高壓滅菌25min，得到白及 組織培養(yǎng)基。
[0048] 實(shí)施例3
[0049]實(shí)施例3的白及組織培養(yǎng)基，每升1 /2MS培養(yǎng)基中含有以下組分：萘乙酸0.6mg、多 效挫0.511^、鹿糖22〖、土豆40〖和香蕉皮95〖，且培養(yǎng)基的?!1為5.8。
[0050]上述培養(yǎng)基按照以下步驟制備：
[0051 ]步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基；
[0052] 步驟2,按每升1/2MS培養(yǎng)基中含有0.6mg萘乙酸、0.5mg多效唑、22g蔗糖、40g 土豆 和95g香蕉皮的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮；
[0053] 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香 蕉皮塊；
[0054]步驟4，將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊 混勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆?，獲得組織培養(yǎng)液；
[0055] 步驟5,將步驟4中組織培養(yǎng)液的pH調(diào)節(jié)至5.8,于121°C高壓滅菌30min，得到白及 組織培養(yǎng)基。
[0056] 培養(yǎng)基驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：
[0057]選取適量的白及種子，并將白及種子經(jīng)過(guò)消毒處理，然后分成三組，將三組白及種 子分別置于本發(fā)明實(shí)施例1-3的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察種子的萌發(fā)狀況，結(jié)果表明，實(shí)施例1培 養(yǎng)基中種子的萌發(fā)率為96%，實(shí)施例2培養(yǎng)基中種子的萌發(fā)率為95%，實(shí)施例3培養(yǎng)基中種 子的萌發(fā)率為95 %，解決了白及種子萌發(fā)難，萌發(fā)率低的問(wèn)題。
[0058] 種子萌發(fā)4-5周以后，繼續(xù)培養(yǎng)4周，進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察原球莖的分化情 況，結(jié)果表明，實(shí)施例1培養(yǎng)基中原球莖的分化率為99%，實(shí)施例2培養(yǎng)基中原球莖的分化率 為98%，實(shí)施例3培養(yǎng)基中原球莖的分化率為98%。
[0059] 與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，利用本發(fā)明的培養(yǎng)基培養(yǎng)的白及組織葉肉飽滿(mǎn)、原球莖粗 壯，生長(zhǎng)狀況更佳，白及成活率提高了 50 %。
[0060] 此外，目前大多數(shù)白及培養(yǎng)基的制作選用的是香蕉果肉作為材料，而將香蕉皮作 為廢棄物處理，而本發(fā)明的方法中，以香蕉皮作為培養(yǎng)基的制備材料之一，并在此基礎(chǔ)上添 加了其他的組分，在保證白及種子具有較高的發(fā)芽率和原球莖分化率的前提下，將培養(yǎng)基 的制作成本降低了至少60%。
[0061] 本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改動(dòng)和變型而不脫離本發(fā)明的精神和 范圍，倘若本發(fā)明的這些修改和變型屬于本發(fā)明權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍之內(nèi)，則本 發(fā)明也意圖包含這些改動(dòng)和變型在內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種白及組織培養(yǎng)基，其特征在于，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下組分:萘乙酸0.4-0 · 6mg、多效唑0 · 2-0 · 5mg、蔗糖20-25g、土豆20-40g和香蕉皮80-120g，且培養(yǎng)基的pH為5 · 8-6.2〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白及組織培養(yǎng)基，其特征在于，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下 組分:萘乙酸0.5mg、多效唑0.3mg、鹿糖20g、土豆20g和香蕉皮80g，且培養(yǎng)基的pH為6.2。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白及組織培養(yǎng)基，其特征在于，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下 組分:萘乙酸0.4mg、多效唑0.2mg、鹿糖25g、土豆30g和香蕉皮100g，且培養(yǎng)基的pH為6.0。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白及組織培養(yǎng)基，其特征在于，每升1/2MS培養(yǎng)基中含有以下 組分:萘乙酸0.6mg、多效唑0.5mg、鹿糖22g、土豆40g和香蕉皮95g，且培養(yǎng)基的pH為5.8。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白及組織培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，按照以下步驟制 備： 步驟1，按常規(guī)方法配制1/2MS培養(yǎng)基； 步驟2，按每升1/2MS培養(yǎng)基中含有0 · 4-0 · 6mg萘乙酸、0 · 2-0 · 5mg多效唑、20-25g蔗糖、 20-40g 土豆和80-120g香蕉皮的配方比例，分別稱(chēng)取萘乙酸、多效唑、蔗糖、土豆和香蕉皮； 步驟3，分別將土豆和香蕉皮切成0.5cm X 0.5cm X 0.5cm的方塊，得到土豆塊和香蕉皮 塊； 步驟4,將步驟2中稱(chēng)取的萘乙酸、多效唑、蔗糖，以及步驟3中的土豆塊和香蕉皮塊混 勻，并按配方比例加入配制好的1/2MS培養(yǎng)基，充分?jǐn)嚢杈鶆?，獲得組織培養(yǎng)液； 步驟5，將步驟4中組織培養(yǎng)液的pH調(diào)節(jié)至5.8-6.2，于121°C高壓滅菌20-30min，得到白 及組織培養(yǎng)基。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的白及組織培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，調(diào)節(jié)pH使用的試劑 為NaOH。7. 如權(quán)利要求1中所述的白及組織培養(yǎng)基，在白及原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105993935SQ201610298771
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】陳康健, 王喆之, 強(qiáng)毅, 胡喜風(fēng)
【申請(qǐng)人】陜西師范大學(xué)