一種金鈴花快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金鈴花快速繁殖的方法，所述的方法包括：1)外植體的選取，2)外植體消毒，3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng)，4)愈傷組織誘導(dǎo)，5)增殖培養(yǎng)，6)生根培養(yǎng)，7)煉苗和移栽。采用本方法繁育金鈴花，可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
【專利說明】
一種金鈴花快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及植物快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種金鈴花快速繁殖的方法技術(shù)領(lǐng)域。【背景技術(shù)】
[0002] 金鈴花(學(xué)名:Abutilon striatum)，又名燈籠花、網(wǎng)花苘麻、紅脈商麻，屬于常綠灌木，由于葉片常綠、花形獨(dú)特、花期較長、易于繁殖，頗受喜愛。金鈴花系叢生，莖直立，葉翠綠，質(zhì)厚，卵狀，亦有掌狀，邊緣有鋸齒，花梗細(xì)長，小蕾期向上，隨著蕾的膨大逐漸向下， 開花特別下垂，花鐘形，橙黃色，上有鮮艷的紫紅色脈紋，花蕊和花柱較長，伸出花冠之外， 整花如吊著的金色鈴子而得名。
[0003] 喜溫暖及陽光充足，不耐寒，稍耐陰；宜肥沃、濕潤而排水花的砂壤土。原產(chǎn)南美洲的巴西、烏拉圭等地，中國西南等地有栽培，供園林觀賞用。金鈴花的葉和花可活血祛瘀，舒筋通絡(luò)。用于跌打損傷。
[0004]目前，金鈴花多采用扦插來進(jìn)行生產(chǎn)栽培，這種繁育技術(shù)提高了品種的純度，保持了品種特性，但成活率較低及繁殖速度較慢，制約了金鈴花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而組織培養(yǎng)育苗技術(shù)既可以保持種的純度和特性，也可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中尚無經(jīng)愈傷組織途徑獲得金鈴花再生植株的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種金鈴花快速繁殖的方法，經(jīng)愈傷組織途徑獲得金鈴花叢生芽，誘導(dǎo)生根，可實(shí)現(xiàn)金鈴花組培苗的大量快速繁殖。
[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出下列技術(shù)方案:
[0008] —種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟:
[0009] 1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑10-20_的金鈴花半木質(zhì)化嫩枝枝條為外植體，剪去下部葉片后剪成5-12cm的莖段；
[0010] 2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20KHZ超聲波清洗機(jī)中保持溫度30-35°C處理30-45min，然后用自來水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消毒20-30秒，0.5%升汞溶液中處理5-7分鐘，然后以無菌水沖洗6-8遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0011] 3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體莖段各剪去3-5mm，莖段按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)4-6d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 1-0 ? 2mg/L+NAA0 ? 01-0 ? 02mg/L+PVP5-10mg/L；[〇〇12] 4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度20 °C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.02-0.05mg/L+PVP5-10mg/L；[〇〇13]5)分化和增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP 5-10mg/L; [〇〇14]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d后生根，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度251:±2°(:;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0 ? 1-0 ? 5mg/L+PVP5_10mg/L;
[0015]7)煉苗和移栽:將有生根的金鈴花幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度85 %-95 %， 適當(dāng)遮蔭即可；[〇〇16] 所述的WPM培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸銨NH4N03400mg/L，硫酸鉀K2S〇4900mg/L， 磷酸二氫鉀KH2P03170mg/L，硫酸鎂MgS〇4 ? 7H20370mg/L;鈣鹽:氯化鈣CaCl2 ? 2H2096mg/L; 四水合硝酸鈣Ca(N03)2 ? 4H20556mg/L;微量元素:硼酸H3B036.2mg/L，硫酸錳MnS〇4 ? 4H2022.5mg/L，硫酸鋅ZnS〇4 ? 7H208.6mg/L，鉬酸鈉Na2Mo〇4 ? 2H200.25mg/L，硫酸銅CuS〇4 ? 5H200 ? 25mg/L;鐵鹽:乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37 ? 3mg/L，硫酸亞鐵FeS〇4 ? 7H2027 ? 8mg/ L;有機(jī)酸:肌醇lOOmg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素lmg/L，鹽酸卩比咳醇0 ? 5mg/L，煙酸0 ? 5mg/ L；
[0017] 所述的MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN031900mg/L，硝酸銨NH4N031650mg/L， 磷酸二氫鉀KH2P03170mg/L，硫酸鎂MgS〇4 ? 7H20370mg/L;鈣鹽:氯化鈣CaCl2 ? 2H20440mg/L; 微量元素:碘化鉀K1 ? 83mg/L，硼酸H3B036 ? 2mg/L，硫酸錳MnS〇4 ? 4H2022 ? 3mg/L，硫酸鋅 ZnS〇4 ? 7H208.6mg/L，鉬酸鈉Na2Mo〇4 ? 2H200.25mg/L，硫酸銅CuS04 ? 5H200.025mg/L，氯化鈷(:〇(:12.611200.02511^/1;鐵鹽:乙二胺四乙酸二鈉恥2-￡01437.2511^/1，硫酸亞鐵？6304* 7H2〇27.85mg/L;有機(jī)酸:肌醇lOOmg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0.5mg/L，鹽酸卩比咳醇 0 ? 5mg/L，煙酸 0 ? 5mg/L;蔗糖30g/L，瓊脂粉 7g/L，pH為5 ? 7;[〇〇18] 所述的1/2MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN03950mg/L，硝酸銨NH4N03825mg/ L，磷酸二氫鉀KH2P0385mg/L，硫酸鎂MgS〇4 ? 7H20185mg/L;余同上述MS培養(yǎng)基；[〇〇19]所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；[〇〇2〇] 所述的NAA為a-萘乙酸；[〇〇21] 所述的IBA為吲哚-3-丁酸；[〇〇22]所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。[〇〇23] 優(yōu)選的，步驟3)中初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 15mg/L+NAA0 ? 015mg/L+ PVP6mg/L〇
[0024]優(yōu)選的，步驟4)中愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BAl.0mg/L+NAA0.04mg/L+PVP8mg/L。 [〇〇25] 優(yōu)選的，步驟5)中分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0 ? 3mg/L+NAA0 ? 3mg/L+ PVP8mg/L〇[〇〇26] 優(yōu)選的，步驟6)中生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0 ? 3mg/L+PVP8mg/L。
[0027]采用本發(fā)明繁殖金鈴花，可實(shí)現(xiàn)金鈴花組培苗的大量快速繁殖，為金鈴花生產(chǎn)栽培和品種改良奠定基礎(chǔ)。
[0028]為了更好的闡述技術(shù)方案，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍不限于下列實(shí)施例。【具體實(shí)施方式】
[0029]實(shí)施例1
[0030]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑10-20_的金鈴花枝條為外植體，剪去葉片后剪成 5-12cm的莖段；[〇〇31]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20KHz超聲波清洗中保持溫度30 °C處理30min，然后以自來水沖洗lOmin;隨后在超凈工作臺上以70%的酒精消毒25秒，0.5% 升汞溶液中處理5分鐘，然后以無菌水沖洗6遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0032]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體莖段各剪去3_5mm，莖段按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)6d 后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)18d至新芽長出； 所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? lmg/L+NAAO ? 01mg/L+PVP5mg/L;[〇〇33]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA0 ? 5mg/L+NAA0 ? 02mg/L+ PVP5mg/L；[〇〇34]5)分化和增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0 ? lmg/L+NAAO ? lmg/L+PVP5mg/L;[〇〇35]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)120d后生根，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0?lmg/L+PVP5mg/L;
[0036]7)煉苗和移栽:將有生根的金鈴花幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度85 %-95 %，適當(dāng)遮蔭即可。[〇〇37]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為89.2%。
[0038]實(shí)施例2
[0039]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑10-20_的金鈴花枝條為外植體，剪去葉片后剪成 5-12cm的莖段；
[0040]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的25KHZ超聲波清洗中保持溫度30-35 °C處理45min，然后以自來水沖洗20min;隨后在超凈工作臺上以75%的酒精消毒25-35秒， 〇.5 %升汞溶液中處理7分鐘，然后以無菌水沖洗8遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0041]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體莖段各剪去3-5mm，莖段按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)4d 后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12d至新芽長出； 所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 2mg/L+NAA0 ? 02mg/L+PVP10mg/L;
[0042]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d， 條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA2 ? Omg/L+NAAO ? 05mg/L+ PVP10mg/L；
[0043]5)分化和增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0 ? 5mg/L+NAA0 ? 5mg/L+PVP10mg/L;
[0044]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d后生根，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;所述生根用培養(yǎng)基為: 1/2MS+IBA0.5mg/L+PVP1Omg/L；
[0045]7)煉苗和移栽:將有生根的金鈴花幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度85 %-95 %，適當(dāng)遮蔭即可。
[0046]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為90.3%。[〇〇47]實(shí)施例3
[0048]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑10-20_的金鈴花枝條為外植體，剪去葉片后剪成5-12cm的莖段；[〇〇49]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的25KHz超聲波清洗中保持溫度30-35°C處理45min，然后以自來水沖洗20min;隨后在超凈工作臺上以75%的酒精消毒25-35秒， 〇.5 %升汞溶液中處理7分鐘，然后以無菌水沖洗8遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0050]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體莖段各剪去2-3mm，莖段按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)5d 后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)16d至新芽長出； 所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 15mg/L+NAA0 ? 015mg/L+PVP6mg/L;
[0051]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)18d， 條件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1 ? Omg/L+NAAO ? 04mg/L+ PVP8mg/L；[〇〇52]5)分化和增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)22d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述分化和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0 ? 3mg/L+NAA0 ? 3mg/L+PVP8mg/L;[〇〇53]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)18d后生根，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;所述生根用培養(yǎng)基為: 1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP8mg/L；[〇〇54]7)煉苗和移栽:將有生根的金鈴花幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度85 %-95 %，適當(dāng)遮蔭即可。
[0055]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為92.8%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟:1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑10-20mm的金鈴花半木質(zhì)化嫩枝枝條為外植體，剪去下 部葉片后剪成5-12cm的莖段；2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20KHz超聲波清洗機(jī)中保持溫度30-35 °C 處理30-45min，然后用自來水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消毒 20-30秒，0.5 %升汞溶液中處理5-7分鐘，然后以無菌水沖洗6-8遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體莖段各剪去3-5mm，莖段按末端向下插入初始誘導(dǎo)培 養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ±2°C ;培養(yǎng)4-6d后 將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長 出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 1-0 ? 2mg/L+NAA0 ? 01-0 ? 02mg/L+PVP5-10mg/ L；4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d，條 件為暗培養(yǎng)，溫度20°C ± 2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)SS:WPM+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.02-0.05mg/L+PVP5-10mg/L；5)分化和增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增殖產(chǎn) 生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述分化 和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0?1-0?5mg/L+NAA0?1-0?5mg/L+PVP 5-10mg/L;6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d后生 根，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;所述生根用培養(yǎng)基為: 1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L；7)煉苗和移栽:將有生根的金鈴花幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗3-5d后，取出幼 苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度85%-95%，適當(dāng) 遮蔭即可；所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；所述的NAA為a-萘乙酸；所述的IBA為吲哚-3-丁酸；所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟3)中初始誘 導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0 ? 15mg/L+NAA0 ? 015mg/L+PVP6mg/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟4)中愈傷組 織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1 ? 0mg/L+NAA0 ? 04mg/L+PVP8mg/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟5)中分化和 增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0 ? 3mg/L+NAA0 ? 3mg/L+PVP8mg/L。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種金鈴花快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟6)中生根用 培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0 ? 3mg/L+PVP8mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK105993943SQ201610340091
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月20日
【發(fā)明人】戴勤, 王冬梅, 李慧珍
【申請人】蕪湖歐標(biāo)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司