一種植物組織培養(yǎng)支持物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種植物組織培養(yǎng)支持物。該支持物包括干水苔和去離子水，干水苔與去離子水的體積比為(0.5～1):1。與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果是：操作簡(jiǎn)單；組織培養(yǎng)的成本低；節(jié)約能源；縮短工作時(shí)間，減輕工作強(qiáng)度，提高接種效率，減少污染機(jī)率；外植體生長(zhǎng)健壯，移栽成活率高；固定效果好；透氣性好；培養(yǎng)基使用周期長(zhǎng)；可使組培環(huán)境更接近植物的生理需求。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種植物組織培養(yǎng)支持物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種植物組織培養(yǎng)支持物。
【背景技術(shù)】
[0002]用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基物理狀態(tài)有液體和固體兩種類(lèi)型。液體培養(yǎng)基適于細(xì)胞培養(yǎng)，促進(jìn)細(xì)胞生物產(chǎn)量或代謝產(chǎn)物的增加。固體培養(yǎng)基多用于愈傷組織和試管苗等培養(yǎng)。支持物是指為了有利于植物外植體的生長(zhǎng)，人為添加到培養(yǎng)基中的、對(duì)外植體起支持作用的一些物質(zhì)。目前培養(yǎng)基的支持物多用瓊脂。瓊脂為多糖，本身并不提供任何營(yíng)養(yǎng)，它是一種從海藻中提取的高分子化合物。瓊脂僅溶于90°C以上的熱水，成為溶膠，40°C以下開(kāi)始凝固，成為固體狀凝膠。瓊脂的凝固程度與高溫滅菌的時(shí)間、溫度及培養(yǎng)基PH值等因素也有關(guān)系，長(zhǎng)時(shí)間的高溫滅菌會(huì)使瓊脂的凝固能力下降，過(guò)酸過(guò)堿加之高溫均會(huì)使瓊脂發(fā)生水解，從而失去凝固能力，通常，培養(yǎng)基的pH值在5.8時(shí)，瓊脂的凝固效果較好。近年來(lái)，有一些報(bào)道提到采用瓊脂糖、聚氨酯海綿、脫脂棉、玻璃球、玻璃棉、石英砂、蛭石、珍珠巖、壤土、河沙、濾紙、明膠、硅膠、丙烯酰胺、泡沫塑料等，甚至南瓜和馬鈴薯等做為植物組織培養(yǎng)的支持物。瓊脂糖的特點(diǎn)是，其屬于多糖，制備過(guò)程復(fù)雜，成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于瓊脂。瓊脂糖的凝膠強(qiáng)度高，一般用于單細(xì)胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)。脫脂棉易吸水、透氣效果好，其做支持物的培養(yǎng)基中愈傷組織生長(zhǎng)情況較好，也正是由于脫脂棉吸水性好，往往導(dǎo)致培養(yǎng)液量不足的現(xiàn)象而使外植體后期生長(zhǎng)不良；聚氨酯海綿做支持物時(shí)，外植體生長(zhǎng)旺盛，且成本低、省工省力，培養(yǎng)物根部無(wú)需用水沖洗可直接移入蔭棚，因此成活率較高，但也存在著由于吸收能力強(qiáng)而造成后期營(yíng)養(yǎng)液不足而影響外植體生長(zhǎng)的情況，且發(fā)現(xiàn)有玻璃體苗產(chǎn)生;蛭石、珍珠巖做支持物具有成本低、操作簡(jiǎn)單、外植體生長(zhǎng)基本良好等特點(diǎn)，但其不足是對(duì)外植體的固定效果不很好，這一點(diǎn)與玻璃球、玻璃棉、石英砂、壤土、河沙等相同。因此，本領(lǐng)域亟需一種透氣性好，移栽成活率高的培養(yǎng)基支持物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種植物組織培養(yǎng)支持物，采用水苔做為植物組織培養(yǎng)之培養(yǎng)基的支持物具有:外植體生長(zhǎng)健壯、移栽成活率高;成本低;操作簡(jiǎn)單；固定效果好;透氣性好等優(yōu)點(diǎn)。
[0004]為達(dá)到本發(fā)明的目的，采用的技術(shù)方案是:一種植物組織培養(yǎng)支持物，包括干水苔和去離子水，干水苔與去離子水的體積比為(0.5?I):1。優(yōu)選地，干水苔與去離子水的體積比為1:1。
[0005]采用上述支持物制作培養(yǎng)基，用如下方法:將干水苔與去離子水按一定比例放入容器中以使干水苔膨脹，備用;將膨脹水苔放置于培養(yǎng)瓶中，加入培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的加入量以剛沒(méi)過(guò)水苔即可。作為本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，所述的膨脹水苔的添加量為培養(yǎng)瓶體積的五分之一。
[0006]采用上述培養(yǎng)基支持物進(jìn)行植物組織培養(yǎng)的步驟如下:
[0007]S1.取預(yù)培養(yǎng)的植物外植體，使用大蒜水溶液進(jìn)行滅菌處理；
[0008]S2.將滅菌后的外植體進(jìn)行初代培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳初代培養(yǎng)基;
[0009]S3.在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳繼代培養(yǎng)基；
[0010]S4.在繼代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳生根培養(yǎng)基；
[0011 ] S5.篩選適宜的馴化移栽基質(zhì)及條件；
[0012]上述初代、繼代、生根培養(yǎng)基中均添加有膨脹水苔支持物，操作步驟如下:
[0013]a.制備膨脹水苔支持物，先在培養(yǎng)瓶中加入1/5體積量的膨脹水苔；
[0014]b.再向培養(yǎng)瓶中加入初代、繼代、生根培養(yǎng)基；
[0015]c.最后在培養(yǎng)基上接種外植體，封口，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
[0016]上述培養(yǎng)基可用于雙子葉植物的組織培養(yǎng)，單子葉植物的組織培養(yǎng)，生長(zhǎng)季和休眠季的葉芽、莖段、種子以及生長(zhǎng)季的嫩梢作外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，采用葉片作外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，外植體的初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，愈傷組織的懸浮培養(yǎng)。
[0017]進(jìn)一步地，上述初代培養(yǎng)基或繼代培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA、NAA、IBA、GA、蔗糖中一種或幾種。
[0018]優(yōu)選地，大蒜水溶液質(zhì)量濃度為30?50%。
[0019]在植物組織培養(yǎng)的科學(xué)研究和實(shí)際應(yīng)用中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)水苔也可以作為植物組織培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的支持物，并取得了很好的效果。水苔是一種天然的苔蘚，又名泥炭蘚(HerbaSphagni)，為泥炭蘚科植物。采用水苔作為培養(yǎng)基支持物可以帶來(lái)如下效果:
[0020]1.外植體生長(zhǎng)健壯，移栽成活率高。無(wú)論初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)還是生根培養(yǎng)，以水苔為支持物時(shí)，外植體的生長(zhǎng)均很健壯，移栽時(shí)成活率很高。
[0021]2.成本低。兩方面原因:一、與植物組培常用支持物瓊脂相比，水苔售價(jià)低。目前，市場(chǎng)價(jià)格，瓊脂的價(jià)格是水苔價(jià)格的3?5倍。而常規(guī)固體培養(yǎng)基，每100ml培養(yǎng)基，水苔的使用量在15?20g左右，瓊脂的使用量在7?1g左右。二、水苔還可以多次重復(fù)使用。瓊脂對(duì)存儲(chǔ)溫度和時(shí)間等條件因素有一定的要求，有的瓊脂會(huì)因存儲(chǔ)不適，發(fā)生一定的理化性質(zhì)改變，高溫高壓后其酸度增加，導(dǎo)致培養(yǎng)基不凝固，無(wú)法正常使用，從而產(chǎn)生浪費(fèi)，而水苔理化性質(zhì)穩(wěn)定，對(duì)存儲(chǔ)溫度和時(shí)間無(wú)嚴(yán)格要求，高溫高壓后PH無(wú)變化，不會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基性狀的改變。因此可以降低組培成本。
[0022]3.操作簡(jiǎn)單。與瓊脂做支持物相比，水苔做支持物時(shí)，可以減少溶解瓊脂的環(huán)節(jié)，亦可減少移栽前自組培苗根系清洗掉瓊脂的環(huán)節(jié)。
[0023]4.節(jié)省時(shí)間，減少污染。以瓊脂做支持物的培養(yǎng)基，無(wú)菌接種時(shí)，需將外植體扦插在培養(yǎng)基上，扦插工作的耗時(shí)一般約占整個(gè)接種時(shí)間的1/2?1/3。由于水苔培養(yǎng)基，介于固態(tài)和液態(tài)之間，接種時(shí)，只需將外植體均勻放置在培養(yǎng)基表面即可，這不僅可以節(jié)約接種時(shí)間，提高接種效率，還可以減少污染機(jī)率。
[0024]5.節(jié)約能源，縮短工作時(shí)間，減輕工作強(qiáng)度。制作瓊脂為支持物的培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂需溫度在95°C以上，熬煮15min以后，才能較好的融化，熬煮過(guò)程還需時(shí)刻觀察，否則容易潛。而制作水苔為支持物的培養(yǎng)基時(shí)，不需要熬煮，不僅可以節(jié)約能源，縮短工作時(shí)間，還可以減輕工作強(qiáng)度。
[0025]6.固定效果好。與玻璃球、玻璃棉、石英砂、壤土、河沙等相比，水苔做支持物對(duì)外植體的固定效果更好。發(fā)明人以煙草、黃芪為外植體，在玻璃球、玻璃棉、石英砂、壤土、河沙為支持物的培養(yǎng)基上做過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)接種完畢后，在從超凈工作臺(tái)移到培養(yǎng)室時(shí)，由于輕微的晃動(dòng)，以玻璃球、玻璃棉、石英砂、壤土、河沙為支持物中的外植體形成了傾斜，而以水苔為支持物的外植體則固定得很好。7.透氣性好。與瓊脂等支持物相比，水苔的透氣性更好，有利于外植體的生長(zhǎng)發(fā)育。發(fā)明人以蝴蝶蘭為外植體接種在分別以水苔和瓊脂為支持物的培養(yǎng)基上，結(jié)果以水苔為支持物時(shí)，蝴蝶蘭生長(zhǎng)勢(shì)要遠(yuǎn)好于瓊脂。因?yàn)楹m屬于好氧植物，在透氣性不良的介質(zhì)中生長(zhǎng)勢(shì)差，由此可以判斷水苔的透氣性好，更適合作為支持物。
[0026]8.使用水苔做支持物的培養(yǎng)基使用周期長(zhǎng)。與瓊脂做支持物的培養(yǎng)基相比，組培苗在需長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，水苔支持物的培養(yǎng)基失水慢，明顯優(yōu)于瓊脂培養(yǎng)基。
[0027]9.水苔做支持物的培養(yǎng)基可使組培環(huán)境更接近植物的生理需求。瓊脂培養(yǎng)基需調(diào)節(jié)pH值在5.8左右，pH低于5.6則培養(yǎng)基不凝固，所以，對(duì)于有些生長(zhǎng)環(huán)境要求較高pH值的植物，在組培時(shí)，利用瓊脂培養(yǎng)基，其長(zhǎng)勢(shì)會(huì)受到影響。而利用水苔培養(yǎng)基時(shí)，可以根據(jù)植物對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的要求，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值，使組培環(huán)境更接近植物的生理需求。
[0028]10.無(wú)菌接種時(shí)，瓊脂培養(yǎng)基，需將培養(yǎng)物扦插在培養(yǎng)基上，而常規(guī)操作下，扦插工作的耗時(shí)，一般約占整個(gè)接種時(shí)間的1/2?1/3ο由于水苔培養(yǎng)基，介于固態(tài)和液態(tài)之間，接種時(shí)，只需將培養(yǎng)物均勻放置在培養(yǎng)基表面即可，這不僅可以節(jié)約接種時(shí)間，提高接種效率，還可以減少污染機(jī)率。
[0029]與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果是:水苔是一種天然的泥炭蘚，理化性質(zhì)穩(wěn)定，透氣性好，以水苔為支持物的移栽成活率可以達(dá)到95%以上，而以瓊脂為支持物的成活率只能達(dá)到90%左右。對(duì)植物無(wú)害，采用水苔作為植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基支持物具有綜合優(yōu)勢(shì)，表現(xiàn)為:操作簡(jiǎn)單;組織培養(yǎng)的成本低;節(jié)約能源;縮短工作時(shí)間，減輕工作強(qiáng)度，提高接種效率，減少污染機(jī)率;外植體生長(zhǎng)健壯，移栽成活率高；固定效果好;透氣性好;培養(yǎng)基使用周期長(zhǎng);可使組培環(huán)境更接近植物的生理需求。
【具體實(shí)施方式】
[0030]下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。下述實(shí)施例中如無(wú)特殊說(shuō)明，所采用的實(shí)驗(yàn)方法均為常規(guī)方法，所用材料、試劑等均可從化學(xué)公司購(gòu)買(mǎi)。
[0031]下述初代、繼代、生根培養(yǎng)基中均添加有膨脹水苔支持物，操作步驟如下:
[0032]a.制備膨脹水苔支持物，將干水苔與去離子水按體積比為1:1放入容器中以使干水苔膨脹，備用;將膨脹水苔放置于培養(yǎng)瓶中，添加量為培養(yǎng)瓶體積的五分之一；
[0033]b.再向培養(yǎng)瓶中加入初代、繼代、生根培養(yǎng)基，加入量以剛沒(méi)過(guò)水苔即可；
[0034]c.在制作好的培養(yǎng)基上接種外植體，封口，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
[0035]實(shí)施例1:
[0036]選雙子葉植物短莖藤本月季的葉芽，流水沖洗后，剝?nèi)ト~芽外的鱗片，將芽放在1:1 (W/V)大蒜水溶液滅菌30min，然后立即接種在短莖藤本月季的最適初代培養(yǎng)培養(yǎng)基中(MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+3 %蔗糖)。30d后將萌發(fā)出的葉芽莖段扦插在最適繼代培養(yǎng)基(MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+2 %蔗糖)中培養(yǎng)。30d后將繼代培養(yǎng)苗移入最佳生根培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA0.2mg/L+IBAl.0mg/L+2%蔗糖)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0037]實(shí)施例2:
[0038]選雙子葉植物“紅燈”甜櫻桃的具有一個(gè)葉芽莖段，流水沖洗后，剝?nèi)ト~芽外的鱗片和莖段的表皮，將具有葉芽的一段莖放入到1:1 (W/V)大蒜水溶液滅菌30min，然后立即接種在“紅燈”甜櫻桃的最適初代培養(yǎng)培養(yǎng)基中(MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.lmg/L+3%蔗糖)o30d后將萌發(fā)出的葉芽莖段扦插在最適繼代培基(2/3MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.3mg/L+GAl.5+2%蔗糖)中培養(yǎng)。40d后將繼代培養(yǎng)苗移入最佳生根培養(yǎng)基(1/2MS+IBA0.5mg/L+2 %蔗糖)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。實(shí)施例3:
[0039]選雙子葉植物甘草的種子，經(jīng)98%濃硫酸處理lh，軟化堅(jiān)硬的種皮，然后用自來(lái)水充分沖洗干凈。在無(wú)菌操作臺(tái)下用0.1%的氯化汞消毒lOmin，用無(wú)菌水沖洗3?4次，然后用75%乙醇消毒40s，再用無(wú)菌水沖洗3?4次。初代培養(yǎng)(或接種)的最佳培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，黑暗條件下培養(yǎng)I?2周，然后再進(jìn)行光照培養(yǎng)一個(gè)月。培養(yǎng)帶葉莖段直接生根成苗的最佳培養(yǎng)基是:MS+13.5mg/L KH2P04+3%蔗糖。生根成苗選擇直接在繼代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上生長(zhǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0040]實(shí)施例4:
[0041 ]選雙子葉植物“晚紅珠”甜櫻桃的嫩梢，流水下沖洗Ih，在50 %大蒜水溶液浸泡15min，然后接種在最適初代培養(yǎng)基(MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.lmg/L+3 %蔗糖)中，30d后將嫩梢萌發(fā)出的莖段接種在最適的繼代增殖培養(yǎng)基(2/3MS+6-BA0.5mg/L+IBA 0.3mg/L+GAl.5+2%蔗糖)上;40d后將繼代培養(yǎng)苗移入最佳生根培養(yǎng)基(MS+6-BA0.lmg/L+IBA0.5mg/L+2%蔗糖)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0042]實(shí)施例5:
[0043]選雙子葉植物普通煙草的葉片，取葉色正常、生長(zhǎng)健康的大葉片，流水沖洗lh，浸泡在50%大蒜溶液中5min。在超凈工作臺(tái)內(nèi)將葉片剪成Icm2的正方形片狀，并在中間葉脈部位切數(shù)個(gè)傷口(不切斷)，之后用鑷子將處理好的外植體平放接種在愈傷組織培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0mg/L+IBA0.2mg/L+3 %蔗糖)上，進(jìn)行愈傷組織增殖培養(yǎng)，待愈傷組織生長(zhǎng)到一定大小時(shí)，切割并繼續(xù)接種到愈傷組織培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。
[0044]實(shí)施例6:
[0045]選單子葉植物蝴蝶蘭的花梗側(cè)芽(即葉芽)，流水沖洗Ih，浸泡在50%大蒜溶液中20min，接種在適宜的初代培養(yǎng)基(MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+3 %蔗糖)上，30d后將萌發(fā)出的花梗側(cè)芽接種在適宜的增殖培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA8.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+香蕉泥30g/L+活性炭2g/L)上，30d后再接種在適宜的生根培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA4.0mg/L+NAA
0.8mg/L+蔗糖30g/L+香蕉泥30g/L+活性炭2g/L)上。至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到水苔基質(zhì)中生長(zhǎng)。
[0046]實(shí)施例7:
[0047]選單子葉植物胡蘿卜的莖段，流水沖洗后，將具芽莖段放入到30%大蒜水溶液滅菌1min，然后立即接種在適宜初代培養(yǎng)培養(yǎng)基中(MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.3mg/L+2 %蔗糖)。20d后將萌發(fā)出的葉芽莖段扦插在適宜的繼代培基(MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+2 %蔗糖)中培養(yǎng)。20d后將繼代培養(yǎng)苗移入適宜生根培養(yǎng)基(MS+6-BA0.lmg/L+NAAl.0mg/L+2%蔗糖)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0048]實(shí)施例8:
[0049]選單子葉植物玉米的種子，流水沖洗后浸泡在30%大蒜水溶液中1min，接種在含MS培養(yǎng)液的水苔培養(yǎng)基上，至長(zhǎng)出良好的莖葉和根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0050]實(shí)施例9:
[0051 ]選單子葉植物芹菜的嫩梢，流水沖洗Ih，在30 %大蒜水溶液浸泡1min，然后接種在初代培養(yǎng)基(MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+3 %蔗糖)中，20d后將嫩梢萌發(fā)出的莖段接種在繼代增殖培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.lmg/L+2 %蔗糖)上;20d后將繼代培養(yǎng)苗移入生根培養(yǎng)基(MS+6-BA0.lmg/L+NAAl.0mg/L+2 %蔗糖)中進(jìn)行生根培養(yǎng)，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0052]實(shí)施例10:
[0053]選單子葉植物蝴蝶蘭的葉片，流水沖洗lh，浸泡在30%大蒜溶液中5min。在超凈工作臺(tái)內(nèi)將葉片剪成Icm2的正方形，然后用將處理好的正方形葉片平放接種在愈傷組織培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.5mg/L+IBA0.4mg/L+2%蔗糖)上，進(jìn)行愈傷組織增殖培養(yǎng)，待愈傷組織生長(zhǎng)到一定大小時(shí)，切割并繼續(xù)接種到愈傷組織培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。
[0054]實(shí)施例11
[0055]選雙子葉植物“豆瓣綠”的葉片作為外植體，流水沖洗Ih，浸泡在30%大蒜溶液中5min。在超凈工作臺(tái)內(nèi)將葉片剪成Icm2的正方形，然后用將處理好的正方形葉片平放接種在初代培養(yǎng)基(MS+6-BA0.3mg/L+NAA 0.5mg/L+3%蔗糖)上，培養(yǎng)出愈傷組織后，將愈傷組織轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基(2/3MS+6-BA 0.5mg/L+IBA0.3mg/L+GAl.5+2%蔗糖)中，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)出芽后，轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基(1/2MS+NAA0.5mg/L+蔗糖3% )中，至長(zhǎng)出良好的根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0056]實(shí)施例12
[0057]選雙子葉植物普通煙草的葉片，取葉色正常、生長(zhǎng)健康的大葉片，流水沖洗Ih，浸泡在50%大蒜溶液中5min。在超凈工作臺(tái)內(nèi)將葉片剪成lcm2的正方形片狀，并在中間葉脈部位切數(shù)個(gè)傷口(不切斷)，之后用鑷子將處理好的外植體平放接種在愈傷組織培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0mg/L+IBA0.2mg/L+3 %蔗糖)上，進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)，待愈傷組織誘導(dǎo)出來(lái)后，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0mg/L+IBA0.2mg/L+蔗糖3%，注:繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基相同)上，至長(zhǎng)出良好的芽和根系后轉(zhuǎn)移到珍珠巖和沙土上進(jìn)行馴化，最后移栽在中性壤土中。
[0058]參考文獻(xiàn)
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【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種植物組織培養(yǎng)支持物，其特征在于，包括干水苔和去離子水，干水苔與去離子水的體積比為(0.5?I):1。2.—種用權(quán)利要求1所述的支持物制作培養(yǎng)基，其特征在于，方法如下:將干水苔與去離子水按一定比例放入容器中以使干水苔膨脹，備用;將膨脹水苔放置于培養(yǎng)瓶中，加入培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的加入量以剛沒(méi)過(guò)水笞即可。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的膨脹水苔的添加量為培養(yǎng)瓶體積的五分之一。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，該培養(yǎng)基能用于雙子葉植物的組織培養(yǎng)，單子葉植物的組織培養(yǎng)，生長(zhǎng)季和休眠季的葉芽、莖段、種子以及生長(zhǎng)季的嫩梢作外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，采用葉片作外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，外植體的初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和愈傷組織的懸浮培養(yǎng)。5.—種用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基支持物進(jìn)行植物組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括如下步驟: 51.取預(yù)培養(yǎng)的植物外植體，使用大蒜水溶液進(jìn)行滅菌處理； 52.將滅菌后的外植體進(jìn)行初代培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳初代培養(yǎng)基； 53.在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳繼代培養(yǎng)基； 54.在繼代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行生根培養(yǎng)，并進(jìn)行培養(yǎng)基的篩選，確定最佳生根培養(yǎng)基； 55.篩選馴化移栽基質(zhì)及移栽條件； 上述初代、繼代、生根培養(yǎng)基中均添加有膨脹水苔支持物，具體如下: a.制備膨脹水苔支持物，先在培養(yǎng)瓶中加入1/5體積量的膨脹水苔； b.再向培養(yǎng)瓶中加入初代、繼代、生根培養(yǎng)基； c.最后在培養(yǎng)基上接種外植體，封口，于培養(yǎng)室中培養(yǎng)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的初代培養(yǎng)基或繼代培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中添加6-BA、NAA、IBA、GA、鹿糖中一種或幾種。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述步驟SI中，大蒜水溶液質(zhì)量濃度為30?50 %。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105993961SQ201610602204
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月28日
【發(fā)明人】侯義龍
【申請(qǐng)人】大連大學(xué)